山东省自然科学基金(ZR2012CM008)
- 作品数：13 被引量：11H指数：2
- 相关作者：刘晓萍张静卞晶晶陈琛于忠杰更多>>
- 相关机构：青岛大学匹兹堡大学北京协和医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- LPS对A549和Hela细胞SPLUNC1蛋白表达的影响
- 2019年
- 目的探讨脂多糖(LPS)对人肺腺癌上皮A549细胞和人子宫颈癌上皮Hela细胞短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1(short palate,lung and nasal epithelium clone 1,SPLUNC1)蛋白表达的影响。方法将两类细胞各随机分为对照组、实验组,CCK-8法观察LPS与细胞增殖活性的时间-反应和剂量-反应关系,筛选各自的最佳效应浓度和作用时间,以LPS最佳效应浓度和作用时间处理后,免疫组化和免疫荧光定量法检测两类细胞SPLUNC1蛋白相对表达量的变化。结果 LPS对A549细胞的最佳效应浓度为20 mg/L,最佳效应时间为12 h,对Hela细胞的最佳效应浓度为40 mg/L,12~24 h为其最佳效应时间窗。SPLUNC1在两类细胞中均呈阳性表达,LPS处理后表达均显著上调(P <0. 05),两类细胞间比较,LPS处理后Hela细胞SPLUNC1相对表达量高于A549细胞(P <0. 05),较对照的增量值(Δ)也明显大于A549细胞(P <0. 05)。结论 SPLUNC1在宫颈癌细胞中存在表达,可能是肺腺癌和宫颈癌病变中的保护性因子,具有潜在的临床应用价值。
- 曹留霞武涧松陈洁
- 关键词：A549细胞HELA细胞
- CUGBP1基因对EGCG诱导人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡作用研究
- 2014年
- 目的:研究表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对人肺癌A549细胞增殖和凋亡影响及与CUGBP1表达的关系。方法:MTT法检测不同剂量EGCG对A549细胞增殖活性的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率;免疫组化和蛋白质印迹法检测各处理组CUGBP1蛋白的表达;Real-Time PCR对CUGBP1mRNA表达进行定量分析。结果:EGCG显著抑制A549细胞增殖活性,F=1 096.65,P<0.001;EGCG孵育4和24hA549细胞的凋亡率分别为(34.10±1.10)%和(51.62±1.50)%,较4和24h正常对照组的(3.90±0.97)%和(1.53±1.11)%明显增加,差异有统计学意义,F=1 254.28,P<0.001。A549细胞细胞核和细胞质内CUGBP1蛋白表达呈阳性,EGCG孵育4h可见A549细胞核CUGBP1蛋白表达呈阴性;孵育24h,部分A549细胞变圆、核固缩,CUGBP1蛋白表达又呈阳性。CUGBP1mRNA定量分析可见,EGCG明显抑制CUGBP1表达,EGCG孵育24h,A549细胞中CUGBP1mRNA相对表达量为(0.71±0.076),较4h的(0.40±0.017)高,差异有统计学意义,t=-6.782,P=0.020。结论:EGCG干扰CUGBP1基因表达抑制人肺癌细胞株A549的增殖,可能是EGCG促进A549细胞凋亡的途径之一。
- 张静曹留霞刘晓萍姚如永荆昭张代军
- 关键词：肺肿瘤细胞增殖基因
- EGCG对A549细胞炎性反应模型UBC9表达的影响被引量：1
- 2017年
