广东省农科院院长基金(201111)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
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- 相关机构：华中农业大学广东省农业科学院更多>>
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- 肺炎克雷伯氏菌S001草甘膦靶标酶基因的克隆及其抗性验证被引量：3
- 2014年
- 【目的】由于草甘膦在农业生产中的广泛使用,抗草甘膦转基因作物的研究一直是转基因作物研究的热点,其中草甘膦抗性功能新基因的挖掘是核心问题。自然界中微生物种类繁多,基因资源丰富,论文拟从广东地区农田土壤中筛选和鉴定出高抗草甘膦菌株,克隆其草甘膦靶标酶基因并进行抗性水平验证,以期获得高抗草甘膦新基因资源用于抗草甘膦转基因作物的研究。【方法】用含有浓度梯度草甘膦的选择培养基从备选土壤中筛选出具有高抗草甘膦特性的菌株;通过显微观察、革兰氏染色以及16S rDNA序列分析结果对菌株种类进行鉴定;利用RT-PCR技术克隆该菌株的草甘膦靶标酶基因aroAS001,并通过序列比对和系统发育树分析aroAS001序列的基本特征;利用重叠PCR法对aroAS001变异位点进行定点突变获得aroAS001-mut序列后,将aroAS001和aroAS001-mut基因片段转入aroA基因缺陷型菌株DH5α/△aroA中进行基因功能互补和草甘膦抗性水平验证。【结果】分离出一株高抗草甘膦菌株,经形态学和分子生物学鉴定该菌株为肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae),命名为kpS001;克隆该菌株草甘膦靶标酶5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)基因aroAS001,序列分析结果显示由该基因所编码的氨基酸序列具有典型的Class I EPSPS特征,但与已报道肺炎克雷伯氏菌的aroA相比其第227位碱基发生突变,致使对应的氨基酸发生变异。对该基因差异位点进行核酸定点突变获得aroAS001-mut基因片段后,将aroAS001和aroAS001-mut基因片段分别转入缺陷型大肠杆菌菌株DH5α/△aroA进行功能互补验证,与对照菌株相比,转入aroAS001和aroAS001-mut的重组菌株均能在含200 mmol·L-1以下浓度草甘膦的培养基中能够正常生长,表现出良好的抗性,之后随着草甘膦浓度增加其生长状态开始受到抑制,当草甘膦浓度达到350 mmol·L-1时,菌株生长基本完�
- 张纯吴丹丹冯莉田兴山郭爱玲
- 关键词：肺炎克雷伯氏菌
- 草甘膦抗性真菌的分离与鉴定被引量：1
- 2013年
- 采用含浓度梯度草甘膦选择性培养基平板分离法,从华南地区农田土壤中分离筛选出高抗草甘膦真菌菌株,通过传统的表型特征和系统发育学ITS序列分析对菌株进行鉴定。结果显示所筛选出的3株菌株分别为淡紫拟青霉Paecilomyces lilacinus,多变根毛霉Rhizomucor variabilis和黄曲霉Aspergillus flavus,抗性实验结果表明,它们对草甘膦具有良好的耐受性,分别为200mmol/L、400 mmol/L和500 mmol/L,可作为进一步获得抗草甘膦基因的菌株材料。
- 吴丹丹张纯冯莉张妤郭爱玲田兴山
- 关键词：淡紫拟青霉多变根毛霉黄曲霉
