国家自然科学基金(30671833)
- 作品数：9 被引量：45H指数：4
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- 相关机构：江苏省血吸虫病防治研究所江苏省寄生虫病防治研究所江苏省江原医院更多>>
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- 调节性T细胞与寄生虫感染免疫调节被引量：4
- 2009年
- 调节性T细胞参与几乎全部的寄生虫病免疫反应,是寄生虫感染免疫调节的重要环节。本文就天然调节性T细胞在寄生虫感染过程中的免疫调节作用、机制及其临床治疗价值进行了讨论,期望有助于发展控制寄生虫感染的新方法。
- 余传信
- 关键词：寄生虫免疫调节
- 日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶基因克隆和序列分析被引量：4
- 2008年
- 目的克隆日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(SjTGR)基因,并进行序列分析。方法制备日本血吸虫成虫mRNA,反转录合成cDNA,采用聚合酶链反应(PCR)技术,从日本血吸虫成虫cDNA中扩增出SjTGR基因片段。通过TA克隆技术将该基因片段克隆到pGEM-T载体中进行DNA序列测定和生物信息学分析。结果采用PCR技术成功地从日本血吸虫成虫cDNA中扩增出TGR基因片段,TA克隆后DNA序列分析显示该基因长度为1791bp,编码596个氨基酸残基,理论分子质量65kDa,生物信息学分析显示与曼氏血吸虫TGR氨基酸序列同源性为82%,含有吡啶核苷酸二硫化物氧化活性中心CVNVGC序列,在氨基端含有谷氧还蛋白特征性的活性位点CPFC基序。结论SjTGR基因克隆获得成功,为发展抗日本血吸虫新药及疫苗候选分子奠定了基础。
- 谢曙英殷旭仁华万全曾小军陈红根梁幼生高琪余传信
- 关键词：日本血吸虫基因克隆
- 环介导同温DNA扩增技术鉴定血吸虫感染性钉螺方法的建立被引量：24
- 2008年
- 目的建立一种快速鉴定血吸虫感染性钉螺的环介导同温DNA扩增方法。方法选择一个高拷贝的日本血吸虫基因SjR2的部分DNA序列作为扩增靶位,根据环介导同温DNA扩增原理设计合成引物,建立扩增该片段的环介导同温DNA扩增方法。使用此方法与聚合酶链反应(PCR)方法同时检测血吸虫感染性钉螺与正常钉螺的DNA,观察其应用价值。结果日本血吸虫SjR2基因的839～1 138 bp区段被成功扩增和克隆。利用根据该片段DNA序列设计合成的环介导同温DNA扩增反应的引物,成功地建立了能扩增该片段的环介导同温DNA扩增方法,其敏感性高于PCR法,能检出1 pg的血吸虫DNA。用此法检测30只感染性钉螺,阳性率为93.33%,而PCR的阳性率83.33%,两者差异有统计学意义(P<0.01)。结论环介导同温DNA扩增检测血吸虫感染性钉螺具有较高的敏感性,是一种潜在有效的血吸虫感染性钉螺鉴定方法。
- 余传信殷旭仁华万全高琪
- 关键词：感染性钉螺
- 日本血吸虫感染小鼠调节性T细胞水平动态变化及功能逆转研究被引量：1
- 2009年
- 目的观察日本血吸虫感染小鼠调节性T细胞水平动态变化,筛选调节性T细胞功能抑制因子。方法以日本血吸虫尾蚴感染小鼠,采用流式细胞分析法检测不同感染阶段小鼠体内调节性T细胞水平;通过检测小鼠血清中细胞因子的水平变化,观察免疫反应的极化过程;采用磁珠分离法纯化小鼠脾脏的调节性T细胞,人工设计合成2条寡核苷酸(CpG1-ODN,CpG2-ODN),通过淋巴细胞增殖试验筛选能逆转调节性T细胞功能的刺激因子。结果流式细胞分析发现,随着血吸虫感染进程的发展,小鼠外周血及脾脏调节性T细胞水平逐渐增加,免疫反应逐步向Th2型极化,血清IL-5水平增加,IFN-γ下降。淋巴细胞增殖试验显示,人工合成的寡核苷酸(CpG2-ODN)能有效刺激淋巴细胞增殖,使淋巴细胞的IL-2分泌增加,TGF-γ下降,并能解除调节性T细胞对效应T细胞增殖的免疫抑制作用。结论血吸虫感染可增加小鼠体内调节性T细胞水平,诱导免疫反应向Th2型极化。寡聚核苷酸CpG2-ODN能逆转调节性T细胞的免疫抑制功能。
