广西壮族自治区科技攻关计划(0235001-4)
- 作品数：16 被引量：74H指数：6
- 相关作者：谢芝勋庞耀珊邓显文刘加波唐小飞更多>>
- 相关机构：广西兽医研究所广西大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 新城疫病毒广西分离株M基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2009年
- 根据基因库中新城疫病毒M基因核苷酸序列,设计一对特异性引物,对2000年-2003年期间广西分离的11个NDV毒株的M基因进行RT-PCR扩增、克隆和序列测定。结果表明,11个NDV广西分离株的M基因都为1223个核苷酸,含有1个1095bp核苷酸阅读框(ORF),编码364个氨基酸。序列分析结果表明,这11个NDV分离株核苷酸的同源性在86%～99.9%之间,推导氨基酸的同源性在89.3%～99.7%之间;11个毒株与国内外其他7个NDV毒株比较核苷酸的同源性在83.3%～98.5%之间,推导氨基酸的同源性在87.4%～98.6%之间。
- 唐小飞谢芝勋刘加波邓显文庞耀珊孙建华
- 关键词：新城疫病毒克隆
- 禽呼肠孤病毒σ2基因的克隆和表达
- 采用RT-PCR技术扩增禽呼肠孤病毒ARV S1133毒株和广西分离株R1的σ2基因,将σ2基因克隆至PGEX-4T-1载体上,测序结果表明插入的片段为σ2目的基因。切下目的基因σ2重组到含有谷胱甘肽(GST)的融合蛋白...
- 邓显文谢芝勋刘加波庞耀珊唐小飞
- 关键词：禽呼肠孤病毒PGEX-4T-1
- 文献传递
- 11株新城疫病毒广西分离株NP基因的克隆和序列分析被引量：5
- 2005年
- 根据基因库中新城疫病毒(NDV)的NP基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR技术对广西在2000～2003年暴发新城疫的鸡群中分离的11株NDV毒株NP基因进行RT-PCR扩增和序列测定,拼接出11个NDV广西分离株的NP基因的全序列,10个NDV广西分离株的NP基因阅读框的核苷酸序列全长均为1470 bp,编码489个氨基酸,它们的NP基因核苷酸全序列及推导的氨基酸全序列与10个已发表的NDV参考株的NP基因全序列比较分析结果表明:核苷酸序列同源性为84.8%～98.2%,氨基酸同源性为89.8%～99.4%.
- 孙建华谢芝勋刘加波唐小飞庞耀珊邓显文
- 关键词：新城疫病毒F蛋白基因克隆
- 真核表达质粒pTracer-CMV2FIL2在鸡体组织中表达及分布规律
- 2009年
- 将3周龄的三黄鸡肌肉接种200μg真核表达质粒pTraeer-CMV2FIL2，巢式PCR法检测血清、心、脾脏、肺脏、法氏囊、脑、骨髓、胸腺和肌肉接种部位中pTracer-CMV2FIL2出现和存留的时间；荧光定量PCR法检测其在血液中的动态变化；RT-巢式PCR法检测其在上述部位的表达情况。结果显示，接种后2-3h血清中可检测到pTracer-CMV2FIL2，6h时在血液中的含量最高，7d时已经检测不到；4h后在上述器官中可陆续检测到pTracer-cMV2FIL2的出现，13d后陆续消失；1d后可陆续检测到质粒所转录的mRNA，13d后陆续消失；接种后2h可在接种部位肌肉的细胞中检测到pTracer-CMV2FII。2的出现，10h可检测到mRNA，150d时仍然可以在肌肉接种部位的细胞中检测到质粒和mRNA存在。
- 董建宝谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢丽基
- 关键词：DNA疫苗
- 2000-2004年间广西新城疫病毒强毒株的分离与鉴定被引量：3
- 2005年
- 近年来从广西不同地区规模化鸡场的13个肉鸡群病死鸡中分离到13株有血凝性的病毒,这13株病毒的血凝性均能被新城疫标准阳性血清抑制,经过血凝(HA)试验、血凝抑制 (HI)试验和RT-PCR检测结果确定为新城疫病毒。13株病毒的生物学特性测定实验结果证明该13株病毒均为新城疫病毒强毒株。
- 刘加波谢芝勋唐小飞庞耀珊邓显文
- 关键词：新城疫病毒强毒株
- 三株新城疫广西分离株全基因组序列的测定与分析被引量：6
- 2006年
