国家高技术研究发展计划(2001AA215031)
- 作品数：15 被引量：34H指数：4
- 相关作者：金宁一江文正张立树李子健冯霞更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心解放军军需大学吉林大学第一医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中国综合性艾滋病研究项目国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人免疫缺陷病毒早期蛋白Nef的表达、纯化及免疫原性研究
- 2008年
- 目的:通过原核细胞表达人免疫缺陷病毒(HIV)Nef抗原,制备特异抗血清,为Nef抗原检测提供技术方法。方法:以HIV Botswana毒株基因组为模板,用PCR法获得Nef蛋白编码基因,将其克隆到pET30a载体中,在大肠杆菌中表达Nef融合蛋白;用纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠获得抗血清,用真核表达的Nef抗原对其特异性进行分析。结果:构建的Nef融合基因在大肠杆菌中获得表达,相对分子质量约为36×103,免疫BALB/c小鼠获得针对融合蛋白的高效价抗血清,ELISA抗体滴度为1∶6400;免疫荧光和Western blot检测表明,该抗血清能特异地与重组痘苗病毒表达的Nef抗原反应。结论:在大肠杆菌中表达了HIV Nef融合蛋白,制备了Nef融合蛋白的高效价小鼠免疫血清,该血清能特异性识别HIV Nef抗原,为HIV Nef抗原检测提供了技术方法。
- 陆柔剑齐建国邓瑶王世峰王文玲辛伟李仁清阮力
- 关键词：人免疫缺陷病毒原核表达抗血清
- HIV-2gag-gp105嵌合基因DNA疫苗对小鼠的免疫原性研究
- 2004年
- 利用真核表达载体 pVAX1 构建 HIV-2 gag-gp105 嵌合基因的重组质粒 pVAX1gag-gp105,将其转入 BHK21细胞中,利用间接免疫荧光方法检测其表达情况。进一步分别将核酸疫苗质粒 pVAX1gag-gp105、对照组质粒pVAX1 和 PBS 溶液经肌肉注射免疫 BALB/c 小鼠,检测免疫小鼠脾 CD4+、CD8+T 细胞亚群的数量,脾特异性 CTL杀伤活性和血清抗体滴度。结果显示,重组核酸疫苗质粒 pVAX1gag-gp105 疫组小鼠脾 CD4+、CD8+T 细胞亚群的数值均比对照组高( P<0.01),脾特异性 CTL 杀伤活性与对照组相比差异极显著(P<0.01),血清抗体滴度显著高于对照组(P<0.01) 。以上结果表明,HIV-2 gag-gp105 嵌合基因 DNA 疫苗对 BALB/c 小鼠具有良好的体液和细胞免疫原性。
- 李子健金宁一张立树江文正张洪勇
- 关键词：HIV-2DNA疫苗
- 含密码子优化型HIV-1 gp120基因重组腺病毒的构建及其免疫效果研究被引量：4
- 2004年
- 目的 构建能表达野生型和密码子优化型人免疫缺陷病毒Ⅰ型 (HIV 1)B亚型中国流行株gp12 0基因的非复制型腺病毒。方法 按哺乳动物细胞偏好的密码子对HIV 1B亚型中国流行株Chgp4 2的gp12 0基因进行优化 ,合成优化基因。将野生型和密码子优化的gp12 0基因插入穿梭质粒 ,再与腺病毒骨架质粒pAdEasy 1共转化E coliBJ5 183,获得重组子 ,转染 2 93细胞后获得重组病毒。分别以两种重组腺病毒疫苗免疫小鼠 ,ELISA检测小鼠血清中的特异性抗体 ,乳酸脱氢酶法检测小鼠细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)反应。结果 获得两株重组腺病毒rAd wt gp12 0和rAd mod gp12 0 ,能正确表达Gp12 0。rAd mod gp12 0比rAd wt gp12 0蛋白表达水平明显提高。重组腺病毒免疫小鼠后能产生HIV 1特异性的抗体及CTL反应 ,rAd mod gp12 0组明显优于rAd wt gp12 0组。结论 成功构建了表达野生型和密码子优化的HIV 1gp12 0基因的重组腺病毒 ,能诱导HIV 1特异性体液和细胞免疫反应。