- 目的观察泛素连接酶9(ubiquitin conjugating enzyme 9,UBC9)在表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)作用的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导A549细胞中的表达,探讨UBC9与EGCG抗炎性反应机制的相关性。方法根据筛选结果随机分为对照组、EGCG组、LPS组、EGCG+LPS组4个组,MTT检测不同浓度的EGCG(50~400μg/ml)和LPS(10~50μg/ml)对A549细胞增殖活性的影响,筛选最佳作用浓度,进一步通过免疫组化染色法、蛋白质印迹法和Realtime-PCR检测分析各处理组UBC9蛋白及其mRNA的相对表达量。结果 MTT显示,200μg/ml的EGCG细胞增殖抑制作用最强(F=1618.18,P<0.001),LPS 25μg/ml细胞增殖活性最明显(F=237.38,P<0.001)。免疫组化与蛋白质印迹检测均显示,与对照组比较,EGCG下调A549细胞UBC9蛋白表达(P<0.001),LPS则上调UBC9表达量(P<0.001),与LPS组比较,EGCG+LPS组UBC9蛋白表达明显降低(P<0.001)。同样,Realtime-PCR显示,与对照组比较,EGCG组UBC9 mRNA表达下调(F=89.34,P<0.001),LPS组UBC9 mRNA表达上调(F=225.00,P<0.001),与LPS组比较,EGCG+LPS组UBC9mRNA的表达受到抑制,显著降低(F=625.00,P<0.001)。结论 EGCG下调LPS刺激的炎性反应模型的UBC9的表达,其抗炎机制可能与抑制UBC9蛋白与mRNA表达有关。
- 曹留霞武涧松徐晓丹贺丹
- 关键词：表没食子儿茶素没食子酸酯炎性反应
- 小鼠胚胎干细胞在同种正常肝脏中的定向分化被引量：1
- 2015年
- 目的研究小鼠胚胎干细胞在正常肝脏微环境中的迁移、分化及对正常肝组织的影响。方法分离小鼠生殖腺嵴获取胚胎干细胞,体外扩增、5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记后经尾静脉注入正常小鼠体内。于注射后2、4周取肝脏,连续冷冻切片,采用苏木精-伊红染色、免疫荧光双染色和PAS染色检测移植细胞在肝内的分布、清蛋白表达和糖原合成情况,显微计数分析肝细胞的增殖状态。结果移植2周,受体鼠肝脏内均可见散在分布的大而圆的BrdU和清蛋白双阳性细胞,PAS染色呈强阳性反应;体积小的BrdU阳性细胞,清蛋白表达呈阴性。移植4周,单位面积内BrdU阳性细胞数量较2周时减少,PAS着色较2周时浅,糖原颗粒细小、分布均匀,肝细胞的形态比较规则,但体积变大,胞核大而松散,单位面积的肝细胞数量较正常肝脏减少,肝小叶结构与正常鼠比较无显著改变。结论静脉移植的胚胎干细胞可以迁移至正常肝脏,在肝脏微环境中分化为肝细胞,并刺激正常肝细胞增殖。
- 刘倩于舒飞刘晓萍杨童茜于忠杰郭菲菲
- 关键词：胚胎干细胞细胞移植小鼠
- NF-κB和P38MAPK在BMSCs肝向分化中的作用被引量：2
- 2017年
- 目的探讨信号转导分子核因子κB(NF-κB)和P38MAPK在肝细胞生长因子(HGF)、肝组织液(LTF)介导下骨髓间充质干细胞(BMSCs)向肝样细胞定向分化过程的作用。方法采用全骨髓贴壁法分离大鼠BMSCs,利用HGF、LTF两种诱导剂以及NF-κB信号通路抑制剂BAY 11-7082对第3代BMSCs进行分组培养。采用吲哚靛青绿(ICG)摄取实验检测肝向分化的细胞,免疫组化染色检测NF-κB蛋白表达,Western Blot法检测NF-κB、p-P38和AAT表达。结果经HGF、LTF诱导20d后的细胞可摄取ICG。免疫组化检测显示,BMSCs经HGF、LTF两种诱导剂诱导后,细胞核内有NF-κB蛋白表达,添加抑制剂BAY 11-7082后细胞核内NF-κB蛋白表达减弱(F=572.2、280.9,P<0.01)。Western Blot检测显示,经HGF、LTF两种诱导剂诱导后,细胞内NF-κB和p-P38蛋白表达量显著增加,且细胞能够表达AAT蛋白,加入抑制剂BAY 11-7082后随着培养时间的延长,NF-κB、p-P38和AAT蛋白表达量均出现不同程度的降低(F=280.8~3 028.2,P<0.01)。结论 HGF、LTF均可诱导BMSCs向肝细胞分化,P38MAPK和NF-κB信号通路均参与了BMSCs的肝向分化,P38MAPK信号通路的调控主要出现在肝向分化的前期,NF-κB的抑制在前期对其无明显影响。