- 余传信吴宇迪王玠殷旭仁华万全钱春艳梁幼生高琪
- 关键词：调节性T细胞逆转
- 重组日本血吸虫四跨膜蛋白第二亲水基团对小鼠免疫保护作用的研究被引量：2
- 2009年
- 目的探讨重组日本血吸虫四跨膜蛋白第二亲水基团融合蛋白(GST-TSP2HD)抗血吸虫感染免疫保护效果。方法采用Glutathione sepharose 4B胶亲和层析法大量制备GST-TSP2HD蛋白。实验组以GST-TSP2HD融合蛋白的福氏佐剂抗原免疫C57BL/6J小鼠,同时设置佐剂对照组及GST蛋白免疫对照组,每2周加强免疫1次。加强免疫2次后每只小鼠经腹部皮肤感染(45±2)条血吸虫尾蚴。感染42 d后剖杀小鼠,经生理盐水静脉灌注收集成虫,计数减虫率,用KOH溶液消化肝组织收集虫卵,计算减卵率。组织切片观察小鼠肝组织病理变化,通过酶联免疫吸附试验检测小鼠血清中的抗体水平。结果与佐剂对照组相比,GST-TSP2HD融合蛋白免疫组的减虫率为27.10%,减卵率为32.30%;与GST蛋白免疫组相比,GST-TSP2HD融合蛋白免疫组可获得39.57%的减虫率,43.53%的减卵率。GST-TSP2HD融合蛋白免疫组肝组织中的虫卵肉芽肿数量明显减少,单个虫卵肉芽肿平均直径比佐剂对照组、GST蛋白免疫组分别下降了27.08%(P<0.05)和40.53%(P<0.01),差异均有统计学意义。GST-TSP2HD能诱导高水平抗TSP2HD蛋白的特异性抗体IgG,其中IgG1、IgG2b和IgG2c亚类可能在小鼠抗血吸虫感染保护性免疫中发挥重要作用。结论日本血吸虫四跨膜蛋白是一个有效的日本血吸虫病疫苗候选分子。
- 余传信殷旭仁李健吴宇迪华万全梁幼生高琪
- 关键词：日本血吸虫免疫小鼠
- 低剂量环磷酰胺对血吸虫感染小鼠的影响
- 2009年
- 目的探讨使用低剂量环磷酰胺对血吸虫感染免疫的影响。方法小鼠经腹腔注射低剂量环磷酰胺(50mg/kg),在体内创造并维持一个Th1型免疫环境。观察小鼠外周血、脾脏调节性T细胞水平及血清细胞因子的动态变化。采用半定量逆转录聚合酶链反应检测经环磷酰胺处理的调节性T细胞上Foxp3基因表达水平。用(30±1)条血吸虫尾蚴感染处于Th1型免疫反应状态小鼠,42d后剖杀,计算减虫率、减卵率,通过组织切片观察小鼠肝脏组织病理变化。结果低剂量环磷酰胺可以降低小鼠外周血、脾脏中的调节性T细胞水平,并下调Foxp3的表达,使小鼠血清IL-2、IFN-γ上升,IL-4、IL-10及TGF-β水平下降,免疫反应向Th1型转变。与对照组相比,用药组的血吸虫虫卵产量明显下降,小鼠肝脏虫卵肉芽肿病变明显减轻。结论低剂量环磷酰胺可调节小鼠的免疫反应朝Th1发展,可以降低血吸虫虫卵产量,并减轻肝脏虫卵肉芽肿病变。
- 余传信吴宇迪王玠殷旭仁华万全许永良梁幼生高琪
- 关键词：日本血吸虫环磷酰胺肉芽肿小鼠
- 吡喹酮对血吸虫卵肉芽肿与肝纤维化作用的研究Ⅱ吡喹酮对小鼠肺部血吸虫卵肉芽肿内细胞的影响被引量：6
- 2010年
- 目的研究应用吡喹酮后小鼠肺部血吸虫卵肉芽肿内细胞的变化。方法48只小鼠均分4组。A组:虫卵致敏组,先于小鼠腹壁皮下注入新鲜日本血吸虫卵,10d后由尾静脉注入虫卵;B组:吡喹酮短期应用组,致敏方法同A组,于尾静脉注入虫卵前1d起灌服吡喹酮300mg/(kg.d)连续3d;C组:吡喹酮持续应用组,致敏方法同A组,于尾静脉注入虫卵前1d起灌服吡喹酮75mg/kg,1日2次,连续5d,停药2d后反复用药至剖检;D组:第29天起应用吡喹酮组,服法同C组。各组均在尾静脉注射虫卵后7、14、28、56d分别剖杀3只,取肺组织切片,HE染色,在每组肺连续切片内选含毛蚴的虫卵肉芽肿25～30个,分类计数每个肉芽肿内的中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、纤维母细胞、巨噬细胞,计算其平均值并作比较。