中国博士后科学基金(20070420766)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 相关作者：王伟民戴学军林健王建业赵刚更多>>
- 相关机构：广州军区广州总医院基因技术股份有限公司更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肿瘤免疫基因治疗策略的临床应用及评价
- 2010年
- 戴学军王伟民
- 关键词：免疫基因治疗肿瘤基因转导目的基因
- 白介素-18基因修饰人脑胶质瘤U87/hIL-18细胞的建立被引量：1
- 2009年
- 目的构建人白介素18(hIL-18)基因真核表达载体质粒,建立hIL-18基因修饰并呈稳定表达的人脑胶质瘤U87/hIL-18细胞。方法从人淋巴细胞cDNA文库钓取hIL-18基因后行PCR扩增,利用pcDNA3.1(+)质粒为载体,构建hIL-18真核表达质粒pcDNA3.1/hIL-18。将构建的重组质粒转染人胶质瘤细胞U87,采用G418筛选单克隆细胞株,ELISA检测培养上清中的hIL-18蛋白含量,提取细胞RNA,RT-PCR方法检测hIL-18基因在U87/hIL-18细胞中的表达。结果所得hIL-18cDNA序列与Gene Bank比对一致,构建的质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确。质粒转染U87细胞后,经加压筛选获得hIL-18基因稳定、高效表达的U87/hIL-18单克隆细胞株,细胞培养72h的上清中,hIL-18蛋白含量达131.2pg/ml,且RT-PCR结果显示细胞中hIL-18基因表达呈阳性。结论成功构建hIL-18真核表达质粒pcDNA3.1/hIL-18,并建立U87/hIL-18单克隆细胞株,为hIL-18基因修饰的胶质瘤疫苗研究打下了基础。
- 戴学军袁振华林健徐敏敏赵刚王建业王伟民
- 关键词：神经胶质瘤白细胞介素18质粒U87细胞
- 人脑胶质瘤U87-hIL18-TK活疫苗的构建
- 2010年
- 目的制备hIL-18和TK双基因修饰的人脑胶质瘤活疫苗,检测HSV-TK/GCV系统对疫苗的体外调控作用。方法采用表达HSV-TK基因的慢病毒液感染U87-hIL18细胞,经G418和BSD抗性基因筛选获得U87-hIL18-TK单克隆细胞株,扩增传代获得双基因修饰疫苗,Elisa检测疫苗上清IL-18浓度,RT-PCR检测疫苗TK基因表达,MTT法检测更昔洛韦(GCV)对体外培养疫苗的杀伤效应。结果 TK基因成功转导入U87-hIL18细胞中,获得稳定表达IL-18、TK基因的U87-hIL18-TK胶质瘤活疫苗,体外杀伤效应显示10μg/mlGCV对活疫苗的杀伤率达90.3%。结论成功构建免疫基因和自杀基因共同修饰的胶质瘤活细胞疫苗,其在体内的安全性及免疫效能有待进一步研究。
- 戴学军徐敏敏林健曹晖王伟民
- 关键词：神经胶质瘤自杀基因免疫基因活疫苗
