国家自然科学基金(81070093)
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
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- 相关机构：第三军医大学新桥医院北京军区总医院安徽医科大学更多>>
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- 小G蛋白Rad基因对心肌肥大的影响
- 2014年
- 目的研究Rad基因对心肌细胞肥大的影响,为心肌肥大早期干预提供理论基础。方法针对Rad基因序列构建Rad过表达和低表达腺病毒载体,体外培养乳鼠心肌细胞,分为8组:空白对照组,Ad-GFP组,Ad-RNA干扰(RNAi)组,Ad-Rad组,肥大模型组(心肌营养素1诱导),肥大+Ad-GFP组,肥大+Ad-RNAi组,肥大+Ad-Rad组,48h后检测Rad、心房利钠因子(ANF)mRNA和蛋白表达水平。结果肥大模型组ANF蛋白表达较空白对照组明显升高;肥大+Ad-Rad组ANF蛋白表达较肥大+Ad-GFP组明显降低,肥大+Ad-RNAi组ANF蛋白表达较肥大+Ad-GFP组明显升高(P<0.05)。肥大模型组Rad mRNA和蛋白表达较空白对照组明显降低;Ad-Rad组Rad mRNA和蛋白表达较Ad-GFP组明显增加,Ad-RNAi组Rad mRNA和蛋白表达较Ad-GFP组明显降低(P<0.05)。结论 Rad基因可抑制在细胞水平心肌营养素1诱导的心肌细胞肥大反应。
- 胡保奎牛丽丽耿召华刘玉峰
- 关键词：肌细胞
- 小G蛋白Rad的研究进展
- 2013年
- Rad蛋白是三磷酸鸟苷酸酶(GTPases)的Ras超家族成员之一,是新发现的小G蛋白。Rad蛋白在多种细胞中表达,参与心脏功能的维持,调控心肌细胞凋亡,抑制血管平滑肌迁移,Rad蛋白表达的异常与人类的肿瘤发生发展密切相关。Rad蛋白在生物学和医学中都有重要作用,本文就Rad蛋白的研究进展做一综述。
- 胡保奎牛丽丽耿召华
- 关键词：小G蛋白心肌肥大肿瘤
- 新生大鼠心肌细胞的原代培养及鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的:探讨新生大鼠心肌细胞原代培养的方法,培养存活率高和纯度高的心肌细胞。方法:无菌条件下取出出生1～2 d的SD大鼠心脏,用2.5 g/L胰蛋白酶和2.0 g/LⅡ型胶原酶等量混合液在37℃条件下分次消化心肌组织。以差速贴壁并将时间延长至90 min纯化心肌细胞,48 h后换液。结果:将心肌细胞24 h贴壁生长,于2～3 d心肌细胞伸出伪足,形成细胞簇,同步搏动,频率约80～130次/min,存活率为(93.9±2.8)%,纯度为(91.9±2.2)%。结论:以本实验的方法培养的心肌细胞存活率高、纯度高,是一种较为理想的原代心肌细胞培养方法。
- 胡保奎耿召华祝善俊刘玉峰
- 关键词：细胞培养心肌细胞
- Rad对心肌营养素1诱导心肌细胞肥大作用的实验研究
- 2016年
- 目的探讨小G蛋白Rad对心肌营养素1(CT-1)诱导心肌细胞肥大作用的影响。方法 2011年6月—2013年3月,选取新生健康雄性SD乳鼠60只。构建载有Rad基因的腺病毒载体(Ad-Rad)、含有编码绿色荧光蛋白基因的空白腺病毒载体(Ad-GFP)。取乳鼠心脏并剪碎,进行心肌细胞原代培养。采用随机数字表法将提取的原代心肌细胞平均分为6组,即空白对照组〔转染磷酸盐缓冲液(PBS),刺激物为PBS〕、Ad-GFP组(转染Ad-GFP,刺激物为PBS)、Ad-Rad组(转染Ad-Rad,刺激物为PBS)、CT-1对照组(转染PBS,刺激物为CT-1)、Ad-GFP+CT-1组(转染Ad-GFP,刺激物为CT-1)、Ad-Rad+CT-1组(转染Ad-Rad,刺激物为CT-1)。转染腺病毒载体48 h后,采用流式细胞仪检测腺病毒载体转染率,并采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测Rad、心房钠因子(ANF)、β肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA表达水平,Western blotting法检测Rad表达水平。