广西壮族自治区自然科学基金(2010GXNSFD013053)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
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- CXCL1基因重组慢病毒表达载体的构建及鉴定
- 2013年
- 目的:采用第2代慢病毒表达载体系统,构建CXCL1基因的慢病毒表达载体,摸索出较传统转染方法更为高效、可靠的转基因方法,为今后进一步的基因靶向治疗研究打下良好的基础。方法:首先扩增CXCL1全长序列,将其与慢病毒载体pWPI连接后测序,通过BLAST检索,鉴定慢病毒表达载体构建成功。将重组慢病毒质粒转染293T细胞,48h后荧光显微镜鉴定,慢病毒转染并包装成功。结果:重组慢病毒质粒CXCL1-pWPI测序结果经BLAST对比分析,与CXCL1基因的同源性达100%。结论:成功的构建了CXCL1基因的重组慢病毒表达系统。
- 张玮黄宁李力王琪
- 关键词：慢病毒载体
- 黑色素瘤生长趋化因子1对卵巢癌细胞生物学功能的影响被引量：5
- 2013年
- 目的探讨黑色素瘤生长趋化因子1（CXCL1）基因在卵巢癌细胞生物学功能中的作用。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT．PCR）扩增CXCL1基因全长序列，并构建其表达的重组慢病毒表达载体。采用RT—PCR和酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测慢病毒介导的卵巢癌A2780细胞中CXCL1mRNA和蛋白表达情况；采用四甲基偶氮唑蓝（MrITI．）法、流式细胞术和显微镜下计数集落数法测定细胞生长曲线、细胞生长周期和细胞集落形成情况；采用Transwe11小室和Migration侵袭方法测定细胞体外的迁移和侵袭能力。结果测序结果显示，重组慢病毒质粒CXCL1-PWPI与CXCL1基因的同源性达100％。lit-PCR和ELISA法检测结果显示，A2780细胞经CXCL1-PWPI转染后，CXCL1mRNA和蛋白表达呈阳性。A2780组、PWPI组和CXCL1-PWPI组的细胞集落形成率分别为22．3％、26．5％和37．2％（P〈0．05），G1期细胞分别为62．7％、61．4％和44．0％（P〈0．001）。CXCL1-PWPI组与A2780组和PWPI组比较，其细胞迁移能力差异无统计学意义（P〉0．05），但侵袭能力差异有统计学意义（P〈0．05）。结论CXCL1基因具有促进卵巢癌A2780细胞增殖和侵袭的能力。
- 张玮黄宁王琪阳志军李力
- 关键词：卵巢肿瘤肿瘤侵袭肿瘤转移
- TIZ基因表达下调对卵巢上皮性癌细胞生物学行为影响的体外实验研究
- 2012年
- 目的探讨通过RNA干扰技术沉默TIZ基因的表达对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞生物学行为的影响。方法设计3对特异性针对TIZ基因的小分子干扰RNA（siRNA），并转染人TIZ基因表达阳性的卵巢癌SKOV3细胞中，采用实时荧光定量PCR（QRT．PCR）技术检测siRNA片段对TIZ基因的沉默率，筛选最佳沉默率的siRNA片段构建pGPU6／GFP／Neo—siRNA—TIZ．573重组干扰质粒，采用脂质体转染法将重组干扰质粒转染人SKOV3细胞（sh—TIZ-573／SKOV3细胞），并设阴性对照细胞sh—NC／SKOV3、阳性对照细胞sh—GA／SKOV3。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞生长曲线，集落形成实验测定细胞生长能力，流式细胞仪检测细胞周期，细胞体外侵袭重建基膜实验、穿膜小室实验和体外黏附实验分别测定细胞体外侵袭、转移及黏附能力。结果QRT—PCR技术检测显示，TIZ-573siRNA片段下调TIZ基因表达的作用最明显，沉默率达62％，且成功构建pGPU6／GFP／Neo—siRNA．TIZ-573重组干扰质粒并导人SKOV3细胞中使TIZ基因表达沉默。细胞生长曲线显示，TIZ基因表达沉默后的sh—TIZ-573／SKOV3细胞较对照细胞生长加快。sh—TIZ-573／SKOV3细胞在G。／G1期所占比例（34．9％）比sh-NC／SKOV3、sh—GA／SKOV3细胞少（分别为68．8％、63。4％），分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。细胞集落形成实验显示，sh—TIZ-573／SKOV3细胞的集落形成率[（89．1±4．6）％]高于sh—GA／SKOV3、sh—NC／SKOV3细胞[（60．8±4．9）％、（57．0±2．6）％]，分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。sh—TIZ-573／SKOV3细胞的侵袭率、转移率和黏附率分别为（48．5±1．7）％、（53．6±3．4）％、（64．9±5．0）％，在TIZ基因沉默前后侵袭、转移和黏附能力无明显改变（P〉0．05）。结论下调TIZ基因的表达对卵巢癌细胞生长有一定的促进作用，其�
- 赵冰冰张玮阳志军王琪李力
- 关键词：卵巢肿瘤载体蛋白质类体外研究
- TIZ基因过表达对卵巢上皮癌细胞生物学特性的影响被引量：3
- 2012年
- 目的:探讨TIZ基因过表达对卵巢上皮癌细胞生物学特性的影响。方法:采用反转录(reverse transcription,RT)-PCR法从人卵巢癌组织总RNA中扩增TIZ基因的cDNA全长序列,与pcDNA3.1/myc-his(-)C质粒载体连接构建重组质粒;采用脂质体转染法将重组质粒pcDNA3.1/myc-his(-)C-TIZ(+)转染入卵巢上皮癌细胞HO8910中;分别采用MTT法和集落形成实验测定细胞的增殖能力;FCM法检测细胞周期;细胞体外侵袭重建基膜实验、Transwell小室实验和体外黏附实验分别测定细胞的体外侵袭、转移及黏附能力。结果:从卵巢癌组织中扩增获得了TIZ基因全长序列,并成功构建pcDNA3.1/myc-his(-)C-TIZ(+)重组质粒,测序证实插入片段序列正确。细胞生长曲线、细胞周期和细胞集落测定实验显示,pcDNA3.1/myc-his(-)C-TIZ(+)-HO8910细胞与对照组细胞相比较,其细胞增殖受到明显抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞体外侵袭、转移及黏附能力测定实验结果显示,HO8910细胞在TIZ基因过表达前后其侵袭、迁移和黏附能力无明显改变,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TIZ基因过表达对卵巢上皮癌细胞生长、增殖有一定的抑制作用,可能发挥抑癌基因的生物学作用。
- 赵冰冰张玮王琪阳志军李力
- 关键词：卵巢肿瘤锌指基因表达
