国家自然科学基金(30371466)
- 作品数：8 被引量：47H指数：4
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- 大鼠脊髓全横断损伤模型的建立被引量：9
- 2005年
- 目前用于脊髓全横断的动物模型,常遗有部分未损脊髓组织,局部脊髓损伤范围很大,尤其是破坏了的血运扩大了继发性变性,造成了复杂的局部病理变化,致使难以分析治疗性脊髓伤区内移植的疗效。因此迫切需要一种还原论式的脊髓横断模型,本实验设计了一种切割辅以吸除的方法,可以在局部造成平均约0.6mm的清洁横断区,同时保存脊髓腹、背动脉及脊髓背静脉的大鼠脊髓横断模型,并用H.E.染色法、神经丝(NF)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的免疫组织化学方法及生物素化的葡萄糖胺(BDA)的追踪方法检验损伤区及其两侧脊髓的组织反应。
- 刘锐游思维刘惠玲沈学锋赵宇鞠躬
- 关键词：脊髓全横断损伤动物模型免疫组织化学
- 运用图像处理软件将同视野两种单标记免疫荧光图像合成为双标记图像的方法研究被引量：1
- 2005年
- 探讨以计算机图像处理技术将普通荧光显微镜采集的同视野单标记免疫荧光图像合成为双标记图像的方法。应用AdobePhotoshop7.0和ImageJ两个图像处理软件,将普通荧光显微镜采集的同视野单标记荧光图像叠加处理成双标记荧光图像,并同激光扫描共聚焦显微镜获得的同一双标记免疫荧光图像进行比较。普通荧光显微镜采集的单标记荧光图像在分辨率及清晰度上逊于激光扫描共聚焦显微镜采集的单标记图像,但显示的脊髓室管膜细胞形态更为完整,细胞突起较长且更连续。因此,在没有激光扫描共聚焦显微镜时,可用AdobePhotoshop7.0或ImageJ图像处理软件将普通荧光显微镜采集的同视野两种单标记免疫荧光图像合成为保持原有特点、简便而清晰的双标记荧光图像。
- 焦西英程希平郎兵张萍王百忍鞠躬游思维
- 关键词：图像处理软件
- 多聚ADP-核糖聚合酶抑制剂对高浓度锌损伤PC12细胞的保护作用被引量：2
- 2005年
- 探讨多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)抑制剂3-氨基苯甲酰胺(3-AB)对400μmol/L氯化锌损伤PC12细胞的保护作用及其对锌造成的细胞死亡类型的影响。应用MTT法,免疫细胞化学和Western印迹分别测定PC12细胞的存活率和PARP活性;用Hoechst33342/PI荧光双染色、膜联蛋白V结合实验及DNA断裂分析等方法检测细胞死亡类型。结果表明:在400μmol/L氯化锌的作用下,细胞存活率降至(22.7±4.6)%,PARP活性增强,坏死、凋亡和正常细胞百分比分别为(58.4±6.3)%、(18.0±5.6)%及(23.6±4.2)%;3-AB使细胞存活率提高至(76.9±4.7)%,PARP活性减弱,坏死细胞百分数降至(19.2±5.2)%,而正常和凋亡细胞百分数增加到(43.3±1.9)%和(37.5±6.5)%。实验证明,PARP参与了高浓度锌诱导的PC12细胞损伤,抑制PARP活性可提高细胞的存活率,而这种保护作用在于减少细胞的坏死而非凋亡。
- 史明郑春霞赵湘辉游思维
- 关键词：抑制剂PC12细胞神经保护作用3-氨基苯甲酰胺
- 嗅鞘细胞培养液对海仁藻酸损伤脊髓神经元一氧化氮产生的影响被引量：3
- 2005年
- 目的研究嗅鞘细胞培养液(OECCM)对海仁藻酸(KA)损伤后原代培养脊髓神经元的作用,进一步探讨其保护的作用机理。方法采用原代细胞培养法,分别培养了胚胎小鼠脊髓神经元和成年大鼠的嗅神经鞘细胞(OECs),收集OECCM。通过给予KA建立体外的损伤模型,KA分别作用6,8,12h后,加入OECCM继续培养24￣36h。然后进行抗神经元型一氧化氮合酶(ncNOS)免疫细胞化学染色,观察细胞ncNOS表达情况,并对各组ncNOS阳性神经元数目进行统计,同时运用四唑盐(MTT)比色法检测神经细胞活性;最后对不同组的一氧化氮合酶(NOS)阳性细胞染色情况、阳性细胞数目和细胞活性进行比较。结果KA作用后,一氧化氮(NO)都出现异常表达,但与实验组(OECCM干预组)相比,OECCM处理组NO表达水平明显低于单纯KA损伤组。OECCM处理组NOS阳性细胞数目(6h组,34.3±5.25;8h组,40.6±3.68),明显低于对照组(6h组,42.3±3.48;8h组,54.5±6.30)(P<0.01),在KA损伤12h时,两组NOS阳性细胞数(52.3±5.23vs61.32±6.45)(P<0.05);而细胞活性(6h,0.372±0.034;8h,0.312±0.026)明显高于对照组(6h,0.283±0.041;8h,0.219±0.033)(P<0.01),12h时两组细胞活性没有明显差异(0.199±0.012vs0.202±0.032)(P>0.05)。结论OECCM中可能含有一些保护脊髓神经元免遭KA损伤的因子,这些因子可能在参与抑制NOS异常表达起了重要作用。
- 杨浩李静雯罗娜游思维鞠躬
- 关键词：嗅鞘细胞细胞培养脊髓一氧化氮