结果腺病毒载体转染率为95.51%。Ad-Rad组Rad mRNA表达水平高于空白对照组、Ad-GFP组、CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组(P<0.05);Ad-Rad+CT-1组Rad mRNA表达水平高于空白对照组、Ad-GFP组、CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组(P<0.05)。CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组ANF mRNA表达水平高于空白对照组、Ad-GFP组、Ad-Rad组(P<0.05);Ad-Rad+CT-1组ANF mRNA表达水平低于空白对照组、Ad-GFP组、Ad-Rad组、CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组(P<0.05)。CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组β-MHC mRNA表达水平高于空白对照组、Ad-GFP组、Ad-Rad组(P<0.05);Ad-Rad+CT-1组β-MHC mRNA表达水平低于CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组(P<0.05)。Ad-Rad组Rad表达水平高于空白对照组、Ad-GFP组、CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组(P<0.05);Ad-Rad+CT-1组Rad表达水平高于空白对照组、Ad-GFP组、CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组(P<0.05)。结论 Rad具有负性调节CT-1诱导心肌细胞肥大的作用。
- 刘玉峰耿召华牛丽丽
- 关键词：肥大RAD心肌营养素1腺病毒
- 新生大鼠心肌细胞的原代培养及鉴定
- 目的:探讨新生大鼠心肌细胞原代培养的方法,培养存活率高和纯度高的心肌细胞。方法:无菌条件下取出出生1~2 d的SD大鼠心脏,用2.5 g/L胰蛋白酶和2.0 g/LⅡ型胶原酶等量混合液在37℃条件下分次消化心肌组织。以差...
- 胡保奎耿召华祝善俊刘玉峰
- 关键词：细胞培养心肌细胞
- 文献传递
- 心肌营养素1与慢性心力衰竭的研究新进展被引量：6
- 2013年
- 心肌营养素1是近年来新发现的生物标志物,心肌营养素1对慢性心力衰竭的病理生理学机制起着重要的调节作用。慢性心力衰竭患者心肌营养素1血浆水平随着心力衰竭严重程度加重而升高。心肌营养素1参与交感神经元的胆碱能转化,参与诱导炎性细胞因子的产生,参与诱导心肌肥大和心室重构,加剧了慢性心力衰竭病程进展。心肌营养素1与慢性心力衰竭的诊断、治疗及预后价值评价相关联,是一个重要的生物学标志物。这些研究为今后慢性心力衰竭的临床预防、诊断、治疗及预后价值评价提供全新的信息。
- 刘玉峰耿召华
- 关键词：慢性心力衰竭心肌营养素1交感神经元
- 小G蛋白基因重组腺病毒转染乳鼠心肌细胞实验研究
- 2013年
- 目的研究含有小G蛋白基因Rad重组腺病毒在体外转染乳鼠心肌细胞后的转染效率及表达。方法构建Rad腺病毒载体,分别以感染复数5、10、15和20转染体外培养的乳鼠心肌细胞,48h后,采用荧光显微镜观察转染后荧光强度,流式细胞仪检测转染率。以感染复数为20转染后分3组:空白对照组,阴性对照组和Rad过表达组,3d后,采用RT-PCR、Western blot检测Rad基因表达情况。结果感染复数5、10、15和20对应转染率分别为29.84%、69.69%、77.20%和84.81%。腺病毒转染3d后,Rad过表达组心肌细胞Rad基因mRNA和蛋白表达水平较空白对照组和阴性对照组显著增加(P<0.05)。结论外源性Rad基因可在乳鼠心肌细胞中稳定表达。
- 胡保奎牛丽丽耿召华刘玉峰
- 关键词：肌细胞心脏转染
