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游仆虫EoRab2a蛋白的表达、纯化及定位分析: 2011年; Rab GTPase家族蛋白是真核细胞内膜系统转运途径中重要的调控因子,不同的Rab家族成员在细胞具有功能多样性。为了解Rab2的功能,八肋游仆虫EoRab2a基因连接入原核表达质粒pGEX-6P-1中,获得重组表达质粒pGEX-6P-1-EoRab2a。质粒pGEX-6P-1-EoRab2a转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,大肠杆菌BL21(DE3)/pGEX-6P-1-EoRab2a高效表达了可溶性GST-EoRab2a蛋白。融合蛋白GST-EoRab2a经亲和层析获得电泳纯蛋白。纯化后的GST-EoRab2a免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。ELISA和Western blotting检测显示制备的抗体效价1∶25600,特异性良好。免疫荧光定位表明EoRab2a在游仆虫细胞质中点状分布,推测参与内质网与高尔基体间膜泡转运。; 许静李江姣聂宇梁爱华王伟; 关键词：八肋游仆虫原核表达纯化免疫荧光定位

八肋游仆虫组蛋白H4A和H4B的克隆及分析: 染色质作为真核生物遗传信息的载体,其基本结构与功能单位是核小体。组蛋白作为核小体的基本组分,是染色质的结构和功能必需的。组蛋白的变体和修饰共同参与染色质修饰和基因的表达调控。真核生物细胞中的5种组蛋白在进化中高度保守,然...; 杨旭霞王伟; 关键词：八肋游仆虫克隆转录; 文献传递

抗沉默因子Asf1调控嗜热四膜虫细胞核的稳定性被引量：5: 2015年; 组蛋白H3/H4的分子伴侣Asf1（anti-silencing factor 1）,参与依赖DNA复制及不依赖DNA复制的核小体装配,同时参与转录调控、基因沉默以及DNA损伤修复等过程.在不同生物中,Asf1具有功能的保守性和多样性.嗜热四膜虫ASF1（TTHERM_00442300）基因编码的蛋白质含有保守的N端结构域和酸性的C端结构域.N端结构域同源序列进化树分析表明,Asf1进化与物种进化一致.实时荧光定量PCR表明,ASF1在四膜虫营养生长、饥饿及有性生殖时期均有表达,且在有性生殖4～6 h转录水平达到最高.免疫荧光定位分析表明,HA-Asf1在营养生长时期以及有性生长时期定位于功能大核和小核中,而在凋亡的大核中信号消失.过表达ASF1导致大核及小核变大,抑制细胞增殖.敲减ASF1后会导致大核形态异常,小核缺失.结果表明,ASF1表达对细胞核的形态和结构维持发挥重要的调控作用.; 陈波许静王伟; 关键词：嗜热四膜虫细胞定位

含荧光素酶四膜虫B2086-LUC全细胞生物传感器的构建及其对重金属离子的响应被引量：4: 2013年; 为了获得可用于快速检测环境中重金属污染的全细胞生物传感器,本研究将含有HA标签的萤火虫荧光素酶(LUC)基因重组到含有四膜虫金属硫蛋白MTT1启动子和微管蛋白终止子序列的载体pBX中,获得重组质粒pBX-LUC,用基因枪粒子轰击法将pBX-LUC转化入四膜虫细胞中,通过同源重组和巴龙霉素抗性筛选,LUC基因整合到四膜虫大核基因组MTT1位点,获得含有LUC基因的细胞株B2086-LUC.B2086-LUC对重金属镉和汞的响应敏感,可检测的最低浓度为5-10ng/mL;对铜和锌的响应较弱,可检测的最低浓度为0.5-1mg/mL.因此,四膜虫B2086-LUC可作为环境中镉和汞污染快速检测的全细胞生物传感器.; 张鹏幸许静卢剑功王伟; 关键词：萤火虫荧光素酶嗜热四膜虫汞生物传感器

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国家自然科学基金(31072000)