- 脊髓坏死面积的测量方法介绍被引量：13
- 2006年
- 将Photoshop7.0图像处理软件应用于脊髓损伤后坏死面积的测量,并与图像分析软件Quantimet570的传统测量方法进行比较。显微镜采集成年大鼠损伤脊髓的HE染色组织切片的数字化图像,运用Photoshop软件选取坏死区域并测其面积。另用Quantimet570软件测量同一切片同视野经Camera Lucida描绘的坏死区线图的面积,两种测量方法所得坏死区面积无显著性差异。因此,同Quantimet570软件相比,Photoshop7.0图像处理软件测量脊髓损伤后坏死区面积的功效相当,并具有功能强大、简便、快捷、直接及无需额外辅助设备的特点。
- 焦西英程希平钱新宏赵宇鞠躬游思维
- 关键词：脊髓
- 构建还原论式大鼠脊髓全横断损伤模型的性别影响被引量：3
- 2005年
- 目的:建立保留血液供应的大鼠还原论式脊髓全横断损伤模型,探讨性别因素对其实验模型构建和应用的影响。方法:实验于2003-06/2004-12在解放军第四军医大学全军神经科学研究所实验室完成。选择一级SD大鼠90只,雄50只,雌40只,体质量225～250g。分成雄鼠1组40只,雄鼠2组10只,雌鼠组40只,用切割辅以吸除的方法全横断脊髓,保留脊髓腹、背动脉和背静脉,雄鼠2组致伤后即刻处死取材,雄鼠1组和雌鼠组观察6周后处死取材。雄鼠2组行苏木精-伊红染色观察损伤区脊髓离断情况,雄鼠1组和雌鼠组行苏木精-伊红染色、神经丝和胶质纤维酸性蛋白免疫组织化学染色、生物素化的葡萄糖胺追踪实验观察损伤区脊髓离断情况,行Bas-so-Beattie-Bresnahan(BBB)运动功能评定并记录病死率、压疮发生率。结果:进入BBB运动功能结果分析雄鼠1组和雌鼠组分别为27只和37只大鼠,雄鼠1组脱失13只,雌鼠组脱失3只。①雄鼠2组苏木精-伊红染色显示大鼠脊髓完全横断且保留了脊髓腹、背动脉和背静脉。雄鼠1组和雌鼠组的苏木精-伊红染色、神经丝和胶质纤维酸性蛋白免疫组织化学染色、生物素化的葡萄糖胺追踪实验均显示两组模型损伤区脊髓离断完全,无组织残留,两组间差异无显著性意义(P>0.05);两组BBB运动功能评分结果差异也无显著性意义(P>0.05)。
- 刘锐游思维刘惠玲沈学锋赵宇鞠躬
- 关键词：脊髓损伤神经再生
- 成年大鼠脊髓损伤后血-脊髓屏障通透性变化被引量：10
- 2006年
- 为了观察脊髓挤压伤后血-脊髓屏障（BSCB）的通透性变化，本研究选用体重180～200g成年雄性SD大鼠39只，随机分为对照组（n=3）和脊髓损伤组（n=6）。后者又分为伤后0、8、24、72h以及1周、2周等6组，每组6只，再分为A组、B组，每组各3只。脊髓损伤组A组的组织切片行H．E．染色，显微镜下观察脊髓损伤后的形态学变化。对照组和B组动物股静脉注射30g／L伊文思蓝，30min后，以温生理盐水及4％多聚甲醛灌注动物，取出脊髓，行冰冻切片，荧光显微镜下观察。结果观察到，脊髓挤压伤术后72h内，损伤区周围均可见伊文思蓝染色，至1周后损伤区周围未见伊文思蓝染色。本研究结果提示，脊髓损伤72h内可能为有效给药时间窗，1周后给药，药物对脊髓损伤的治疗作用将难以达到治疗目的。
- 赵宇沈学锋程希平焦西英游思维鞠躬
- 关键词：脊髓损伤伊文思蓝
- 糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白与炎症反应关系的研究被引量：8
- 2007年
- 目的探讨糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白（GILZ）在炎症反应过程中的作用机制。方法采用无血清RPMI1640培养基分两组培养人单核细胞株THP-1细胞，其中刺激组加入地塞米松（DEX）刺激，而对照组仅加无血清RPMI1640培养基。12h后提取两组细胞总RNA和总蛋白；用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法在转录水平半定量检测GILZ基因；用蛋白质免疫印迹法（Western blotting）在翻译水平检测核转录因子κB（NF-κB）p65与激活蛋白-1（AP-1）的蛋白表达。收集10例临床创伤患者[创伤严重度评分（ISS）≥16分]伤后24h内的外周血，提取白细胞后分为刺激组和对照组，对照组给予无血清RPMI1640培养基。刺激组在对照组的基础上加入DEX刺激，培养12h后提取白细胞总RNA和总蛋白；用RT-PCR方法在转录水平半定量检测GILZ基因；用Western blotting方法在翻译水平检测NF-κB p65与AP-1的蛋白表达。结果在DEX刺激下，DEX刺激组THP-1细胞和创伤患者外周血白细胞GILZ mRNA表达水平均较对照组升高（P均＜0．01）；DEX刺激组NF-κB p65与AP-1蛋白在THP-1细胞和创伤患者外周血白细胞的表达水平均低于对照组（P均＜0．01）。结论糖皮质激素可上调GILZ基因表达；GILZ的高表达可以抑制NF-κB与AP-1的活性，具有抗炎症反应的作用。
- 白祥军李波王海平杨朝晖李思齐
- 关键词：糖皮质激素地塞米松核转录因子-ΚB激活蛋白-1全身炎症反应综合征
