艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项(2008ZX10003-009)
- 作品数：2 被引量：12H指数：1
- 相关作者：穆成王撷秀谢彤李桂莲赵德福更多>>
- 相关机构：天津市疾病预防控制中心天津市结核病控制中心北京市结核病胸部肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- SPLUNC1-Ig融合蛋白在CHO细胞中的稳定表达及活性初步分析
- 2010年
- 目的 构建短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1（SPLUNC1）-Ig融合蛋白表达体系并初步分析其活性.方法 在质粒PGEM-T easy-SPLUNC1基础上联合应用大引物法和巢式PCR实现目的序列147位碱基的定点突变,亚克隆于表达载体PDH3,构建PDH3-SPLUNC1的表达质粒.稳定转染CHO/dhfr-细胞完成SPLUNC1-Ig融合蛋白的表达,并在氨甲喋呤（MTX）加压下筛选出稳定表达的细胞株,应用ELISA检测蛋白表达的水平.利用蛋白A亲和层析系统纯化获得的SPLUNC1-Ig融合蛋白,并用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western免疫印迹进行鉴定,经ELISA、Western免疫印迹分析SPLUNC1-Ig融合蛋白的特异性和活性.结果 经酶切及测序结果证实预定位点已突变,琼脂糖凝胶电泳出现大小为768 bp的目的条带;测序发现SPLUNC1基因的147位碱基A均已突变成C,证实PDH3-SPLUNC1表达质粒构建成功.RT-PCR扩增出768 bp大小的SPLUNC1基因.ELISA检测CHO/dhfr-细胞上清表明SPLUNC1-Ig融合蛋白在3个月内稳定表达,水平与时间的延长无关.经亲和层析获得SPLUNC1-Ig融合蛋白,SDS-PAGE电泳可见相对分子质量约52 500大小的条带.Western免疫印迹也在45 000与66 200之间出现与预测位置相符的特异目的条带.SPLUNC1-Ig融合蛋白浓度为0.39 mg/L时与脂多糖结合活性明显高于阴性对照,6.25 mg/L时与脂多糖结合的A450值基本达到平台期.Western免疫印迹也显示未变性的脂多糖可与SPLUNC1-Ig融合蛋白结合,而变性后却不能与之结合.结论 建立了非切胶纯化的定点突变方法,顺利实现了表达质粒的构建.成功构建SPLUNC1-Ig融合蛋白表达体系,其分泌的目的蛋白具有蛋白的天然结构和体外活性.
- 薛君力赵雁林易玲王小珏李惠文韦攀健郑小芳张洪涛
- 关键词：CHO细胞脂多糖类免疫活性
- 天津市北京基因型结核分枝杆菌流行特征及与耐药表型关系研究被引量：12
- 2011年
- 目的 了解北京基因型结核分枝杆菌在天津市人群中的分布、流行特征及其与耐药表型的关系.方法 收集2008年1月至2009年6月天津市结核病控制中心和10个区（县）结核病防治机构肺结核患者中初次分离培养的结核分枝杆菌656株及患者管理信息、临床信息和实验室信息.菌株对利福平、异烟肼、链霉素和乙胺丁醇的药物敏感性试验采用比例法.应用多重PCR法鉴定北京和非北京基因型菌株,并分析北京基因型菌株与耐药表型的关系.结果 本研究中菌株的总耐药率为26.98%,耐多药率为6.25%.北京基因型菌株600株（91.46%）,非北京基因型56株（8.53%）,其分布与天津市户籍（x2=4.26,P=0.039）有关,未见与耐药表型间有明显相关性.结论 北京基因型菌株是天津市的主要流行株,感染北京基因型结核分枝杆菌的天津市户籍患者的比例明显高于本地区流动人口患者,但尚未发现北京和非北京基因型菌株之间在耐药方面有明显的差异.
- 巨韩芳王撷秀李桂莲谢彤赵德福李尚伦李敬新赵慧穆成
- 关键词：结核分枝杆菌北京基因型耐药
