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国家自然科学基金(30371515)

作品数:15 被引量:39H指数:3
相关作者:张平林健贤张文忻李永平唐丽娟更多>>
相关机构:中山大学北京师范大学常州市第二人民医院更多>>
发文基金:国家自然科学基金更多>>
相关领域:医药卫生更多>>

文献类型

  • 15篇中文期刊文章

领域

  • 15篇医药卫生

主题

  • 9篇细胞
  • 5篇蛋白
  • 4篇视网膜
  • 4篇网膜
  • 4篇细胞瘤
  • 4篇母细胞
  • 4篇母细胞瘤
  • 3篇蛋白质
  • 3篇视网膜母细胞
  • 3篇视网膜母细胞...
  • 3篇网膜母细胞瘤
  • 3篇白质
  • 2篇蛋白质芯片
  • 2篇蛋白质芯片技...
  • 2篇英文
  • 2篇染色
  • 2篇芯片技术
  • 2篇间充质
  • 2篇间充质干细胞
  • 2篇骨髓

机构

  • 12篇中山大学
  • 2篇北京师范大学
  • 1篇湖南省儿童医...
  • 1篇无锡市第三人...
  • 1篇常州市第二人...

作者

  • 12篇张平
  • 9篇张文忻
  • 9篇林健贤
  • 7篇李永平
  • 5篇唐丽娟
  • 4篇郑健樑
  • 4篇高欢欢
  • 4篇杨玉霞
  • 3篇周立军
  • 2篇吴开力
  • 2篇肖雪媛
  • 2篇杨华胜
  • 2篇何大澄
  • 2篇王矩菱
  • 2篇陈丽红
  • 1篇冯官光
  • 1篇孟永
  • 1篇岳滔
  • 1篇朱振宇
  • 1篇毛羽翔

传媒

  • 3篇眼科学报
  • 3篇Eye Sc...
  • 3篇国际眼科杂志
  • 3篇Intern...
  • 1篇中国组织工程...
  • 1篇中华临床医师...
  • 1篇中华实验眼科...

