国家自然科学基金(30471958)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- Tet-on控制的Luciferase和SupF突变报告基因质粒的构建及其在顺铂致突变作用中的应用研究
- 2008年
- 目的研究TCR在顺铂导致的细胞内DNA损伤和突变过程中的分子机制,并为进一步研究转录偶联修复与突变发生的分子机制提供重要分子生物学依据。方法首先将SupF突变报告基因克隆到带有双向真核启动子的含有Tet调控元件TRE的表达载体pBI-L的多克隆位点(MCS)上,获得pTCR-1,再将SV40ori元件插入pTCR-1载体,最终获得pTCR-2质粒。酶切和DNA测序证实后,用顺铂将pTCR-2进行体外DNA损伤后瞬时转染至Tet-on293细胞,在Dox诱导下培养48h,从细胞内提取质粒,纯化后转化SY204菌株,蓝白斑筛选挑取白色突变斑,计算突变频率并进行DNA测序检测突变频谱。结果经酶切鉴定和测序分析,插入片段长度和序列正确。在Dox诱导下取得了SupF报告基因在转录偶联修复途径中的突变频率与频谱。结论重组的pTCR-2质粒具有在真核细胞中Tet启动的转录活性,应用于顺铂致突变研究中,使转录条件下的突变情况能够得以反映。
- 李劲宋波杨劲陈志文位全芳
- 关键词：质粒顺铂突变频率
- Transcription-coupled repair pathway in UVC-induced SupF gene mutation in Tet-on 293 cell line
- 2008年
- 探索联合抄写的修理( TCR )的角色的目的在在在Tet上的 导致UVC 的 SupF 基因变化的小径 293 房间线，我们设计了并且构造Tet应答的 plasmid DNA pTCR-C1 ，并且利用了这 pTCR-C1 plasmid 获得记者基因在在Tet上由 UVC 导致了的 SupF 的变化频率 293 房间线。方法 SupF 基因被克隆进 Tet 应答的 plamid pBI-L，它包括一个双向 Tet 应答的倡导者，并且被称为 pTCR-C1。pTCR-C1 plasmid 是进在 Tet 上的 transfected 293 房间线，和 SupF 记者基因的变化频率当面被检测并且纪录影片的缺席。结果 pTCR-C1 plasmid 与限制消化并且 DNA 定序的方法被识别。SupF 记者基因的变化频率面对纪录影片比当纪录影片不在时高。TCR 小径在在 Tet 上参加导致 UVC 的 SupF 基因变化的结论 293 房间线。
- Li JinSong BoChen ZhiwenZeng YijunZhou HuchuanWei QuanfangYang Jin
- 关键词：突变频率基因转录
