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用蛋白质芯片-飞行时间质谱仪分析精液不液化患者精浆中相关蛋白质群被引量：2: 2007年; 目的用蛋白质组学方法筛选精液不液化患者及正常生育患者精浆中的差异蛋白。方法通过蛋白质芯片-飞行时间质谱仪,对6例精液不液化患者的精浆和11例正常生育男性精浆样本进行检测,比较两组间蛋白质图谱表达差异。结果正常组与不液化组精浆比较,有19个蛋白表达存在差异,其中有6个蛋白P<0.01。结论精液不液化患者与正常生育患者精浆中存在较多差异蛋白质,差异蛋白质群的结构、功能变化是导致精液液化异常的主要原因;本研究对进一步探索不液化的病因及其临床治疗具有重要意义。; 孙玲白洁陈士岭邱卓琳张为青杨杰邢福祺; 关键词：不液化精浆蛋白质芯片蛋白质组学

非梗阻性无精子症和健康生育男性精浆差异蛋白质的“shotgun”鉴定被引量：2: 2010年; 目的:利用"shotgun"蛋白质组学策略鉴定正常生育男性和非梗阻性无精子症男性精浆的差异蛋白质。方法:正常生育男性和非梗阻性无精子症男性各3例自愿捐献的精液标本,通过Percoll分离获取精浆,等量混合后在SDS-PAGE上进行分离,切胶取条带进行胶内酶解,抽提肽段后利用"shotgun"蛋白质组学策略鉴定蛋白质。然后,将两组鉴定到的惟一肽段数≥2和惟一肽段数=1,但肽段总数≥4的蛋白质对比分析。结果:正常生育男性和非梗阻性无精子症男性精浆中共得到213个差异蛋白质,其中133个蛋白质存在于非梗阻性无精子症者,80个蛋白质存在于正常生育者。这些差异蛋白质集中在信号转导、细胞骨架和酶催化活性类,其中酶催化活性类中尤以氧化还原酶类为多。通过进一步分析,有18个差异蛋白质尤其值得关注,这18个蛋白质中包括:胞质动力蛋白重链、脂肪酸合成酶、微管蛋白α6等。结论:本研究中鉴定到的二者的差异蛋白质数量多、功能分布广,不仅再次证明"shotgun"蛋白质组学策略是鉴定蛋白质的一个较好的方法,也提醒我们:非梗阻性无精子症的发生原因复杂,类型多样,选择标本必须从组织学和基因水平严格细化,方能得到蛋白质研究的可信结果。本研究选取的无精子症男性精浆标本从蛋白质水平上表明其病因与有丝分裂M期有关,具体机制尚不清楚。; 白洁傅淑宏蔡力力孙玲丛玉隆; 关键词：生育男性非梗阻性无精子症精浆差异蛋白质

严重少精子症患者与正常生育男性精浆蛋白质群比较分析被引量：3: 2008年; 目的:探讨严重少精子症和正常生育男性精浆蛋白质群的差异性。方法:11例正常健康已生育的自愿者(正常组)和6例严重少精子症男性精液标本通过Percoll分离获取精浆。采用SELDI-TOF-MS,经CM10芯片捕获蛋白质并用TOF-MS对蛋白质进行检测,获得各样本的蛋白质指纹图谱,经过归一化处理后进行组间比较。结果:严重少精子症组与正常组比较仅有2种低丰度蛋白质表达存在差异,与非梗阻性无精子症组比较差异蛋白质达15种。蛋白质荷比(m/z)分别为7196.058、7547.610、5780.493、7059.844、7409.589、5379.173、10778.810的7种蛋白质是严重少精子症、正常组与非梗阻性无精子症组的共同差异蛋白质,除后两者在非梗阻性无精子症中含量升高外,其余含量均降低。结论:严重少精子症的精浆蛋白质群与正常组差异较小,即两者的精浆蛋白质组成较为相似,但二者均与非梗阻性无精子症存在显著差异。提示严重少精子症和非梗阻性无精子症的发生机制不同,并非仅是遗传因素量的累加。; 白洁孙玲朱红张立文马俊龙丛玉隆; 关键词：严重少精子症精浆差异蛋白质 SELDI-TOF-MS

精浆蛋白质电泳两种分析方法的探讨被引量：2: 2006年; 目的:探讨琼脂糖电泳和SDS-琼脂糖电泳分析精浆蛋白质的临床可行性。方法:69例不育患者精液标本按常规和特殊检查结果分为弱畸精子症(n=19)、弱精子症(n=22)和相对正常(n=28)3组,然后离心分离获取精浆。分别采用琼脂糖和SDS-琼脂糖作介质,不同的点样时间、迁移功率,酸性结晶紫和氨基黑两种染色,对精浆蛋白质进行检测,将电泳图谱进行吸光度仪扫描并将结果对比分析。结果:以SDS-琼脂糖作介质,酸性结晶紫染色可将精浆分为4条带,但区带弥散,相互间拖尾严重;以琼脂糖作介质,pH 9.2碱性缓冲条件,点样6 m in,可将精浆分为A、B、C、D、E、F 6条带,氨基黑染色后,区带清晰,间隔适当,易于吸光度仪分析相对含量,重复性好。电泳结果经方差分析,弱精子症组与相对正常组、弱畸精子症组在C与E带上均有差别,而相对正常组与弱畸精子组无差别;同时,相对正常组标本之间的电泳图谱也有显著的不同。结论:以琼脂糖作介质,在碱性缓冲条件下电泳,氨基黑染色来分离检测精浆蛋白质具有较高的可行性,该方法操作简单、快速,可适合临床常规开展。; 白洁孙玲马俊龙丛玉隆; 关键词：精浆蛋白质男性不育