年份

  • 2篇2021
  • 1篇2019
  • 2篇2018
  • 3篇2017
  • 1篇2012
  • 1篇2010
  • 1篇2008
  • 2篇2007
  • 1篇2006
  • 1篇2005
15 条 记 录,以下是 1-10
排序方式:
内皮抑制素蛋白质的制备及生物学活性测定(英文)被引量:1
2005年
目的:探讨内皮抑制素蛋白质的制备及其对血管内皮细胞的生物学活性作用。方法:通过限制性内切酶酶切反应、聚合酶链式反应、DNA测序及用NCBIBLAST软件与基因库序列比较的方法进行鉴定,鉴定后在大肠杆菌中扩增,用质粒纯化试剂盒抽提纯化;将纯化的pBlast-hEn-dostatin转染人成纤维细胞,用超滤和亲和层析法初步提纯转基因成纤维细胞产生的内皮抑制素蛋白,用Rt-PCR、Western-Blot和免疫组化检测内皮抑制素的表达,用MTT法检测其对人脐静脉内皮细胞的抑制作用。结果:实验证实质粒pBlast-hEndostatin含有人内皮抑制素基因。转染的成纤维细胞可以产生内皮抑制素蛋白,内皮抑制素蛋白质对人脐静脉内皮细胞作用48h2.5,5,10,20,40,80mg/L组抑制率分别为8.5%,13.1%,27.7%,38.1%,56.7%,63.8%,经曲线拟合后,内皮抑制素作用于人脐静脉内皮细胞48hIC50值为34.5mg/L。而内皮抑制素对人成纤维细胞则没有明显抑制作用。结论:转内皮抑制素基因的人成纤维细胞可以表达内皮抑制素蛋白,表达的内皮抑制素蛋白对人脐静脉内皮细胞有生长抑制作用,而对人成纤维细胞没有生长抑制作用。
张平岳滔朱振宇郑健粱林健贤张文忻冯官光
关键词:内皮抑制素生物学活性蛋白质人脐静脉内皮细胞人成纤维细胞
三氧化二砷诱导的视网膜母细胞瘤SO-Rb50细胞自噬的研究被引量:2
2012年
背景细胞的自噬是肿瘤细胞非凋亡形式的死亡过程,研究证实三氧化二砷(As2O3)可诱导肿瘤细胞凋亡,但As2O3是否可致SO—Rb50细胞发生自噬的研究鲜有报道。目的探讨As2O3体外诱导SO—Rb50细胞自噬的作用。方法用浓度为0.5、1.0、2.0、4.0μmol/L的As2O3培养液及不含As2O3的未处理组处理SO—Rb50细胞系48h,采用MTT法测定各As2O3,浓度组SO—Rb50细胞的吸光度(As2O3)值。构建自噬标志物磷酸化绿色荧光蛋白(pGFP)-LC3体外转染SO—Rb50细胞,并分为新鲜RPMI一1640培养组(未处理组)、As2O3,RPMI一1640培养组(As2O3处理组)和rapamycin培养组(阳性对照组),于48h后行激光共焦显微镜检测细胞自噬;用自噬特异性染料单丹磺酰戊二胺(MDC)行荧光染色检测SO—Rb50细胞的自噬,并用透射电子显微镜检测SO—Rb50细胞的自噬表现,采用流式细胞仪定量检测不同浓度As2O3,处理组自噬泡阳性细胞百分比。结果未处理组和0.5、1.0、2.0、4.0txmolAs2O3,作用48h后SO—Rb50细胞的A570值分别为2.194+0.066、1.841±0.213、1.035±0.046、0.374±0.042和0.167±0.019,总体比较差异有统计学意义(F=547.636,P〈0.05),其中各浓度As2O3组A。值均明显低于未处理组,差异均有统计学意义(均P=0.000)。As2O3处理组和阳性对照组可见GFP—LC3融合蛋白呈点状聚集在相应的自噬泡,未处理组GFP—LC3呈弥散分布。透射电子显微镜检查可见未处理组SO—Rb50细胞超微结构正常,As2O3处理组和阳性对照组见大量双层膜状结构及自噬溶酶体。未处理组48h见极少量MDC阳性荧光颗粒,As2O3处理组及阳性对照组48h可见明显的MDC阳性荧光颗粒,聚集在细胞质相应的自噬发生区。流式细胞术检测发现未处理组和0.5、1.0、2.0、4.0μmol/LAs2O3及rapamycin作用48h后自噬泡阳性的SO—Rb50细胞百分比分�
孟永黄丽琴郑健樑张文忻林健贤李永平张平
关键词:视网膜母细胞瘤自噬
爱先蓝和细胞角蛋白双重染色技术在泪腺腺样囊性癌诊断中的应用
2017年
目的:探讨爱先蓝(Alcian Blue,AB)和细胞角蛋白(cytokeratin,CK)双重染色技术在泪腺腺样囊性癌组织中的应用,提高泪腺腺样囊性癌染色效率。方法:选取中山大学中山眼科中心临床病理科2015年1月至2017年1月期间诊断为泪腺腺样囊性癌病例标本23例,在同一张切片上先进行AB染色,再进行CK染色,观察染色效果。结果:23例泪腺腺样囊性癌标本组织中黏液物质全部呈蓝色;癌细胞胞质CK阳性,呈棕黄色。结论:AB和CK双重染色方法稳定,颜色对比鲜明,能够良好显示癌细胞及黏液的关系,并且比分开的两次单种染色省时、经济。
高欢欢林健贤李扬杵张文忻陈丽红唐丽娟张平
关键词:双重染色泪腺腺样囊性癌细胞角蛋白
蛋白质芯片技术在视网膜母细胞瘤患者早期诊断中的运用(英文)被引量:2
2008年
