国家自然科学基金(30371403)
- 作品数：8 被引量：10H指数：3
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- 相关机构：第二军医大学解放军第94医院更多>>
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- 介导hyrdC基因重组腺病毒对胃癌SGC-7901细胞生长影响的实验研究
- 2011年
- 目的观察介导hyrdC基因重组腺病毒对胃癌细胞生长的影响。方法将已构建的Ad-hyrdC重组腺病毒转染人胃癌SGC-7901细胞,并设置Ad-LacZ组以及空白对照组,免疫组化法检测hyrdC蛋白在胃癌SGC-7901细胞中的表达情况,采用绘制生长曲线法和MTT法观察和比较各组胃癌细胞的生长差异,将各组胃癌细胞接种裸鼠皮下构建裸鼠荷瘤模型以比较各组瘤体大小的差异。结果绘制生长曲线显示Ad-hyrdC组胃癌SGC-7901细胞生长显著增快,从48h后其细胞数与空白组以及Ad-LacZ组均有统计学差异(P<0.05),而Ad-LacZ组细胞与空白组无统计学差异(P>0.05);Ad-hyrdC组细胞MTT值显著高于Ad-LacZ组以及空白组(P<0.05),Ad-LacZ组与空白组无统计学差异(P>0.05);而Ad-hyrdC组胃癌瘤体与Ad-LacZ组及空白组胃癌荷瘤模型瘤体大小之间无统计学差异(P>0.05)。结论 hyrdC基因具有促进胃癌细胞生长的功能,hyrdC基因有可能成为胃癌基因治疗领域的新靶点。
- 杨庭松毕建威黄盛东申晓军魏国袁扬龚德军
- 关键词：胃肿瘤腺病毒科
- RNA干扰抑制yrdC蛋白表达对人胃癌细胞株BGC-823体外增殖能力的影响被引量：4
- 2007年
- 目的:构建针对人yrdC基因siRNA的重组腺病毒Ad-shyrdC并观察其转染人胃癌细胞株BGC-823后对细胞体外增殖能力的影响。方法:筛选高效抑制yrdC蛋白表达的RNAi位点,并构建表达siRNA的重组腺病毒,转染人胃癌细胞株BGC-823后以Western印迹法鉴定细胞yrdC蛋白表达的变化;同时通过MTT法、流式细胞术分别测定BGC-823细胞增殖活性和增殖指数的变化。结果:成功构建了抑制人yrdC基因siRNA的重组腺病毒Ad-shyrdC;转染BGC-823细胞后可明显抑制yrdC蛋白表达,并使所测定的细胞MTT值和细胞增殖指数提示BGC-823细胞增殖活性下降(P<0.05)。结论:腺病毒介导的RNAi能有效地抑制BGC-823细胞中yrdC蛋白表达,并降低其增殖活性。
- 朱宏亮毕建威黄盛东袁扬龚德军方国恩
- hyrdC基因表达水平对胃癌细胞SGC-7901增殖影响的实验研究
- 2011年
- 目的观察胃癌SGC-7901细胞株中hyrdC基因的不同表达水平对细胞增殖的影响。方法分别将已构建的携带hyrdC基因的Ad-hyrdC重组腺病毒和靶向抑制hyrdC基因表达的Ad-shyrdC重组腺病毒,转染人胃癌SGC-7901细胞株,同时设空病毒Ad-null组和正常对照组,利用绘制生长曲线法和MTT法观察各组间胃癌细胞增殖的差异;将各组胃癌细胞接种裸鼠皮下构建裸鼠荷瘤模型,比较各组胃癌细胞瘤体生长率的差异。结果 Ad-hyrdC组胃癌SGC-7901细胞增殖显著快于Ad-shyrdC组、Ad-null组和正常对照组,48h后细胞数与Ad-shyrdC组、Ad-null组和正常对照组比较有统计学差异(P<0.05);Ad-shyrdC组胃癌SGC-7901细胞的光吸收值明显低于Ad-hyrdC组、Ad-null组和正常对照组(P<0.05);Ad-shyrdC组瘤体生长率较Ad-hyrdC组、Ad-null组以及正常对照组明显减慢(P<0.05),Ad-hyrdC组瘤体生长率较Ad-shyrdC组、Ad-null组以及正常对照组明显加快(P<0.05)。结论 hyrdC基因具有促进胃癌细胞生长的功能,而靶向沉默hyrdC基因表达可抑制胃癌细胞的生长,hyrdC基因有望成为胃癌基因治疗领域的新靶点。
