国家自然科学基金(30971268)
- 作品数：11 被引量：29H指数：3
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- 非酒精性脂肪肝发病机制的研究进展被引量：10
- 2017年
- 非酒精性脂肪肝（NAFLD）正迅速成为一个严重的全球性健康问题,随着肥胖和2型糖尿病的流行,其患病率迅速上升。NAFLD包括一系列肝脏疾病,其主要特征是肝脏三酰甘油（TG）的大量蓄积,在不存在炎症和肝细胞损伤的情况下,这种情形被称为单纯性脂肪肝,一般认为是良性的。
- 汪江波袁旭张瑞袁中华
- 关键词：非酒精性脂肪肝代谢综合征肝细胞癌纤维化
- Adipophilin介导脂质蓄积及炎症反应的研究进展
- 2013年
- 脂质蓄积与炎症反应在动脉粥样硬化中发挥关键作用,两者相互促进,相互影响。而Adipophilin作为胞浆脂滴的一种不完全包被蛋白,不仅可以作为动脉粥样硬化脂质蓄积的一种标记物,而且能够促进脂质蓄积、抑制细胞内胆固醇外流,并介导TNF-α、MCP-1和IL-6等炎症介质分泌,其表达受核受体、脂肪酸、修饰脂蛋白、激素类物质等多种因素的调控。本文就Adipophilin在脂质蓄积与炎性反应中的作用及其调控做一简要综述,为通过调控Adipophilina防治动脉粥样硬化提供新的思路。
- 陶媛郭东铭袁中华
- 关键词：ADIPOPHILIN脂滴脂质蓄积炎症反应动脉粥样硬化
- 脂肪分化相关蛋白通过抑制中性胆固醇酯水解酶表达促进RAW264.7细胞内脂质积蓄被引量：3
- 2018年
- 目的 探讨RAW264.7巨噬细胞中脂肪分化相关蛋白（adipophilin）调控中性胆固醇酯水解酶（nCEH）表达进而介导脂质积蓄的作用机制。方法 用已成功构建的沉默与高表达Adipophilin的逆转录病毒质粒载体转染包装细胞PA317,继而收集病毒液感染RAW264.7巨噬细胞,筛选出Adipophilin沉默细胞株和高表达细胞株。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹分析技术（Western blot）分别检测nCEH的mRNA和蛋白表达水平,液体闪烁计数仪、高效液相色谱法检测细胞内胆固醇流出及胆固醇酯含量。结果 （1）高表达Adipophilin的细胞组胆固醇、胆固醇酯含量明显高于空白对照组（P〈0.01）,而沉默Adipophilin表达的细胞组则显著低于空白对照组（P〈0.01）,Adipophilin可抑制nCEH mRNA和蛋白的表达。（2）用100 nmol/L蛋白激酶Cδ（PKCδ）激动剂佛波酯（PMA）孵育高表达Adipophilin的RAW264.7细胞30 min后,nCEH的mRNA与蛋白表达水平明显降低（P〈0.05）,而用100 nmol/L PKCδ抑制剂卡马拉素（Rottlerin）同样孵育30 min后,nCEH的表达水平较对照组增高（P〈0.05）。结论 Adipophilin促进巨噬细胞内脂质积蓄可能通过抑制nCEH表达来实现,在这一调控机制中PKCδ发挥了重要作用。
- 袁旭孟磊陈雁斌张瑞袁中华
- 关键词：脂肪分化相关蛋白动脉粥样硬化
- Calphostin C抑制脂肪分化相关蛋白诱导的ACAT1表达被引量：1
- 2012年
- 目的我们已经发现adipophilin通过改变乙酰辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)的表达来促进细胞内脂质蓄积,病理状态下形成泡沫细胞,成为动脉粥样硬化的始动因素。本研究旨在探讨该过程所涉及的信号通路,阐明adipophilin引起细胞内脂质积聚的机制。方法通过克隆adipophilin基因,构建逆转录病毒载体pQCXIP-HA-Adi,使用siRNA技术构建pSuper-retro-adipophilin siRNA逆转录病毒载体,包装病毒后,感染RAW264.7细胞,筛选后获得高或低表达adipophilin的细胞。