目的:探讨用表面增强基质辅助激光解析离子化-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)筛选视网膜母细胞瘤(retinoblatoma,Rb)血清标志蛋白,为Rb筛查、早期诊断及鉴别诊断寻找新的方法。方法:采用IMAC30和CM10两种蛋白芯片对18例Rb患者和17名年龄匹配的正常小儿血清进行了蛋白质谱检测。统计分析采用Ciphergenproteinchip3.0.2软件,两组间蛋白峰强度的比较采用t检验,率的比较采用Fisher精确概率法。结果:IMAC30蛋白芯片结果显示:与正常幼儿相比,视网膜母细胞瘤患者血清中有26个差异表达的蛋白峰,其中高表达有21个,质/荷比(m/z)分别为:7746,7014,117133049,7084,7299,5888,2544,12575,5489,9658,95759929,10161,8955,1886,10617,6209,2411,7374和6614低表达有5个,分别为:8382,7923,7972,8590和66576,统计学检验P<0.01。其中以m/z7014峰进行两组统计学分析时,敏感性和特异性分别为94.4%和82.4%。与正常小儿相比,经CM10蛋白芯片分析显示:视网膜母细胞瘤患者血清中有4个差异表达的蛋白峰,其中高表达有个,质/荷比(m/z)分别为5888,6097和7798;低表达蛋白峰为m/z8590。统计学检验P<0.01。当选择m/z779峰进行统计学分析时,敏感性和特异性分别是83.3%和70.6%。结论:视网膜母细胞瘤患者血清中存在较多标志蛋白SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术有望成为Rb筛查、早期诊断及鉴别诊断的新的有效工具。
周立军肖雪媛吴开力王矩菱杨华胜李永平何大澄张平
关键词:视网膜母细胞瘤SELDI蛋白质芯片技术蛋白
眼睑无色素性黑色素瘤伪装成霰粒肿1例被引量:3
2017年
报道一例发生在41岁中年女性左眼上睑的无色素性黑色素瘤,曾在当地医院误诊为霰粒肿。体检见左眼上睑结膜面一大小约2 cm×2 cm红色肿物,手术切除肿物送病理检查,标本经10%福尔马林固定,常规石蜡包埋切片,HE染色及免疫组织化学染色。光镜下见肿瘤细胞呈片状及巢状排列,瘤细胞圆形及梭形,部分瘤细胞胞浆空泡状呈气球样形,部分细胞核仁明显。免疫组化显示肿瘤细胞S-100、HMB-45阳性,CK及EMA阴性,最终病理诊断为左眼上睑无色素性黑色素瘤。对于临床上患者年龄较大无典型霰粒肿特征的眼睑肿物,术后标本均应送病理检查以除外其它肿瘤的可能。
陈丽红林健贤李永平张文忻毛羽翔高欢欢唐丽娟张平
关键词:睑结膜病理
用蛋白质芯片技术筛选视网膜母细胞瘤患者血清中标志蛋白被引量:1
2007年
目的:探讨用表面增强基质辅助激光解析离子化-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)筛选视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma,Rb)血清标志蛋白,为Rb筛查、早期诊断及鉴别诊断寻找新的方法。方法:采用IMAC30和CM102种蛋白芯片对18例Rb患者和17名年龄匹配的正常小儿血清进行了蛋白质谱检测。统计分析采用Ciphergenproteinchip3.0.2软件,2组间蛋白峰强度的比较采用t检验,率的比较采用Fisher精确概率法。结果:IMAC30蛋白芯片结果显示:与正常幼儿相比,视网膜母细胞瘤患者血清中有26个差异表达的蛋白峰,其中高表达有21个,质/荷比(m/z)分别为:7746、7014、11713、3049、7084、7299、5888、2544、12575、5489、9658、9575、9929、10161、8955、1886、10617、6209、2411、7374和6614;低表达有5个,分别为:8382、7923、7972、8590和66576,统计学检验P值均小于0.001。其中以7014m/z峰进行两组统计学分析时,敏感性和特异性分别为94.4%和82.4%。与正常小儿相比,经CM10蛋白芯片分析显示:视网膜母细胞瘤患者血清中有4个差异表达的蛋白峰,其中高表达有3个,分别为:质/荷比(m/z)分别为5888、6097和7798;低表达蛋白峰为8590m/z。统计学检验P值均小于0.01。当选择7798m/z差异峰进行统计学分析时,敏感性和特异性分别是83.3%和70.6%。结论:视网膜母细胞瘤患者血清中存在较多标志蛋白,SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术有望成为Rb筛查、早期诊断及鉴别诊断的新的有效工具。
杨玉霞肖雪媛吴开力王矩菱周立军杨华胜李永平何大澄张平
关键词:视网膜母细胞瘤SELDI蛋白质芯片技术差异蛋白
密度梯度离心结合贴壁法培养成年大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性(英文)被引量:9
2007年
背景:研究骨髓间充质干细胞的培养方法,以获取大量高纯度的骨髓间充质干细胞,对应用组织工程技术重建眼部组织治疗眼部疾病具有重要意义。目的:应用密度梯度离心结合贴壁法进行成年大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养,观察其生长特性及大量繁殖的可能性。设计:完全随机分组设计/重复测量实验。单位:中山大学中山眼科中心病理科实验室。材料:选用6周龄SD大鼠4只,雌雄不限,清洁级2级,体质量约250g/只,由中山大学动物中心提供,许可证号码SCSK(粤2004/0011)。DMEM/F12培养基(美国GIBCo公司)、胎牛血清(杭州四季青生物工程公司)、胰蛋白酶、依地酸二钠、淋巴细胞分离液。纤维连接蛋白、CD44、CD34、CD31单克隆抗体,免疫组化二步法试剂盒(北京中杉生物技术公司)。方法:实验于2005-09/2006-01在中山大学中山眼科中心病理科实验室完成。①取SD大鼠,断颈处死后于750g/L酒精浸泡10min。