国家自然科学基金(30471625)
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
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- 汉滩病毒核蛋白HLA-A*02限制性CTL表位的预测及实验鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的:采用人工神经网络模型及在线软件BIMAS和SYFPEITHI共同预测汉滩病毒核蛋白HLA-A)02限制的CTL表位,并对CTL表位进行实验鉴定。方法:①选取2004-11解放军第四军医大学唐都医院住院的肾综合征出血热患者1例,汉滩病毒特异性IgM抗体为阳性。无菌抽取肾综合征出血热患者外周血,分离外周血单个核细胞,液氮冻存备用。②采用JavaNNS软件模拟神经系统对信息的处理过程,建立人工神经网络模型。训练人工神经网络的9肽包括584种HLA-A)02结合肽和130种HLA-A)02非结合肽,随机数字表法分为3部分:80%为训练肽(用来训练模型,使其学习其中隐含的规律),10%为确认肽(防止训练过度,使训练在适当的时候终止),10%为试验肽(对训练好的模型进行初步的评价)。无、低、中、高亲和力9肽训练人工神经网络的输出值分别为0.1,0.4,0.6,0.8。因此,人工神经网络模型的默认阈值为0.4。此外,还应用在线软件BIMAS和SYFPEITHI,共同预测汉滩病毒核蛋白的CTL表位。③采用ELISPOT鉴定汉滩病毒核蛋白特异的HLA-A)02限制的CTL表位。结果:①人工神经网络、BIMAS和SYFPEITHI预测的准确度:3种方法预测的灵敏度分别达到0.89,0.78,0.97,特异性分别为0.90,0.87,0.20。三者共同预测到23个汉滩病毒核蛋白特异的CTL表位。②HLA-A)02限制的CTL表位的实验鉴定:在可刺激肾综合征出血热患者外周血单个核细胞产生阳性反应的3条15肽中,预测到了4个HLA-A)02限制的CTL表位。经ELISPOT实验证实,其中的2种9肽可刺激HLA-A)02阳性的肾综合征出血热患者外周血单个核细胞分泌γ干扰素。结论:肾综合征出血热患者中存在着汉滩病毒特异的CTL应答。汉滩病毒核蛋白CTL表位的有效预测,大幅度减少了合成候选9肽的数量,降低了成本。为肾综合征出血热细胞免疫应答的研究以及多肽疫苗的设计,奠定了重要基础。
- 王美亮朱勇王九平金伯泉
- 关键词：肾综合征出血热
- EB病毒转化B淋巴母细胞在汉滩病毒CTL表位研究中的应用被引量：2
- 2009年
- 目的:建立EB病毒转化B淋巴母细胞系(B-LCL),作为抗原提呈细胞(APC)提呈抗原肽,刺激短期培养的特异性T细胞活化并分泌IFN-γ,从而应用于T细胞表位鉴定中。方法:用B95-8细胞培养上清中的EB病毒转化肾综合征出血热(HFRS)患者PBMC,建立HFRS患者的B-LCL,以自身B-LCL为APC,加载抗原肽后,刺激短期培养的G9L特异的HFRS患者CD8+T细胞系,应用ELISPOT测定CD8+T细胞受到抗原肽刺激后产生IFN-γ的能力。结果:加载过抗原肽G9L或V15R的B-LCL可刺激G9L特异的CD8+T细胞活化并产生IFN-γ,而与G9L无同源序列的I15P则不能刺激G9L特异的CD8+T细胞活化。结论:B-LCL可作为非专职APC有效地将抗原肽提呈给特异性T细胞。
- 王美亮张全华王九平李永明马樱金伯泉
- 关键词：B淋巴母细胞EB病毒转化抗原提呈细胞CTL表位
- 汉滩病毒核蛋白T细胞表位的鉴定及其特异性T细胞应答规律的初步探讨被引量：3
- 2005年
- 目的:鉴定引起肾综合征出血热(HFRS)的汉滩病毒核蛋白(HTNV-NP)的T细胞表位,并探讨其特异性T细胞应答的规律。方法:合成覆盖HTNV-NP全长序列的全套部份重叠15肽,用ELISPOT方法筛选能刺激HFRS患者外周血单个核细胞(PBMC)产生IFN-γ的15肽,并测定其特异性T细胞的频率。结果:47例HFRS患者中,有18例可对HTNV-NP产生特异性T细胞应答,并发现在病程的早期就已开始产生T细胞应答。从11例患者PBMC中,鉴定出了17种HTNV-NP特异的T细胞表位,其中14种T细胞表位为首次报道,T细胞表位主要位于NP一级结构的中部。结论:HFRS病程早期即可产生特异性T细胞应答,T细胞表位主要位于NP序列的中部,T细胞应答可能在汉滩病毒感染过程中起重要的免疫保护作用。
- 王美亮朱勇王九平刘京梅方亮金伯泉
- 关键词：肾综合征出血热汉滩病毒核蛋白T细胞表位