将该细胞分别与300 nmol/L PKC抑制剂Calphostin C孵育16 h或同时再加入50 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育,应用RT-PCR和Western blot检测细胞内ACAT1的表达。当低表达adipophilin的细胞与Calphostin C共孵育时,在不同的时间点取样,RT-PCR和Westernblot检测各时间点细胞内ACAT1的表达。结果高表达adipophilin细胞中ACAT1表达增加,低表达adipophilin细胞中ACAT1表达减少。无论在高或低表达adipophilin的细胞中,Calphostin C能够抑制ACAT1的表达,与不孵育Calphostin C组相比差别有显著性。与ox-LDL孵育使高表达adipophilin的细胞荷脂,同样能够发现Calphostin C抑制ACAT1的表达。低表达adipophilin的细胞与Calphostin C共孵育1 h后,ACAT1 mRNA开始下降;孵育8 h后,ACAT1蛋白开始下降;孵育16 h后ACAT1 mRNA及蛋白表达均明显下降,与对照组相比差别有显著性。高及低表达adipophilin或负荷脂质状态下,Calphostin C能够时间依赖性的抑制ACAT1的表达。结论 adipophilin引起细胞内脂质积聚的机制可能是,PKC信号分子作用于adipophilin,并进一步影响ACAT1的表达,最终导致细胞内脂质积聚。
- 袁中华陶媛刘清南黄谙非刘晓辉田国平唐朝克易光辉王佐
- 关键词：脂肪分化相关蛋白乙酰辅酶A
- 与细胞脂质蓄积有关的蛋白Adipophilin被引量：1
- 2011年
- 动脉粥样硬化性疾病发生发展的关键环节就是单核巨噬细胞和平滑肌细胞脂质的蓄积（包括甘油三酯、胆固醇酯和胆固醇）所导致的泡沫细胞的形成。在泡沫细胞中,这些蓄积的脂质主要以脂滴的形式储存于胞浆中,adipophilin就是脂滴外周含量最高的一种不完全包被蛋白。
- 刘志强袁中华
- 关键词：ADIPOPHILIN脂质蓄积
- 高表达和敲减adipophilin对细胞内ERK1/2活性、PPARγ表达和细胞内脂质蓄积的影响(英文)被引量：3
- 2011年
- 本课题组以前的研究表明,adipophilin通过ERK1/2-PPARγ信号转导通路促进细胞内的脂质蓄积.为了研究高表达和敲减adipophilin是否影响RAW264.7细胞内ERK1/2的活性、PPARγ的表达以及细胞内的脂质蓄积,从而进一步证实这一通路,阐明adipophilin促进泡沫细胞形成的机制.重组pQCXIP-HA-Adipophilin和pSuper-retro-adipophilin siRNA逆转录病毒载体经酶切检测证实,并用SofastTM介导转染到包装细胞PA317中,经培养后释放逆转录病毒.将收集的逆转录病毒感染RAW264.7细胞,经嘌呤霉素筛选后获得稳定高表达和敲减adipophilin的细胞系.用50 mg/L的氧化低密度脂蛋白处理细胞24 h后,用油红O染色法和高效液相色谱法测定细胞内的脂质蓄积情况,用半定量RT-PCR和蛋白质印迹分别检测adipophilin和PPARγ的mRNA和蛋白质的表达,用蛋白质印迹对与动脉粥样硬化发病有关的ERK1/2及其磷酸化进行检测.酶切结果表明,pQCXIP-HA-Adipophilin和pSuper-retro-adipophilin siRNA重组逆转录病毒载体构建成功.在荷脂情况下,pQCXIP-HA-Adipophilin转染的细胞能明显增加细胞内的脂质蓄积,但使PPARγ的表达和ERK1/2的磷酸化下调,这些作用可被adipophilin siRNA逆转.结果表明,adipophilin与泡沫细胞的形成有关,adipophilin可能是通过ERK1/2-PPARγ途径促进细胞内的脂质蓄积.