- 冯霞余双庆陈国敏左建民周玲曾毅
- 关键词：HIV-1GP120重组腺病毒免疫效果
- 含HIV-1 gp120基因的重组腺相关病毒和重组腺病毒疫苗联合免疫的研究被引量：3
- 2004年
- 目的 探讨含HIV 1gp12 0基因的重组腺相关病毒 (rAAV)和重组腺病毒 (rAdV)疫苗在BALB c小鼠中联合免疫的效果。方法 将密码子优化的HIV 1gp12 0基因分别插入腺相关病毒(AAV)和腺病毒 (AdV)载体质粒 ,构建含该基因的rAVV和rAdV载体疫苗。将两种疫苗以不同的联合方式免疫BALB c小鼠 ,ELISA检测小鼠血清中的gp12 0特异性抗体 ,细胞内细胞因子染色法检测小鼠的特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)应答。结果 两种重组病毒均可表达目的基因gp12 0 ;在小鼠体内两种重组病毒联合免疫可诱导特异性的CTL应答和血清IgG抗体反应 ,但用rAAV初免 2次 ,再用rAdV加强 3次所诱发的CTL和血清IgG反应最强。
- 冯霞余双庆陈国敏吴小兵左建民董温平周玲曾毅
- 关键词：GP120联合免疫HIV-1重组腺相关病毒载体疫苗抗体反应
- 非复制重组痘苗病毒表达人免疫缺陷病毒Bostwana C亚型Nef蛋白及免疫效果的观察被引量：2
- 2004年
- 从含人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV 1)BostwanaC亚型全基因的质粒pJM4 HIV中克隆了nef基因,并利用非复制型痘苗病毒载体构建表达Nef蛋白的重组病毒NTVJ1175nef,经PCR和Southernblot鉴定,nef基因正确整合到痘苗病毒基因组的J片段上;感染人源细胞后,经Westernblot和免疫荧光检测表明,重组病毒能很好地表达Nef蛋白,并定位于细胞质中。NTVJ1175nef免疫BALB/c小鼠后,经Pep IFN ′γ Assay法检测,可诱导产生针对表位肽P1特异的可分泌IFN ′γ的CD+8T细胞(占脾细胞总数0 20%);经乳酸脱氢酶(LDH)法检测证实,诱导的细胞毒性T细胞(CTL)可特异性地杀伤表位肽P1特异P815靶细胞。这些结果表明,NTVJ1175nef具有良好的细胞免疫原性,为下一步构建表达包含HIV早期抗原的多组分重组痘苗病毒候选疫苗奠定了免疫学基础。
- 辛伟郭斐陆柔剑王世峰邓瑶王文玲张相民李仁清吕亦晨阮力
- 关键词：人类免疫缺陷病毒HIV-1NEF蛋白细胞毒性T细胞
- HIV-1外膜蛋白与IFNα在重组鸡痘病毒中的共表达及特性分析被引量：1
- 2004年
- 江文正金宁一李子健张立树韩文瑜
- 关键词：IFNΑ重组鸡痘病毒共表达
- 酵母表达的HIV-1中国株CN54 Gag蛋白的免疫原性研究被引量：1
- 2004年
