国家自然科学基金(30070597)
- 作品数：5 被引量：44H指数：3
- 相关作者：王艺磊张子平贾锡伟邹志华王淑红更多>>
- 相关机构：集美大学密歇根州立大学香港城市大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金高等学校骨干教师资助计划福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学自然科学总论更多>>
- 锯缘青蟹性腺发育与性别分化相关组织混合线性化cDNA文库构建及EST初步分析被引量：4
- 2009年
- 分别提取锯缘青蟹Scylla serrata卵巢、精巢、眼柄、促雄腺的总RNA,等量混合后经oligotex试剂分离mRNA,利用SMART(Switch mechanisms at the 5′end of RNA transcript)技术及DSN(duplex-specific nuclease)的特性构建线性化cDNA质粒文库。经检测文库约含有5.3×107重组子,扩增后的文库含有1011以上重组子。文库的插入cDNA长度为0.5—2.5kb,重组率大于98%。从构建的文库中随机挑取5 202个克隆进行大规模EST测序,获得3 346条ESTs,其中长度大于100bp的高质量ESTs 2 697条。经拼接与软件分析,2 697 ESTs代表了2 522个Unigenes,包括2 355个Singlets和167个Contigs,冗余率6.49%。EST序列经生物信息学分析(BLASTX,e<10-6),发现了Sry-like protein C、Sox14 protein、Sox4b、sex-determining protein fem-1、vitellogenin、vitellogenin receptor、cyclin A、cathepsin C和cyclin-dependent kinase 2等与性别分化和性腺发育相关的基因,以及热休克蛋白家族、泛素系统、抗氧化防御体系和抗病相关的功能基因。该文库具有较高的质量和利用价值,可为更大规模EST分析及采用基因芯片技术开展锯缘青蟹性腺发育及性别分化相关功能基因的研究奠定基础。
- 邹志华张子平王艺磊陈锦民贾锡伟王淑红林鹏
- 关键词：锯缘青蟹SCYLLASERRATA性腺发育性别分化EST
- 利用引物退火控制技术克隆日本囊对虾性腺差异表达基因被引量：2
- 2011年
- 为了解日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)性腺发育及分化的分子机制,本研究采用改良的引物退火控制技术克隆到了共8个精巢、卵巢的差异表达基因.其中4个为已知基因,分别为凝血酶敏感蛋白基因、皮质棒蛋白基因、增殖细胞核抗原基因和泛素缀合酶基因;4个为未知基因,分别命名为MjACP3-T、MjACP4-T、MjACP15-T和MjACP4-O基因.采用实时定量PCR方法分析了4个未知基因在性腺发育过程的表达谱,结果表明:MjACP3-T、MjACP4-T和MjACP15-T基因在日本囊对虾精巢和卵巢中的表达量有显著差异,且在各个时期精巢的表达量均高于卵巢,说明这3个基因可能在精巢的发育中起到某些重要作用.卵巢MjACP4-O基因的表达量变化较大,第5期卵巢的相对表达量达到最高(为1.38),而其他各个阶段的变化较大,在第4期卵巢的相对表达量最低(为0.03).在精巢中,MjACP4-O基因的表达量随着精巢逐渐发育成熟呈下降趋势.定量PCR结果与引物退火控制技术的结果有着很好的一致性.研究结果表明,引物退火控制技术是一种简单高效的克隆差异表达基因的技术.采用该技术所克隆到的8个精巢、卵巢的差异表达基因,为进一步了解日本囊对虾性腺发育分化的分子机制提供了基础材料.
- 贾锡伟沈冰玲张子平王艺磊谢芳靖
- 关键词：海洋生物学日本囊对虾性腺差异表达基因
- 日本对虾(Penaeus japonicus)性腺差异表达基因GD13之cDNA5’端克隆被引量：1
- 2004年
- 采用基于SMART(SwitchingMechanismAt5'endofRNATranscript)原理的cDNA末端快速扩增技术(RapidAmpli ficationofcDNAends:RACE),对日本对虾性腺差异表达基因cDNA5'端进行克隆,即在逆转录过程中通过SMARTⅡoligo的介导,在cDNA第1条链的3'端接上接头,然后根据已知序列设计的基因特异性引物(GSP1和GSP2)和接头引物(UPM和NUP)进行Nested PCR特异性扩增,并对特异产物进行克隆和序列分析,最终获得全长cDNA序列.测序结果表明,在卵巢内表达量高于精巢的GD13基因全长为656bp,编码164氨基酸,经NCBI检索,此基因与文昌鱼、家鼠的核糖体蛋白L24及黄牛的核糖体蛋白L30氨基酸序列同源性分别高达58%、56%和56%,可断定该基因为编码日本对虾核糖体蛋白L24亚基的基因.为进一步认识对虾生长发育和繁殖的调控机制奠定基础.
- 张焦平张子平邹志华王艺磊
- 关键词：克隆家鼠核糖体蛋白
- 多重PCR技术分析日本对虾Marsupenaeus japonicus精巢和卵巢差异表达基因被引量：3
- 2004年
- 通过多重PCR方法 ,对采用SSH(抑制消减杂交 )技术制备日本对虾卵巢特异探针并筛选卵巢cDNA全长文库所获得的 8个阳性克隆进行分析 ,研究这些新克隆的基因在精巢和卵巢的差异表达情况。这 8个基因可分为二类 ,一类为卵巢特异表达的基因 。
- 王艺磊贾锡伟邹志华张子平
- 关键词：日本对虾卵巢抑制消减杂交基因克隆
- 日本对虾精巢和卵巢全长cDNA文库的构建被引量：34
- 2003年
- 采用RDP试剂提取日本对虾精巢和卵巢的总RNA ,经Oligotex试剂盒纯化得到mRNA。根据SMART(switchingmechanismat5′endofRNAtranscript)技术 ,利用含SfiⅠB酶切位点的oligo(dT)引物合成cDNA第一条链 ,利用含SfiⅠA酶切位点的SMART核苷酸作为cDNA第一条链在mRNA 5′端延伸出去的模板 ,采用LDPCR引物合成双链cDNA ,双链cDNA用SfiⅠ酶切和过柱分级分离后 ,与λTriplEx2两臂进行连接 ,随后进行λ噬菌体体外包装反应 ,构建成精巢和卵巢之全长cDNA文库。构建好的文库中 ,精巢的文库含有约 1 0 4× 1 0 6的重组子 ,卵巢的文库含有约为 1 2× 1 0 6的重组子。文库扩增后 ,滴度分别达7 3× 1 0 8(Pfu ml)和 9 1× 1 0 8(Pfu ml) ,插入cDNA长度为 4 0 0bp～ 3kb ,说明两文库均具有良好的质量 ,为进一步筛选、克隆精巢与卵巢特异表达基因奠定了基础。
- 王艺磊张子平
- 关键词：日本对虾卵巢全长CDNA文库性别决定性别分化SMART技术