结果与A组比较,应用吡喹酮的3个实验组,中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞均显著减少,纤维母细胞增高的幅度也明显为低,差异均有统计学意义,而以C组最为显著,第56天,中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞分别减少了54.4%、87.0%和23.1%,纤维母细胞增高的幅度减少了59.4%。各组淋巴细胞数目变化不大。结论吡喹酮能明显抑制虫卵肉芽肿内炎细胞的聚集、纤维母细胞的增生。
- 许永良李洪军黄一心余传信王铁生吴中兴
- 关键词：吡喹酮日本血吸虫肉芽肿嗜酸性粒细胞纤维母细胞
- 重组日本血吸虫超氧化物歧化酶融合蛋白对小鼠免疫保护作用的研究
- 2008年
- 目的探讨重组日本血吸虫胞浆内超氧化物歧化酶(SOD)融合蛋白在抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法采用亲和层析方法制备纯化表达的重组SOD融合蛋白。用重组SOD融合蛋白加福氏佐剂,免疫C57BL/6J小鼠,4周后用(45±2)条日本血吸虫尾蚴攻击感染,45d后剖杀小鼠,计算减虫率和减卵率,组织切片观察小鼠肝脏的病理变化。结果实验组减虫率为35.63%,减卵率为31.17%。实验组小鼠肝脏虫卵肉芽肿数比对照组少,单个肉芽肿的平均直径比对照组小22.32%,血清抗SOD融合蛋白特异性抗体亚类IgG1、IgG2a、IgG2b水平明显高于对照组(P均<0.05)。结论重组SOD分子能诱导一定水平的抗日本血吸虫感染免疫保护作用。
- 余传信李健殷旭仁吴宇迪华万全宋慧卓梁幼生高琪
- 关键词：日本血吸虫超氧化物歧化酶免疫小鼠
- 日本血吸虫四跨膜蛋白第二亲水基团(TSP2HD)基因合成、表达与免疫原性研究被引量：5
- 2008年
- 目的合成和表达日本血吸虫四跨膜蛋白第二亲水基团(TSP2HD)基因,并研究其免疫原性。方法采用重叠PCR人工合成日本血吸虫TSP2HD(aa107～aa182)完整基因片段,经测序正确后,将此片段插入表达载体pGEX-4T-3,构建重组表达质粒TSP2HD-PG,转化大肠埃希菌BL21(DE3),获得含重组表达质粒的转化子,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察TSP2HD融合蛋白表达情况。用谷胱甘肽(GST)融合蛋白纯化胶(glutathione sepharose 4B)从表达产物裂解上清中纯化GST-TSP2HD融合蛋白,用凝血酶切割融合蛋白,制备纯化的重组TSP2HD蛋白。通过蛋白质印迹(Western blotting)分析重组TSP2HD蛋白与血吸虫病患者血清及血吸虫重感染兔血清的免疫反应性;重组TSP2HD蛋白刺激血吸虫感染小鼠淋巴细胞进行淋巴细胞增殖试验,通过比较实验组与对照组脉冲指数(cpm)值的差异研究重组TSP2HD蛋白的免疫原性。结果经过3轮重叠PCR扩增,获得长228bp的TSP2HD基因,序列分析证实与天然基因序列完全一致。含重组质粒TSP2HD-PG的转化子细菌,经IPTG诱导后表达相对分子质量(Mr)约为34000的可溶性GST-TSP2HD融合蛋白。凝血酶切割GST-TSP2HD融合蛋白获得纯化的重组TSP2HD蛋白。Western blotting分析证明,重组表达蛋白可被血吸虫重感染兔血清和血吸虫病患者血清识别,有较好的免疫反应性;重组TSP2HD蛋白能刺激血吸虫感染小鼠脾细胞增殖,实验组cpm值明显高于对照组,两者间差异有统计学意义(P<0.01)。结论日本血吸虫TSP2HD基因合成及表达获得成功,重组TSP2HD蛋白有天然免疫原性。
- 余传信李健殷旭仁华万全梁幼生高琪
- 关键词：日本血吸虫重叠PCR基因合成免疫原性
