广东省医学科学技术研究基金(B2013017)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 发文基金：国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
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- 人血管紧张素Ⅱ2型受体基因慢病毒表达载体的构建
- 2014年
- 目的构建携带人血管紧张素Ⅱ2型受体(angiotensinⅡtype 2 receptor,AGTR2)基因的慢病毒表达载体。方法运用基因重组技术,将AGTR2基因克隆至慢病毒载体pLVX-IRES-ZsGreen1中,获得慢病毒表达载体pLVX-AGTR2-IRES-ZsGreen1,XhoI、BamHI双酶切反应及测序分析加以鉴定。在Lipofectamine 2000的介导下将慢病毒表达载体质粒和包装质粒(pHelper1.0、pHelper2.0)共转染人胚肾细胞系(293T),包装慢病毒载体并测定滴度。反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测AGTR2基因在感染病毒的293T细胞中的表达水平。结果所获AGTR2基因测序证明与GenBank中序列一致;成功构建慢病毒表达载体pLVX-AGTR2-IRES-ZsGreen1并获得相应的慢病毒。收集、浓缩病毒后测定其滴度为1.2×108 TU/mL。构建的携带AGTR2基因的慢病毒表达载体可有效转染293T细胞,RT-PCR结果表明AGTR2基因呈高表达。结论成功构建AGTR2慢病毒表达载体,为进一步研究其功能建立了实验基础。
- 雷和平麦丽萍朱杰宁单志新杨敏林秋雄余细勇
- 关键词：慢病毒表达载体293T细胞
- 聚合酶链反应芯片筛选5-氟尿嘧啶对乳鼠心肌细胞心脏毒性差异表达基因的作用被引量：1
- 2014年
- 目的应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)芯片技术观察5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)对乳鼠心肌细胞心脏毒性相关基因表达的调控作用。方法利用差速贴壁法分离培养乳鼠心肌细胞,分为对照组和5-FU刺激组。提取并纯化细胞RNA,紫外分光光度计检测RNA提取物浓度、变性琼脂糖凝胶电泳检测其纯度及完整性。选择包含84个已知心脏毒性相关基因的PCR芯片,采用比较阈值(ΔΔCt)法分析两组基因的表达差异。以表达差异(即上调或下调)大于2倍的基因为有意义的差异基因。结果共有48条基因出现差异表达,其中5条基因表达上调,43条基因表达下调。结论利用PCR芯片技术筛选相关基因,为深入阐明5-FU心脏毒性的作用机制提供了新思路。
- 雷和平麦丽萍杨慧钟诗龙杨敏林秋雄单志新余细勇
- 关键词：5-氟尿嘧啶心脏毒性乳鼠心肌细胞