- 王怡姜莎莎杨童茜荆昭刘晓萍狄元璞
- 关键词：间质干细胞NF-ΚBP38丝裂原活化蛋白激酶类细胞分化
- NNK联合LPS孵育对小鼠巨噬细胞增殖及相关基因表达影响
- 2015年
- 目的观察脂多糖（LPS）、4-（甲基亚硝氨基）-3-吡啶-1-丁酮（NNK）对小鼠巨噬细胞增殖及相关基因表达的影响。方法体外培养小鼠巨噬细胞Raw264.7细胞,检测不同浓度的LPS及NNK刺激后Raw264.7细胞C-myc mRNA的表达情况,选择药物最佳浓度。用所选浓度的LPS、NNK及LPS＋NNK孵育Raw264.7细胞不同时间,利用细胞计数仪检测细胞增殖能力,采用实时定量PCR方法检测C-myc、核转录因子-κB（NF-κB）、精氨酸酶（Arginase）、一氧化氮合酶（iNOS）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1α及IL-6mRNA表达,应用酶联免疫试剂盒检测炎性递质TNF-α及IL-6的含量。结果选择浓度为10μmol/L NNK与1mg/L LPS进一步实验。NNK孵育Raw264.7细胞24h,其细胞增殖和各基因表达及IL-6、TNF-α蛋白表达与对照组比较差异无显著性。LPS和LPS＋NNK孵育Raw264.7细胞24h,其细胞增殖活性显著降低;C-myc、NF-κB、Arginase、iNOS、IL-1α、IL-6mRNA及IL-6、TNF-α蛋白表达显著升高（F=19.4～5 895.0,t=4.04～97.53,P〈0.05）。NNK对LPS刺激的Raw264.7细胞C-myc mRNA、TNF-α蛋白的表达升高具有拮抗作用;对NF-κB、IL-1αmRNA的表达升高具有协同作用。结论 LPS可抑制Raw264.7细胞的增殖,并促进Raw264.7细胞活化;NNK单独孵育对巨噬细胞的增殖和相关基因表达无明显影响,但可以强化LPS诱导的NF-κB、IL-1α基因高表达,促使巨噬细胞向M1型活化。
- 陈琛卞晶晶刘晓萍张静于忠杰杨童茜
- 关键词：脂多糖类巨噬细胞
- CUGBP1在人肺腺癌组织和细胞中的表达被引量：1
- 2014年
- 目的比较分析CUGBP1基因在人肺腺癌组织和细胞内表达的特点,及其CUGBP1表达水平与癌细胞增殖活性的关系。方法以人肺腺癌组织标本和人肺腺癌细胞株A549为研究对象,应用免疫组化、Western Blot、RT-PCR方法检测人肺腺癌组织、细胞内CUGBP1蛋白和基因的表达,并分析其特点。结果 CUGBP1基因主要在人肺腺癌组织的细胞核呈强阳性表达,在所有类型腺癌组织中80%以上的癌巢细胞CUGBP1基因呈阳性表达,阳性表达率明显高于正常对照组,差异有显著性(t′=100.01,P<0.001)。95%以上的A549细胞CUGBP1表达呈阳性,且CUGBP1表达量明显低于LPS组,差异有显著性(t=407.53,P<0.001)。结论 CUGBP1基因在人肺腺癌癌巢细胞和A549细胞的胞核内高表达;炎性刺激可增强人肺腺癌细胞株A549的增殖和CUGBP1基因表达;CUGBP1基因可能成为人肺腺癌的早期诊断和增殖状态判断的新指标。
- 张静曹留霞于舒飞刘晓萍陈琛卞晶晶
- 关键词：肺肿瘤基因
- LPS和NNK对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及NF-κB、P-P38、CUGBP1蛋白表达的影响
- 2017年
- 目的观察炎性刺激因子脂多糖(LPS)、4-(甲基亚硝氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)及LPS联合NNK对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及核因子κB(NF-κB)、P-P38、CUGBP1蛋白表达的影响。方法应用全骨髓贴壁法体外培养纯化BMSCs。采用MTT法检测不同浓度的炎性因子对BMSCs增殖的影响,选择最佳刺激浓度。