- 杨庭松王旭东申晓军魏国黄盛东袁扬毕建威
- 关键词：胃肿瘤腺病毒科RNA干扰
- 肿瘤相关基因hyrdC基因重组腺病毒的构建和鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的利用AdEasy腺病毒载体系统构建携带hyrdC基因的高滴度重组腺病毒，为进一步研究hyrdC基因的功能及机制做准备。方法以逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法扩增hyrdC基因，构建腺病毒重组质粒pShutth—CMV—hyrdC，线性化后采用电穿孔法与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共同转化BJ5183感受态大肠杆菌，挑选重组质粒将其转染293细胞，获得高滴度重组腺病毒Ad—hyrdC。结果成功地制备了高滴度携带hyrdC基因的重组腺病毒。结论采用AdEasy腺病毒载体系统能够构建携带hyrdC基因的重组腺病毒，为进一步研究hyrdC基因的功能及机制奠定了基础。
- 杨庭松毕建威黄盛东袁扬龚德军朱宏亮
- 关键词：重组腺病毒腺病毒载体
- siRNA靶向沉默hyrdC基因对胃癌细胞SGC-7901生长作用的研究被引量：3
- 2012年
- 目的:观察RNA干扰靶向沉默hyrdC基因对胃癌SGC-7901细胞生长的影响。方法:将已成功构建的携带hyrdC基因以及沉默hyrdC基因的重组腺病毒Ad-hyrdC、Ad-shyrdC分别转染胃癌SGC-7901细胞,台盼蓝细胞计数和MTT法观察各组胃癌细胞生长情况,将胃癌细胞接种裸鼠皮下构建裸鼠荷瘤模型观察各组胃癌瘤体的生长情况。结果:Ad-shyrdC组细胞生长明显慢于Ad-hyrdC、Ad-null和正常对照组,差异有统计学意义,P=0.02;Ad-shyrdC组细胞的MTT值明显低于Ad-hyrdC、Ad-null和正常对照组,P=0.03;Ad-shyrdC组胃癌瘤体生长率较Ad-hyrdC、Ad-null组以及正常对照组明显减慢,P=0.02。结论:hyrdC基因具有促进胃癌细胞生长的功能,而沉默hyrdC基因可抑制胃癌细胞的生长,hyrdC基因有望成为胃癌基因治疗领域的新靶点。
- 杨庭松毕建威申晓军魏国黄盛东袁扬
- 关键词：细胞系腺病毒科RNA干扰
- Expression of human yrdC gene promotes proliferation of gastric carcinoma cells
- 2009年
- 研究的目的是在胃的癌房间学习人的 yrdC 基因的功能的目的。方法人的 yrdC 基因被 RT-PCR 从人的脾组织孤立。反人的 yrdC 单音的同种细胞的抗体被 hybridoma 准备房间技术。带 yrdC 基因的 Recombinant 侵入人体气管粘膜的病菌 Ad.yrdC 被使用 AdEasy adenoviral 向量系统构造。Recombinant 侵入人体气管粘膜的病菌 Ad.yrdCshRNA 调停了 yrdCshRNA 被 RNA 干扰技术准备。中等区别的胃的腺癌 BGC-823 房间是 transfected， transfected 房间的吸收度在由甲基 thiazolyl tetrazolium (MTT ) 的 490 nm 是计算的方法。transfected Ad.yrdC 组的结果 A 价值比 non-transfected 和 transfected 广告的显著地大。Ad.yrdCshRNA 的空组，和价值组织比 non-transfected 和 transfected 广告的显著地低。空组。yrdC 基因的结论表示有支持胃的癌房间的增长的功能。
