内蒙古自治区自然科学基金(2012MS0415)
- 作品数：3 被引量：16H指数：2
- 相关作者：锡林高娃布日额吴金花于辰龙杜长智更多>>
- 相关机构：内蒙古民族大学更多>>
- 发文基金：内蒙古自治区自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 科尔沁牛中性粒细胞防御素5的原核表达及纯化被引量：1
- 2014年
- 目的原核表达科尔沁牛中性粒细胞防御素5(bovine neutrophilβ-defensin 5,BNBD5),并进行纯化。方法用Trizol试剂提取牛外周血中性粒细胞总RNA,RT-PCR法扩增BNBD5的cDNA序列,与pMD18-T载体连接,构建重组克隆质粒pMD18-T-BNBD5,并进行测序,应用DNA Star生物分析软件对科尔沁牛BNBD5与其他物种(绵羊、山羊、驯鹿、家鼠、人类、鳜鱼、中华蜜蜂)β防御素的核苷酸序列进行同源性比较及进化树分析;对科尔沁牛与其他品种牛(新疆荷斯坦牛、印度水牛、荷兰弗里斯兰牛)β防御素的BNBD5核苷酸序列进行进行同源性比较及进化树分析;将构建正确的重组克隆质粒pMD18-T-BNBD5亚克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建重组表达质粒pET-30a-BNBD5,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),IPTG诱导表达后,利用Ni离子亲和柱纯化,SDS-PAGE鉴定表达产物和纯化产物。结果通过PCR扩增获得了195 bp的BNBD5全长cDNA序列,为一个完整的开放阅读框(ORF),与GenBank中登录的BNBD5编码区序列(AJ278799)相似性达93.4%,推导该序列编码45个氨基酸残基,并含有防御素的特征性分子结构,即在特定位置上有6个保守的半胱氨酸残基;共有13处碱基出现突变,导致其推导的氨基酸序列出现8处变异,但6个保守型半胱氨酸位点均未出现变异。与其他物种的BNBD5核苷酸序列同源性分析表明,科尔沁牛与山羊、绵羊同源性最高,达80%以上;与中华蜜蜂同源性最低,在10%以下。与其他品种牛的BNBD5核苷酸序列同源性分析表明,科尔沁牛与新疆荷斯坦牛同源性最高,达90%以上;与荷兰弗里斯牛的同源性最低,约66%。质粒pET-30a-BNBD5经PCR及单双酶切鉴定证明构建正确,表达及纯化蛋白相对分子质量约10 000,主要以可溶性形式表达,表达量占菌体总蛋白的25.1%,纯化产物含量达2.15 mg/ml。结论成功表达并纯化了科尔沁牛BNBD5。
- 锡林高娃陈鹏乌日汗吴金花布日额
- 关键词：科尔沁牛Β-防御素原核细胞
- 内蒙古东部区牛乳中金黄色葡萄球菌和无乳链球菌耐药性分析被引量：13
- 2015年
- 目的掌握内蒙古自治区东部区通辽市主要产奶地区的牛乳中致病性金黄色葡萄球菌和无乳链球菌流行情况及其对常用抗生素药物的敏感性,为奶牛乳房炎的治疗提供参考依据。方法从通辽市周边奶牛场采集患乳腺炎的奶牛乳样19份,进行细菌培养和分离鉴定,对分离出的金黄色葡萄球菌和无乳链球菌菌株进行药物敏感性试验。结果19份奶样中共分离出24株金黄色葡萄球菌和22株无乳链球菌。药敏试验显示,分离的24株金黄色葡萄球菌菌株对氯霉素、氨苄青霉素的耐药率分别为95.8%和54.2%,而对链霉素等大多数抗生素均表现高度敏感或中度敏感;分离的22株链球菌对链霉素等7种抗生素的耐药率在50.0%～95.5%之间。结论内蒙古通辽市周边地区牛乳中分离的金黄色葡萄球菌对氯霉素、氨苄青霉素表现较高耐药性,分离的无乳链球菌对链霉素等抗生素普遍耐药,可能与抗生素滥用有关。
- 锡林高娃吴金花孙立杰杜长智白文丽于辰龙布日额
- 关键词：牛乳腺炎金黄色葡萄球菌无乳链球菌耐药性分析
- 金黄色葡萄球菌表面蛋白nEBPS抗体的制备和纯化被引量：2
- 2015年
- 为了在原核细胞中表达金黄色葡萄球菌弹性纤维结合蛋白(EBPS),制备多克隆抗体,将构建的p ET30a-n EBPS重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,亲和层析法纯化重组蛋白,以纯化的重组蛋白为抗原免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体,ELISA方法检侧抗体滴度,亲和层析法纯化兔抗n EBPS多克隆抗体。结果显示,利用p ET30a-n EBPS重组质粒,经原核表达和亲和层析获得了n EBPS蛋白;利用n EBPS蛋白质制备多克隆抗体,间接ELISA检测的纯化抗体效价可达0.686(OD450值),P/N值达6.7。
- 锡林高娃薛晓阳吴金花布日额
- 关键词：多克隆抗体纯化