应用免疫细胞化学法检测炎性刺激对BMSCs中NF-κB、CUGBP1蛋白表达的影响,采用Western blot法检测炎性刺激对BMSCs中NF-κB、P-P38、CUGBP1蛋白表达的影响。结果不同浓度的炎性因子均能促进大鼠BMSCs增殖,其中以12.5 mg/L LPS、10 mg/L NNK、12.5 mg/L LPS联合10 mg/L NNK对大鼠BMSCs增殖的促进作用最为明显。免疫细胞化学法检测显示,炎性刺激后BMSCs中NF-κB、CUGBP1蛋白的表达量显著增加,差异有显著性(F=165.1~481.8,P<0.01)。Western blot法检测显示,炎性刺激后NF-κB、P-P38、CUGBP1蛋白的表达量增加,差异有统计学意义(F=38.1~1 531.0,P<0.01)。结论炎性因子可能通过激活P38MAPK和NF-κB信号途径促进大鼠BMSCs的增殖。长时间的炎性因子刺激,促进了NF-κB、P-P38、CUGBP1蛋白在细胞核中的表达。
- 姜莎莎王怡于忠杰荆昭刘晓萍狄元璞
- 关键词：脂多糖类NF-ΚBP38丝裂原活化蛋白激酶类
- EGCG对LPS刺激人肺腺癌A549细胞凋亡及CUGBP1蛋白表达的影响
- 2014年
- 目的:研究表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对炎性刺激的人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及与CUGBP1表达的关系。方法:MTT法检测EGCG和LPS刺激A549细胞增殖活性的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡;免疫细胞化学检测EGCG对LPS刺激人肺腺癌A549细胞内CUGBP1蛋白的表达。结果:与对照组相比,LPS体外显著促进A549细胞增殖,其胞核胞质内CUGBP1表达明显增强(P<0.01)。加入EGCG可拮抗LPS促A549细胞增殖的作用,促进其凋亡,明显抑制LPS刺激的A549细胞内CUGBP1的表达(P<0.01)。CUGBP1蛋白定量分析可知EGCG和LPS共同孵育A549细胞4h、24h时,细胞中的CUGBP1蛋白表达量较单纯LPS作用时降低。但EGCG和LPS共同孵育A549细胞24h,A549细胞中胞核CUGBP1蛋白表达量(1210.565±3.46)较4h时胞核CUGBP1蛋白表达量(67.344±3.68)高,差异有统计学意义(t=927.164,P<0.001)。结论:EGCG可能通过干扰CUGBP1基因的表达抑制炎症刺激人肺腺癌细胞A549的增殖,促进其凋亡。
- 吴琪张静曹留霞刘晓萍陈琛卞晶晶
- 关键词：LPS细胞凋亡
- 小鼠胚胎干细胞向肝细胞定向分化过程中NF-κB表达
- 2016年
- 目的了解小鼠胚胎肝脏发育的过程和体外干细胞向肝细胞定向分化与NF-κB表达的关系,探讨干细胞向肝细胞定向分化的分子机制。方法分离培养扩增小鼠原始生殖嵴细胞,向培养液中分别加入20μg/L的β-神经细胞生长因子（β-NGF）、0.5g/L新生鼠肝脏提取液和胎肝细胞上清液,体外诱导小鼠生殖嵴来源的胚胎干细胞（PGCs）向肝样细胞定向分化。观察细胞的形态学变化;免疫细胞荧光法检测肝样分化细胞内α1-抗胰蛋白酶（AAT）及NF-κB的表达,Real-Time PCR方法检测诱导分化过程中NF-κB mRNA的表达。免疫组化法检测胚胎发育11.5、14.5、18.5d的肝脏组织中NF-κB的表达。结果 PGCs培养液中加入β-NGF、新生鼠肝脏提取液和胎肝细胞上清液可见部分细胞变为圆形或卵圆形;诱导12d后,圆形或卵圆形细胞呈ATT阳性表达;在诱导分化过程中NF-κB的表达逐渐增强,伴随肝细胞的成熟而呈阳性表达并由胞质转入胞核。Real-Time PCR方法检测结果显示,在诱导分化过程中NF-κB的表达升高（t=50.229～75.344,P〈0.01）。在胎肝发育过程中随肝原细胞向肝成熟细胞转化,肝细胞胞质中NF-κB的表达逐渐增强,并向细胞核内转移。结论 NF-κB在PGCs体外向肝细胞分化和体内肝发生过程中变化一致。
- 张静曹留霞刘晓萍
- 关键词：生殖细胞细胞分化Α1-抗胰蛋白酶NF-ΚB
