教育部重点实验室开放基金(KLIB-KF201106)
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
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- 糖蛋白药物表达系统糖基化研究进展被引量：6
- 2013年
- 随着基因重组技术的不断发展和蛋白糖基化机制研究的不断深入,糖蛋白药物对人类健康的重要作用越来越受到重视。迄今为止,哺乳动物表达载体仍然是最常见的药用蛋白生产系统。由于其存在成本高、产率低等问题,酵母和细菌表达系统也日益受到重视。受到理论和技术的限制,细菌表达系统的开发仍存在相当大的困难,而酵母表达系统的开发和应用已经取得了一系列突破性的成果。本文综述了国内外近年来改造不同表达系统N-糖基化途径用于生产人源糖蛋白的研究进展。
- 徐沙中西秀树高晓冬
- 关键词：蛋白糖基化人源化基因工程
- 重构酿酒酵母N-糖基化途径生产人源化糖蛋白被引量：3
- 2014年
- 【目的】为了在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中生产人源化的糖蛋白,必须对N-糖基化途径进行基因工程改造。作者通过敲除一些酵母N-糖基化途径中的特异性糖基转移酶,得到一株可以用于继续表达人类糖基转移酶的重组菌,并通过生长适应性进化技术回复其细胞生长能力。【方法】首先运用酵母遗传学和分子生物学技术敲除酿酒酵母的α-1,3-甘露糖基转移酶基因(ALG3)、α-1,6-甘露糖基转移酶基因(OCH1)和α-1,3-甘露糖基转移酶基因(MNN1)。采用蔗糖酶(invertase)活性染色实验初步检测N-糖链的变化,然后通过高效液相色谱和甘露糖苷酶酶切实验对其糖链结构进行鉴定。重组菌通过在高温条件下进行生长适应性进化,筛选出生长能力回复突变的菌株。【结果与结论】构建了Δalg3Δoch1Δmnn1菌株得到人类糖基化中间体Man5GlcNAc2,并对上述三缺陷型菌株进行适应性进化提高其细胞生长能力和环境适应能力。此外,作者还发现,该重组菌存在少量Man6GlcNAc2结构的糖链。经体外α-1,2-甘露糖苷酶切处理后,糖链Man5GlcNAc2和Man6GlcNAc2均转化为Man3GlcNAc2,表明形成Man3GlcNAc2之后的甘露糖之间均通过α-1,2-糖苷键连接。Δalg3Δoch1Δmnn1菌株的构建获得了生产人源化糖蛋白的酿酒酵母表达系统,为进一步糖基化改造和工业应用提供了良好的基础。
- 贺铁凡徐沙张阁元中西秀树高晓冬
- 关键词：人源化N-糖基化适应性进化酿酒酵母