- 目的 评价毕赤酵母表达的HIV 1中国株CN5 4Gag蛋白在Balb c小鼠诱导体液和细胞免疫的能力。方法 利用重组Gag蛋白单独及与重组DNA或痘苗联合免疫Balb c小鼠 ,检测小鼠产生的特异性结合抗体和IgG1 IgG2a ,同时检测T淋巴细胞增殖反应和CTL反应。结果 3个蛋白单独免疫组均能诱导小鼠产生抗体和T淋巴细胞增殖反应 ,其中不加佐剂的免疫组诱导免疫反应低于其它两组。但 3组的CTL杀伤活性均不明显。重组蛋白和重组DNA及痘苗联合免疫均诱导产生了较好的体液和细胞免疫反应 ,而且重组痘苗初始免疫 蛋白加强免疫组还诱导产生了较强的CTL反应。结论 酵母表达的HIV 1Gag蛋白具有良好的免疫原性 ,在与重组DNA和痘苗疫苗联合使用时具有协同作用 ,能刺激动物产生更强的HIV 1特异性体液和细胞免疫反应。本研究为构建HIV 1蛋白疫苗和探讨各类疫苗的联合免疫方式提供了有价值的参考数据。
- 郝彦玲马民强李海山黄灿平周克民刘勇洪坤学邵一鸣
- 关键词：酵母HIV-1GAG免疫原性
- 表达HIV多价抗原的重组痘苗病毒的构建及免疫效果研究被引量：8
- 2003年
- 为了构建适用于中国的HIV候选疫苗,利用痘苗病毒天坛株表达中国HIV 1主要流行毒株CN54的gagpolΔ和gp140TM基因。实验结果显示,重组痘苗病毒能正确表达Gag和gp140TM蛋白。获得的重组痘苗病毒与DNA疫苗、重组腺病毒联合免疫Balb/c小鼠,并检测不同免疫程序在小鼠中诱导的细胞和体液免疫。免疫实验表明,DNA疫苗初始免疫,重组腺病毒与重组痘苗病毒依次加强所诱导的CTL应答、T淋巴细胞增殖以及中和抗体均高于其他免疫方案。DNA疫苗与两种活载体疫苗的联合运用,在小动物模型中取得了较好的免疫效果,这将为艾滋病疫苗的研究增加新的免疫策略。
- 刘颖吴岚陈建平周克明陆柔剑洪坤学阮力邵一鸣
- 关键词：HIV重组痘苗病毒免疫效果艾滋病
- 共表达HIV-1 gag-gp120与白细胞介素6重组鸡痘病毒的筛选被引量：1
- 2005年
- 目的构建共表达中国株HIV1gaggp120与白细胞介素6(IL6)的重组鸡痘病毒(FPV)。方法分别将HIV1gaggp120基因和IL6基因插入到FPV表达质粒pUTAL复合启动子和单一启动子下游,构建重组FPV表达质粒pUTAGEIL6。利用脂质体法将重组质粒和FPV282E4株共转染鸡胚成纤维细胞,经BUdR加压筛选,重组病毒分别用SDSPAGE和WesternBolt进行鉴定,观察病毒样粒子的形成和重组病毒在哺乳动物细胞中的表达,并分析其免疫原性。结果阳性重组病毒基因组点膜处有显色斑点,WesternBolt结果显示重组病毒表达了gaggp120嵌合蛋白和IL6,在病毒感染细胞中有反转录病毒样粒子形成,且重组病毒可在哺乳动物细胞中表达目的蛋白。小鼠免疫指标检测表明该重组病毒具有很好的免疫原性。结论成功构建了共表达中国株HIV1gaggp120与IL6的重组FPV,为HIV-1基因工程活载体疫苗和巨分子颗粒化疫苗的制备奠定了基础。
- 江文正金宁一李子健张立树邹啸环王铁东
- 关键词：HIV-1鸡痘病毒重组鸡痘病毒白细胞介素6GAG共表达
- HIV-1B亚型gp120基因密码子优化前后免疫原性的比较被引量：10
- 2004年
- 对HIV 1B亚型gp120基因按照哺乳动物优势密码子的使用原则进行优化,以Westernblot方法比较其体外表达量。将优化前的野生型gp120基因和改造后的modgp120基因插入重组腺伴随病毒载体,构建了重组病毒rAAV wtgp120和rAAV modgp120,比较两者免疫Balb/C小鼠后的抗体和CTL应答。Westernblot检测结果显示:优化后基因的体外表达量明显高于野生型基因,rAAV modgp120与rAAV wtgp120相比可更好地诱导Balb/C小鼠的CTL应答,但检测不到明显的抗体反应。由此得出结论,优化后gp120基因的体外表达量明显高于野生型基因,并且可以诱导更强的特异性CTL应答,但检测不到gp120抗体。
- 余双庆冯霞陈国敏龚非周玲曾毅
- 关键词：人免疫缺陷病毒I型GP120密码子免疫原性重组腺伴随病毒