无精子症患者与生育男性精浆蛋白质群的比较分析被引量：10: 2007年; 目的:探讨无精子症患者精浆蛋白质群的改变。方法:11例正常健康自愿者和6例非梗阻性无精子症者精液标本,以99%和45%Percoll分离获取精浆。采用PBS IIC型蛋白质芯片-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS),经CM10芯片捕获蛋白质,并采用TOF-MS对蛋白质进行检测获得各样本的蛋白质指纹图谱,经过归一化处理后进行组间比较。结果:无精子症组与正常组比较有28种蛋白质表达存在差异,差异的蛋白质中有24种含量低于正常组,其中4个M/Z在7 196.058、7 630.573、7 547.610和7 709.833的蛋白质差异极显著(P<0.01)。结论:无精子症患者其精浆蛋白质群较生育男性有显著改变,改变的蛋白质主要是含量减少,这些蛋白质的减少可能与无精子症的发生有重要相关性。; 白洁孙玲陈士岭张立文马俊龙丛玉隆; 关键词：无精子症精浆差异蛋白质

利用shotgun蛋白组学策略鉴定健康生育男性精浆蛋白质被引量：3: 2009年; 目的:鉴定正常生育男性的精浆蛋白质。方法:3例正常健康已生育的自愿者精液标本通过Percoll分离获取精浆,等量混合后在SDS-PAGE上进行分离,切胶取条带进行胶内酶解,抽提肽段后利用shotgun蛋白组学策略鉴定蛋白质。结果:正常生育男性精浆鉴定出331种蛋白质,相对分子质量范围8000～572068,等电点范围4.36～11.05;这些蛋白质按功能和生物进程归类,大致有51个(15.4%)运输蛋白质,11个(3.32%)细胞运动蛋白,63个(19.03%)信号转导蛋白质,147个(44.4%)蛋白酶及38个(11.5%)酶调节蛋白质,21个(6.3%)细胞凋亡蛋白,12个(3.62%)结构和支撑蛋白质,59个(17.8%)分子功能未知蛋白质。结论:shotgun蛋白组学策略是鉴定蛋白质的一个较好的方法。膜联蛋白及相关蛋白、Ras相关蛋白Rab是鉴定到的信号转导蛋白中的主要成员,因此推测钙离子和G蛋白信号通路是精子胞外信号传递到胞内的最重要途径,但是这些蛋白间的相互作用还不清楚。另外,精浆中鉴定到了大量的酶类,可能与维持精子活力和代谢有密切关系。; 白洁傅淑宏蔡力力孙玲丛玉隆; 关键词：生育男性精浆蛋白质组学

人精浆中弱精子症相关蛋白质的“shotgun”鉴定被引量：4: 2010年; 目的:利用"shotgun(鸟枪)"蛋白质组学策略鉴定精浆中弱精子症相关的蛋白质。方法:正常健康已生育和弱精子症男性各3例自愿捐献的精液标本,通过Percoll分离获取精浆,等量混合后在SDS-PAGE上进行分离,切胶取条带进行胶内酶解,抽提肽段后利用"shotgun"蛋白组学策略鉴定蛋白质。然后,将两组鉴定到的唯一肽段数≥2和唯一肽段数=1但肽段总数≥4的蛋白质对比分析。结果:正常生育男性和弱精子症男性精浆中共得到172种差异蛋白质,全部是有和无的关系。其中89种蛋白质存在于弱精子症患者,而正常生育者没有鉴定到;83种蛋白质存在于正常可生育者,而弱精子症患者没有鉴定到。这些差异蛋白质集中在信号转导和酶催化活性类。结论:通过分析差异蛋白质的功能,有10种蛋白质尤其重要,可能与弱精子症相关,这10种蛋白质为:膜联蛋白VI同工型2、白介素6受体β亚单位同工型1前体、相对分子质量为400000的蛋白质、胞质动力蛋白重链、α-辅肌动蛋白4、受体型酪氨酸蛋白磷酸酶η前体、维生素D结合蛋白前体、蛋白S100-A11、蛋白S100-A9和膜联蛋白A4。; 白洁傅淑宏蔡力力孙玲丛玉隆; 关键词：生育男性弱精子症精浆差异蛋白质 SHOTGUN

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国家自然科学基金(30471829)

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