国家自然科学基金(30671831)
- 作品数：5 被引量：27H指数：3
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- 相关机构：中山大学广州市妇女儿童医疗中心广州医学院更多>>
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- 枯草杆菌芽孢抵抗胃肠道环境的耐性评估被引量：11
- 2008年
- 目的对益生菌—枯草杆菌芽孢进行耐性评估,为研制口服枯草杆菌芽孢载体疫苗奠定基础。方法采用耗竭法,DSM培养基长时间振荡培养(24h)获得芽孢,使用pH2.0盐酸胃蛋白酶液模拟胃液,胆酸盐、胰液素混合液模拟肠液,对枯草杆菌芽孢进行体外耐受实验。结果在DSM培养基中,80%～90%的枯草杆菌WB600可形成芽孢,每升DSM液所生成芽孢约1×1011。在模拟胃液中1h后,仅0.0024%枯草杆菌WB600繁殖体细菌仍成活,大肠杆菌JM109活力完全丧失,而枯草杆菌芽孢基本不受影响,93.3%仍成活。在模拟小肠环境中3h后,枯草杆菌WB600繁殖体细菌活力显著降低(仅0.0013%存活),枯草杆菌芽孢基本不受影响(92%仍存活),而大肠杆菌JM109有一定量的增殖。结论枯草杆菌芽孢能耐受模拟胃肠道环境,有望成为新型的口服疫苗载体。
- 周珍文胡旭初邓秋连马长玲陈晓湘胡凤玉徐劲余新炳
- 关键词：枯草杆菌芽孢耐性口服疫苗
- 枯草杆菌芽孢载体疫苗的研究及其在寄生虫病防治中的应用前景被引量：8
- 2007年
- 枯草芽孢的良好安全性,独特的抗性及其免疫学特征,使它作为疫苗载体具有很大的优势。本文对枯草芽孢结构、理化性状、免疫学特性,及表面表达外源蛋白的芽孢疫苗免疫学活性,重组芽孢口服疫苗对动物的免疫保护性进行综述,并对其在寄生虫病防治中的应用前景进行了展望。
- 周珍文胡旭初余新炳
- 关键词：枯草杆菌芽孢重组疫苗
- 华支睾吸虫组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶基因的克隆表达和重组蛋白的免疫学分析被引量：3
- 2008年
- 目的对新发现的华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)的组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶基因进行克隆、表达和免疫学初步研究。方法将华支睾吸虫组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶基因(去除了信号肽编码序列)克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠杆菌BL-21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白免疫SD大鼠制备抗血清。用蛋白印迹(Western blotting)进行免疫学分析。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET-28a(+)-组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠杆菌BL-21/DE3中获得高效表达,经亲和层析获得了高纯度蛋白。重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别,表明其具有免疫原性;并且能识别感染了华支睾吸虫的SD大鼠血清,表明具有免疫反应性。结论华支睾吸虫组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶基因可在原核表达系统中获得具有免疫原性的高效表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。
- 赵俊红胡旭初徐劲胡凤玉周红娟胡慧霞郑小凌李艳文余新炳
- 关键词：华支睾吸虫组织蛋白酶D天冬氨酸蛋白酶免疫原性
- 华支睾吸虫乳酸脱氢酶(CsLDH)亚细胞及虫体组织定位被引量：6
- 2008年
- 目的真核表达华支睾吸虫乳酸脱氢酶基因并研究CsLDH的亚细胞及虫体组织定位。方法构建pEGFP-N1-CsLDH真核表达质粒,转染HeLa细胞,通过绿色荧光蛋白标签GFP的示踪来揭示CsLDH在HeLa细胞中的亚细胞定位;免疫组织化学方法进行CsLDH的虫体组织定位。结果双酶切和测序均表明真核表达重组质粒pEGFP-N1-CsLDH构建成功,经RT-PCR鉴定转染正确的HeLa细胞能稳定表达,部分HeLa细胞的细胞膜出现强烈的绿色荧光;免疫组织化学的结果显示CsLDH主要定位成虫的表膜,口、腹吸盘,咽及肠支处。结论华支睾吸虫乳酸脱氢酶为定位于虫体皮层和消化道界面的膜蛋白。
- 黄灿胡旭初余新炳吕刚刘玲王乐旬徐劲
- 关键词：华支睾吸虫乳酸脱氢酶免疫组织化学
- 华支睾吸虫表膜蛋白TP31.8的克隆、表达及免疫活性
- 2014年
- 目的从华支睾吸虫cDNA文库扩增表膜蛋白31.8kDa(TP31.8)基因,克隆入表达载体pGEX-4T-1,诱导表达重组蛋白,纯化重组蛋白免疫大鼠获得特异性抗体,为后续功能研究奠定基础。方法以华支睾吸虫cDNA文库为模板,设计一对特异性引物,扩增华支睾吸虫TP31.8基因,扩增产物经EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切后与做相应酶切的pGEX-4T-1连接,转化大肠杆菌BL21,提取质粒进行双酶切鉴定,IPTG诱导重组蛋白表达,并对基因进行测序及比对分析。融合蛋白经谷胱甘肽Sepharose 4B柱纯化后,用凝血酶去除谷脱甘肽疏基转移酶(GST)。获得纯化的重组蛋白,使用重组蛋白皮下注射免疫大鼠,ELISA检测抗TP31.8的特异性IgG抗体滴度。结果 TP31.8基因成功扩增,重组pGEX-4T-1-TP31.8双酶切鉴定可见目的片段。测序结果显示TP31.8在正确阅读框中,TP31.8开放阅读框长828bp,编码相对分子质量为31.8×103的蛋白,等电点为4.7。TP31.8与其他蠕虫的表膜蛋白具同源性,与日本血吸虫表膜蛋白Sm20的一致性为41%,IPTG诱导后,pGEX-4T-1-TP31.8/BL21有相对分子质量57.8×103融合蛋白的表达。融合蛋白经凝血酶酶切后得到相对分子质量31.8×103的重组蛋白。使用重组蛋白免疫大鼠,ELISA检测抗重组蛋白的特异的IgG抗体滴度为1∶25 600。结论成功克隆了华支睾吸虫表膜蛋白TP31.8基因,并获得重组蛋白的表达。重组TP31.8具免疫原性,免疫大鼠获得的特异性抗体滴度为1∶25 600,为其后续功能研究奠定了基础。
- 姚淑雯胡旭初徐劲余新炳周珍文
- 关键词：华支睾吸虫重组蛋白质类克隆