- 刘清南戴志兵刘志强唐朝克田国平戴肖松何求叶玲袁中华
- 关键词：ADIPOPHILIN细胞外信号调节激酶1/2过氧化物酶体增殖物激活受体Γ
- PAT家族蛋白研究进展被引量：5
- 2012年
- PAT家族蛋白(PAT)是脂质代谢中的一类小蛋白分子,它们定位于细胞质脂滴的表面,介导着脂质代谢。PAT家族蛋白并不直接参与脂质的合成和分解,它们通过与其它分子的相互作用而介导脂质代谢。本文将阐述PAT家族蛋白的发现、命名和成员组成,并重点介绍成员围脂滴蛋白(perilipin)和脂肪分化相关蛋白(adi-pophilin,ADRP)的代谢调控和与其它分子的相互作用。
- 刘志强刘清南陶媛郭东铭袁中华
- 关键词：PERILIPINADIPOPHILIN
- Adipophilin和NCEH在动脉粥样硬化中作用的研究进展被引量：2
- 2013年
- Adipophilin作为一种脂肪分化相关蛋白分布在脂滴表面,是脂质蓄积的特异性标记物,其过度表达可能促进细胞内胆固醇酯的蓄积,与动脉粥样硬化、病理性肥胖、胰岛素抵抗等病理过程密切相关。中性胆固醇酯水解酶(NCEH)是一种微粒体酶,可以在中性pH值环境中发挥胆固醇酯水解作用,在胆固醇逆向转运中发挥限速作用,在人类动脉粥样斑块区大量表达。Adipophilin与NCEH是细胞内脂滴形成和水解过程中起相反作用的两个蛋白,参与维持脂滴形成与水解的动态平衡。当机体受病理因素影响时,Adipophilin与NCEH之间的动态平衡被打破,细胞内胆固醇酯大量蓄积,导致动脉粥样硬化的发生发展。然而,目前关于Adipophilin和NCEH两者在脂滴的合成与水解中的相关机制及其在动脉粥样硬化发生中的具体作用尚不清楚,本文拟对该问题进行综述。
- 郭东铭陶媛袁中华
- 关键词：ADIPOPHILIN脂滴动脉粥样硬化
- Adipophilin通过ERK1/2-AP-1途径诱导炎症因子的表达被引量：3
- 2015年
- 目的:观察巨噬细胞中脂肪分化相关蛋白(adipophilin)对炎症因子表达的影响,阐明adipophilin促进巨噬细胞炎症因子表达的机制。方法:将已构建成功的adipophilin稳定高、低表达逆转录病毒载体转染入PA317包装细胞,制备adipophilin高和低表达的RAW264.7细胞;收集已转染成功的各组细胞上清液,用ELISA方法检测IL-6、TNF-α、MCP-1等炎症因子在细胞培养液中的浓度。Western blot检测各组细胞AP-1、p-AP-1、ERK1/2及p-ERK1/2的蛋白水平;用ERK1/2抑制剂PD98059或AP-1抑制剂curcumin孵育细胞,检测各组细胞中以上指标的变化情况。结果:高表达adipophilin的细胞上清液中炎症因子IL-6、MCP-1和TNF-α浓度明显增高,adipophilin siRNA组细胞中的炎症因子降低;高表达adipophilin的细胞中p-ERK1/2和p-AP-1的蛋白水平增高,adipophilin siRNA组则减少;ERK1/2抑制剂PD98059使AP-1蛋白活性明显下调;给予AP-1抑制剂curcumin后,细胞培养液中的IL-6、MCP-1和TNF-α浓度明显下降。结论:Adipophilin在RAW264.7巨噬细胞中能够促进炎症因子的表达。
- 袁中华谭艳美陶媛汪江波郭东铭王佐唐朝克田国平
- 关键词：ADIPOPHILIN炎症因子ERK1/2AP-1
- 巨噬细胞荷脂过程中脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1及中性胆固醇酯水解酶相互结合被引量：2
- 2014年
- 目的探讨脂肪分化相关蛋白是否与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1或中性胆固醇酯水解酶相互结合。方法 50 mg/L氧化型低密度脂蛋白孵育RAW264.7细胞0、0.5、1、3、6 h,使用逆转录-聚合酶链反应及蛋白免疫印迹分析技术检测脂肪分化相关蛋白、酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1和中性胆固醇酯水解酶的mRNA及蛋白的表达;应用免疫共沉淀技术检测脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1或中性胆固醇酯水解酶是否相互结合。结果随着氧化型低密度脂蛋白与RAW264.7细胞孵育时间的延长,逆转录-聚合酶链反应和蛋白免疫印迹分析显示,脂肪分化相关蛋白、酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1和中性胆固醇酯水解酶的mRNA和蛋白质随着时间的延长而增多,与0 h相比,差异有显著性(P<0.05,n=3)。免疫共沉淀实验显示,RAW264.7细胞与氧化型低密度脂蛋白孵育0、0.5、1、3 h时脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1结合,6 h时脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1不结合;孵育0、0.5、1 h时脂肪分化相关蛋白与中性胆固醇酯水解酶不结合,3、6 h时与中性胆固醇酯水解酶结合。结论在荷脂的RAW264.7细胞中脂肪分化相关蛋白与中性胆固醇酯水解酶及酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1相互结合。脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1和中性胆固醇酯水解酶在细胞内脂质代谢中可能协同作用。
- 乔运成彭娟刘志强郭东铭袁中华
- 关键词：脂肪分化相关蛋白酰基辅酶A巨噬细胞