- Tingsong YangXiaojun ShenJianwei BiShengdong HuangGuo WeiHongliang ZhuXiaojun TangYang YuanDejun Gong
- 关键词：RNA干扰技术转染细胞重组腺病毒杂交瘤细胞
- 人类肿瘤相关蛋白hyrdC的原核表达、抗体制备及其在胃癌中的初步检测被引量：7
- 2006年
- 目的:制备原核表达的hyrdC纯化蛋白及相应单克隆抗体,并以该抗体初步检测胃癌中hyrdC蛋白的表达。方法:用RT-PCR方法获取人hyrdC基因序列,插入原核表达载体pET32a构建重组质粒,纯化得到TRX-hyrdC融合蛋白,将其作为抗原免疫BALB/c小鼠,按常规方法制备抗hyrdC单克隆抗体,以ELISA、Western印迹法筛选及鉴定;采用免疫组织化学法(SP法)比较胃癌组织及瘤旁正常组织中hyrdC抗体水平的差异。结果:测序结果显示克隆的hyrdC ORF与GenBank中登录的序列一致。所获TRX-hyrdC融合蛋白相对分子质量与理论计算值相符,获得2株分泌抗hyrdC单克隆抗体的细胞株;Western印迹法显示该抗体能特异性地结合人hyrdC蛋白;SP法测定显示,hyrdC蛋白在胃癌组织中表达明显高于正常胃组织(P<0.001)。结论:成功制备了抗hyrdC单克隆抗体;SP法测定胃癌组织与瘤旁正常组织中hyrdC抗体水平有显著差异。
- 唐晓军毕建威黄盛东龚德军袁扬
- 关键词：单克隆抗体胃肿瘤
- yrdC靶向RNA干扰抑制BGC-823细胞裸鼠体内成瘤的实验研究
- 2009年
- 目的检测胃癌组织及癌旁正常组织中的yrdC的mRNA、蛋白表达。构建表达yrdC靶向RNA干扰的重组腺病毒,转染人胃癌细胞株BGC-823,检测干扰后BGC-823细胞yrdC蛋白水平变化,转染后细胞移植裸鼠体内成瘤,观察yrdC沉默后移植瘤生长的变化。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法,检测7例胃癌组织及癌旁正常组织中的yrdC的mRNA、蛋白表达。构建表达针对人yrdC的si RNA的重组腺病毒,重组腺病毒Ad-shyrdC转染BGC-823细胞,Western blot检测干扰后BGC-823细胞yrdC蛋白水平变化。裸鼠分3组,分别皮下移植转染Ad-shyrdC、空病毒Ad-Null及未转染的BGC-823细胞(1×107/只),5周后检测裸鼠肿瘤的体积及质量,肿瘤HE染色及yrdC、PCNA、TUNEL免疫组化染色,观察各组yrdC蛋白表达、细胞增殖能力及细胞凋亡的变化。结果胃癌组织中yrdC mRNA及蛋白表达量均比癌旁组织增高。成功构建表达抑制yrdC基因的重组腺病毒Ad-shyrdC,腺病毒介导的yrdC靶向RNA干扰能特异性抑制BGC-823中yrdC蛋白的表达,Ad-shyrdC组肿瘤细胞yrdC蛋白水平明显下降。转染BGC-823细胞后移植裸鼠体内,5周后成瘤体积及质量较Ad-Null组及PBS对照组明显减小(P<0.05);yrdC蛋白表达减少,PCNA染色提示肿瘤细胞增殖活性受抑,TUNEL染色显示凋亡明显增多(P<0.01)。结论腺病毒介导的RNA干扰能有效抑制BGC-823细胞裸鼠体内成瘤,yrdC基因有可能成为胃癌基因治疗的靶点。
- 朱宏亮毕建威黄盛东方国恩袁扬杨庭松
- 关键词：RNA干扰胃癌细胞裸鼠