无菌条件下,分离并暴露骨髓腔,用注射器吸入应用液直接插入股骨腔,用含肝素的培养液将骨髓腔里的细胞冲洗出来作为细胞混悬液,密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,观察活体细胞生长情况。②将第2代细胞接种于预置在培养板内的无菌盖玻片上,当细胞基本融合时,取出作原位甲醇固定10min,苏木精-伊红染色。原位丙酮固定10min,按二步法作免疫组织化学纤维连接蛋白、CD44、CD34、CD31反应,3,3’-二氨基联苯胺显色,最后将盖玻片反扣在载玻片上,封固、观察。③将细胞按4.25×107L-1的浓度接种于96孔板中,每孔200μL,置培养箱中,分别于接种后1,2,3,4,5,6d各于两排孔中加入20μL/孔四甲基偶氮唑盐,继续培养4h后吸去上清液,每孔加200μL二甲基亚砜,振荡5min后,于570nm波长测吸光度值,绘制细胞生长曲线。主要观察指标:①大鼠骨髓间充质干细胞活体培养观察结果。②2
杨玉霞郑健樑张平林健贤张文忻
关键词:骨髓
Expression of multidrug-resistance associated proteins in human retinoblastoma treated by primary enucleation被引量:2
2018年
AIM: To reveal the expression of multidrug-resistance associated proteins: glutathione-S-transferase π(GSTπ), P-glycoprotein(P-gp) and vault protein lung resistance protein(LRP) in retinoblastoma(RB) without any conservative treatment before primary enucleation and to correlate this expression with histopathological tumor features. METHODS: A total of 42 specimens of RB undergone primary enucleation were selected for the research. Sections from the formalin-fixed, paraffin-embedded specimens were stained with HE and immunohistochemistry to detect the expression of GSTπ, P-gp and LRP.RESULTS: GSTπ was expressed in 39/42(92.86%) RBs and in 9/9(100%) well-differentiated RBs. P-gp/GSTπ was found in 30(71.42%) of 42 RBs. Totally 9(21.43%) tumors were well differentiated and 33(78.57%) were poorly differentiated. Totally 15(35.71%) eyes had optic nerve(ON) tumor invasion, 36(85.71%) had choroidal tumor invasion, and 14(33.33%) had simultaneous choroidal and ON invasion. There was no statistically significant relationship between P-gp, GSTπ, LRP positivity and the degree of ocular layer tumor invasion and ON tumor invasion(P>0.05). CONCLUSION: RB intrinsically expresses GSTπ, P-gp and LRP. GSTπ expression is positive in 100% welldifferentiation ones, so in which way it is correlated with differentiation. But the other two proteins expressions are not related to tumor differentiation and to the degree of tumor invasion. GSTπ may be a new target of chemotherapy in RB.
Li-Juan TangLi-Jun ZhouWen-Xin ZhangJian-Yan LinYong-Ping LiHua-Sheng YangPing Zhang
关键词:P-GLYCOPROTEINRETINOBLASTOMA
Immunohistochemical features of carcinoma ex pleomorphic adenoma and pleomorphic adenoma in the lacrimal gland被引量:1
2019年
