江苏省自然科学基金(H200945)
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
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- 人胰腺癌耐药细胞株Patu8988/5-Fu的建立及其耐药机制的初步探讨被引量：4
- 2011年
- 目的:建立人胰腺癌5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药细胞株Patu8988/5-Fu,观察其生物学特性并初步探讨其耐药机制。方法:采用5-Fu体外低浓度梯度递增联合大剂量冲击诱导法诱导培养人胰腺癌细胞株Patu8988,10个月建立获得性Patu8988/5-Fu多药耐药细胞株,光镜观察形态学变化;MTT法分析Patu8988/5-Fu耐药谱;绘制细胞生长曲线,计算倍增时间;流式细胞术分析亲子代细胞的细胞周期分布;RT-PCR检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及多药耐药基因(MDR1)的表达情况;罗丹明外排实验检测Patu8988/5-Fu细胞膜上的P-糖蛋白(P-gp)泵功能;Annexin V-FITC染色流式细胞术分析两种细胞株在受到5-Fu作用后的凋亡情况。结果:成功建立了人胰腺癌Patu8988/5-Fu多药耐药细胞株模型。与亲本细胞株Patu8988相比,Patu8988/5-Fu在形态学上发生了一系列变化;其对5-Fu、阿霉素(ADM)和吉西他滨(GEM)的耐药指数分别达到36.98(P<0.01)、2.76(P<0.05)和2.42(P<0.01);与亲本细胞株相比生长速度变慢,倍增时间延长(P<0.01);G0/G1期细胞分布比率略增多,而S期比率显著减少(P<0.01),G2/M期比率明显增加(P<0.05)。HIF-1α(P<0.01)、MDR1 mRNA(P<0.05)的表达亦明显高于亲本细胞株Patu8988。罗丹明在耐药细胞株内的积聚量低于亲本细胞株(P<0.01);在不同浓度梯度的5-Fu作用下Patu8988/5-Fu的凋亡率都较亲本细胞低(P<0.01)。结论:利用体外浓度梯度倍增法建立了稳定传代的人胰腺癌耐药细胞株Patu8988/5-Fu。HIF-1α介导的凋亡耐受和通过上调主要耐药基因MDR1的表达可能在不同程度上参与了Patu8988/5-Fu获得性耐药的产生。
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- 关键词：多药耐药5-氟尿嘧啶
- 氯化钴对人胰腺癌耐药细胞株Patu8988/5-FU的线粒体损伤及其耐药性的影响被引量：1
- 2012年
- 目的:氯化钴(CoCl2)作用于人胰腺癌耐药细胞株Patu8988/5-FU致其化学性缺氧,观察其线粒体损伤及耐药性的影响。方法:采用梯度浓度CoCl2(0、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、200.00、400.00μmol/L)培养人胰腺癌耐药细胞株Patu8988/5-FU,MTT法测定Patu8988/5-FU细胞增殖活性和耐药性;JC-1荧光染色流式细胞仪分析线粒体膜电位变化;RT-PCR检测HIF-1α及多药耐药基因MDR1的表达情况;罗丹明外排实验检测Patu8988/5-FU细胞膜上的P-gp泵功能。结果:随着CoCl2浓度升高或以100μmol/L作用时间延长,Patu8988/5-FU增殖活性下降,线粒体膜电位去极化增加。常氧和缺氧时其对5-氟脲嘧啶(5-Fu)的耐药指数分别达到28.11±3.19、52.08±3.53(P<0.01);HIF-1α和MDR1 mRNA的表达亦明显高于常氧对照组(P<0.05)。罗丹明在缺氧细胞株内的积聚量低于常氧对照组(P<0.01)。结论:利用CoCl2模拟Patu8988/5-FU化学性缺氧存在浓度和时间依赖性;缺氧使Patu8988/5-FU获得性耐药性增加可能是通过引起HIF-1α表达增加和上调多药耐药基因MDR1的表达引起的。
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- 关键词：胰腺癌多药耐药
- 米非司酮对胰腺癌细胞耐药株Patu8988/FU的逆转作用
- 2012年
- 目的:研究米非司酮(mifepristone,MIF)对胰腺癌多药耐药细胞株Patu8988/FU耐药性的逆转作用。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测MIF对胰腺癌细胞Patu8988及胰腺癌耐药细胞株Patu8988/FU增殖的影响,选择对两种细胞生长抑制率≤5%的浓度为其非细胞毒性剂量;观察非毒性剂量的MIF作用72 h后Patu8988/FU细胞对5-FU耐药性的逆转效果。结果:①MIF浓度≤10μmol.L-1对Patu8988及Patu8988/FU于细胞的增殖均无抑制作用(P>0.05);20μmol.L-1和40μmol.L-1MIF对Patu8988及Patu8988/FU于细胞的增殖均有抑制作用(P<0.05),MIF对Patu8988及Patu8988/FU细胞增殖具有剂量依赖性;②加入梯度浓度5-FU后Patu8988细胞和Patu8988/FU细胞的IC50分别为(2.394±0.011)μg.ml-1、(49.87±4.026)μg.ml-1(P<0.01),耐药倍数为20.83;Patu8988及Patu8988/FU细胞加入5-FU后分别与2.5μmol.L-1、5μmol.L-1、10μmol.L-1MIF共同孵育72h后,Patu8988/FU细胞对5-FU耐药性的逆转倍数分别为1.42、1.71、3.10;Patu8988/FU对5-FU的敏感性明显增加(P<0.05),而Patu8988细胞对5-FU的敏感性并未改变(P>0.05)。结果还显示MIF作用后Patu8988/FU对5-FU的敏感性变化具有剂量依赖性。结论:MIF对胰腺癌多药耐药细胞株Patu8988/FU耐药性的有逆转作用。
- 宋毕清时开网杨士勇
- 关键词：米非司酮胰腺癌耐药逆转
