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人肠道病毒71型及柯萨奇病毒A组16型VP1蛋白的真核表达: 2020年; 目的:克隆人肠道病毒71型(EV71)及柯萨奇病毒A组16型(CA16)的VP1蛋白编码基因,构建相应真核表达质粒在体外进行重组表达,检测其细胞内定位,为EV71及CA16的疫苗研究提供基础。方法:通过PCR扩增分别获取EV71及CA16的VP1编码序列,插入pcFlag载体,分别构建EV71及CA16 VP1与FLAG标签融合的真核表达质粒;瞬时转染人胚肾293T细胞及横纹肌肉瘤RD细胞,Western blot法检测融合蛋白的表达,免疫荧光检测融合蛋白的细胞内定位情况。结果:测序表明两种来源VP1蛋白的重组表达质粒构建正确;分别转染两种不同的细胞后,均可通过Western blot检测到相应蛋白表达;免疫荧光检测显示两种毒株的VP1均表达在细胞质中。结论:外源融合表达EV71或CA16 VP1蛋白的真核表达质粒构建成功;所构建质粒分别转染细胞后,均可在细胞质内检测到VP1融合蛋白的表达。; 徐晓园李文丽徐岚李蕊; 关键词：肠道病毒 EV71 柯萨奇病毒 VP1 真核表达

母鼠孕期感染流感病毒对子代小鼠行为学的影响: 2017年; 目的:探讨母鼠孕期感染流感病毒是否会导致子代小鼠行为异常。方法:孕鼠胚胎着床后,分为感染组(用流感病毒PR8滴鼻感染)和生理盐水组(用NS滴鼻),各自产下的5周龄子代小鼠(实验组和对照组)依次测试糖水消耗和旷场实验。结果:与对照组比,实验组小鼠糖水消耗量多,旷场实验进入中央区域次数少,中央活动路程和活动时间均长,差异均具有统计学意义。结论:母鼠孕期感染流感,会使子代小鼠具有多动,精神亢奋等躁狂样行为。提示孕期感染流感病毒会增加子代精神状态异常的风险。; 郑华丽贺妍赵颖王革非李蕊; 关键词：流感病毒子代小鼠

HeLa细胞中Zwint-1选择剪接亚型v7的表达鉴定: 2014年; 目的:验证在HeLa细胞系中是否存在Zwint-1 v7选择性剪切亚型的mRNA和蛋白产物。方法:在缺失片段两侧设计引物,利用PCR和克隆测序验证HeLa细胞中是否存在缺失片段的mRNA;构建Zwint-1 v7 3′端特异区段(Z7)的GST融合表达载体pGEXKG-GST-Z7,转化入BL21菌种诱导表达,菌体经超声破碎和2 mol/L尿素洗涤纯化,融合蛋白经SDS-PAGE电泳并切胶回收后作为抗原与佐剂混合乳化并免疫C57BL/6小鼠,收获多克隆抗血清Anti-Z7,采用Dot b lot检测多克隆抗体的效价,Western blot检测HeLa细胞全蛋白中的Z7蛋白产物。结果:PCR和测序结果表明存在缺失37 bp的核酸片段;SDS-PAGE电泳显示在30.7 kDa处出现明显的蛋白条带;Dot blot结果表明1∶5 000稀释的多克隆抗体能检出12 ng GST-Z7;Western blot结果表明,1∶200稀释的多克隆抗体可识别HeLa细胞中Zwint-1 v7蛋白。结论:本研究在核酸水平和蛋白水平初步验证了HeLa细胞中存在Zwint-1 v7。; 苏景华李蕊刘俊周艳琳陈小璇代剑平王革非李康生; 关键词：HELA细胞原核表达多克隆抗体制备

流感病毒感染小鼠体内肺泡巨噬细胞极化模式的研究被引量：2: 2016年; 目的:研究流感病毒感染小鼠体内肺泡巨噬细胞在不同时期的极化状态。方法:建立小鼠流感病毒感染模型;20G静脉留置针对小鼠全肺进行支气管肺泡灌洗术;贴壁培养分离巨噬细胞并提取其RNA,荧光定量PCR测定其表达水平;取肺泡灌洗液,用ELISA试剂盒检测细胞因子(白细胞介素(IL)-12)。结果:感染组体质量呈下降趋势,之后处于恢复期上升,对照组体质量平缓上升;感染组表达流感病毒PR8 M1基因,第5天显著升高(P<0.000 1),第14天没有检测出M1基因;感染组IL-1β和一氧化氮合酶2(NOS2)表达水平呈先上升后下降趋势,其第5天表达水平明显高于对照组(P<0.000 1);感染组IL-10表达水平在第5天高于第1天,且高于对照组(P<0.05);感染组精氨酸酶表达水平呈先上升后下降趋势,在第1天无检出并低于对照组,第5天达最高值(P<0.000 1);感染组第1天TGFβ表达水平与对照组比低于正常水平(P<0.05);感染组肺泡灌洗液中IL-12浓度在第5天最高(P<0.000 1)。结论:流感病毒感染会致肺泡巨噬细胞极化,在早期肺泡巨噬细胞极化为M1型,随着时间推移,巨噬细胞极化亚型表现为M2型。; 贺妍王革非郑华丽谷李铭李蕊; 关键词：流感病毒支气管肺泡灌洗

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