AIM: To investigate C-myc, Ki-67, pan-cytokeratin, and vimentin immunohistochemical features of carcinoma ex pleomorphic adenoma(Ca-ex-PA) and pleomorphic adenoma(PA) in the lacrimal gland in order to find some clues in the differential diagnosis between them.METHODS: We reviewed microscopic slides and clinical records of 64 cases of PA and 15 cases of Ca-ex-PA in the lacrimal gland. Immunohistochemical antibodies for C-myc, Ki-67, pan-cytokeratin, and vimentin were employed.RESULTS: Median age of PA was 43.2 y(from 21 to 75). The 35 patients(54.7%) were male and 29 patients(45.3%) were female. For the PAs, the average positivity of C-myc was 4.6%;the average proliferation index of Ki-67 was 3.2%;pan-cytokeratin was positive in ductal cells, and vimentin was positive in myoepithelial cells. Median age of Ca-ex-PA was 54.3 y(from 26 to 76). There were 7 male patients(46.7%) and 8 female patients(53.3%). Among 15 Ca-ex-PAs, there were 6 myoepithelial carcinomas, 4 adenocarcinomas, 3 epithelial-myoepithelial carcinomas, and 2 squamous cell carcinomas. For the Ca-ex-PAs, the average positivity of C-myc was 36.4%;the average proliferation index of Ki-67 was 29.2%;pan-cytokeratin was positive in all cases, and vimentin was positive in myoepithelial carcinomas.CONCLUSION: PA has a lower positivity of C-myc and Ki-67, while Ca-ex-PA had a higher positivity of these two biomarkers. These four biomarkers as a set could provide valuable clues in the differential diagnosis between Ca-exPA and PA. Our results indicate that the activation of C-myc could play an important role in the pathogenesis of Ca-exPA and PA.
Ping ZhangLi-Juan TangHuan-Huan GaoWen-Xin ZhangJian-Xian LinHua-Sheng Yang
关键词:EXPLEOMORPHICADENOMAPLEOMORPHICADENOMAC-MYCIMMUNOHISTOCHEMISTRY
人视网膜母细胞瘤耐药细胞系SO-Rb50/CBP的建立及耐药相关基因表达检测
2010年
目的用卡铂诱导人视网膜母细胞瘤SO-Rb50成为耐药细胞SO-Rb50/CBP,检测其生物学特性,并探讨其耐药机制。方法以人视网膜母细胞瘤SO-Rb50为亲本细胞,采用卡铂高浓度间歇诱导法诱导多药耐药细胞SO-Rb50/CBP。MTT法测定其药物敏感性及生长曲线、倍增时间;分别用免疫细胞化学、流式细胞术对MRP、GST-π蛋白表达进行检测,用RT-PCR检测耐药相关基因MRP、GST-π的表达。结果耐药细胞SO-Rb50/CBP的耐药指数为15.7。亲本细胞与耐药细胞群体倍增时间分别为44.32h和50.9h。SO-Rb50/CBP对CBP、DDP、VCR、MMC、VP-16和5-FU的耐药指数分别为15.7、6.89、5.68、4.58、2.28和1.88。免疫细胞化学SO-Rb50/CBP的GST-π和MRP表达的阳性率分别为96.19%和90.21%,亲本细胞两种蛋白的阳性率分别为20.12%和30.48%。SO-Rb50/CBP的MRP及GST-π的mRNA表达水平比SO-Rb50明显增高。结论诱导出耐卡铂的视网膜母细胞瘤细胞SO-Rb50/CBP呈高度耐药,且存在多药耐药现象。其耐药现象的产生,可能与GST-π和MRP耐药蛋白表达的增加有关。
杨玉霞孟永周立军李永平郑健樑张文忻林健贤张平
共2页<12>
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