- 根据GenBank上所公布的新城疫病毒（NDV）的全基因组序列，设计了8对引物，运用RT-PCR方法获取了3株广西地方强毒株GX7／02、GX9／03和GX11／03的全基因组序列，并对其进行了比较分析。此3株病毒的全基因组序列均由15192个碱基组成，与GenBank公布的ZJ1、U．S／Largo／71、Italy／2736／00等7个毒株的全基因组序列长度相同，比LaSota、Clone-30和B1的全基因组序列多出6个核苷酸，此6个核苷酸位于np基因的非编码区内，相对与NDV毒株LaSota、Clone-30和B1序列的1647～1648nt位。通过序列的比较分析，发现GX7／02、GX9／03和GX11／03与ZJ1毒株的同源性较高，而与LaSota、Clone-30和B1等毒株的同源性较低。
- 谢芝勋唐小飞董建宝刘加波庞耀珊邓显文谢志勤
- 关键词：全基因组
- 3株新城疫病毒广西分离株L基因的克隆与序列分析被引量：3
- 2006年
- 根据GenBank登陆的新城疫病毒L基因序列，设计了3对引物（L1和L2、13和14、L5和L6）。用RT．PCR技术对3株新城疫病毒广西分离GX7／02、GX9／03、GX11／03的L基因进行了分段扩增和克隆，并对克隆出来的3个片段进行序列测定，用DNAstar软件比较分析后进行拼接，得到长约为6．8kb、包含有L基因全长的核苷酸序列。L基因的RNA全长为6704bp，拥有一个6615bp的开放阅读框，推导其编码的氨基酸数为2204个。氨基酸同源性分析表明广西分离株之间同源性为98．6％～98．7％；与ZJ1株同源性为98．8％～98．9％；与La-Sota、B1、F48E9、HB92同源性为92．0％～94．2％。
- 唐小飞谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢志勤
- 关键词：新城疫病毒克隆
- 多重RT-PCR快速检测鉴别H7亚型禽流感病毒方法的建立被引量：11
- 2005年
- 目的参考AIVM基因和HA基因序列,设计了两对引物。其中XZ145-2和XZ146为通用引物,可以检测所有亚型AIV,跨幅244bp;XZH7-1和XZH7-2为H7亚型特异性引物,跨幅634bp。利用这两对引物,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,成功建立了快速检测鉴别H7亚型AIV的多重RT-PCR技术。特异性和敏感性试验结果表明,该技术对H7亚型AIV同时扩增出两条大小分别为244bp和634bp的cDNA片段,对其他亚型AIV只扩增出244bp的cDNA片段,对其他常见禽病病原无特异性扩增,结果为阴性;该多重RT-PCR对AIVRNA的最低检出量为1pg,对H7亚型AIVRNA的最低检出量为10pg。
- 庞耀珊谢芝勋邓显文唐小飞刘加波
- 关键词：反转录聚合酶链反应禽流感病毒H7亚型
- 禽呼肠孤病毒σNS非结构蛋白基因的克隆和表达被引量：8
- 2005年
- 采用RT-PCR技术扩增了禽呼肠孤病毒(ARV)S1133株与广西分离株R2 σNS非结构蛋白基因,将σNS基因克隆到质粒表达载体pGEX-4T-1上,获得的重组质粒经PCR、酶切鉴定以及测序分析,σNS基因的插入位置、大小和阅读框均正确,将阳性克隆命名为pGEX-S1133-σNS和pGEX-R2-σNS.构建好的重组质粒经37 ℃ 1 mmol/L IPTG诱导、SDS-PAGE分析超声裂解后的上清和沉淀,显示目的蛋白以包涵体方式表达,其蛋白质分子质量约为66.2 ku,约占菌体总量的31.5%～34.8%.Western-blotting分析表明,目的蛋白能够与ARV阳性血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有较好的抗原性.
- 谢丽基谢芝勋
- 关键词：禽呼肠孤病毒克隆表达
- 禽呼肠孤病毒σNS基因的克隆及其功能分析被引量：5
- 2007年
- 采用RT-PCR技术对8株禽呼肠孤病毒(ARV)σNS基因进行了扩增,将获得的PCR产物分别与pMD18-T载体连接。测序结果表明,所构建的克隆质粒中均含有相应的σNS蛋白基因,大小为1 107bp。经DNAStar软件分析,除R1株外,其他ARV毒株的σNS基因核苷酸及其推导氨基酸序列与标准毒株S1133和1733株的同源性很高。Antheprot 5.0蛋白分析软件的分析结果表明,σNS蛋白无跨膜区,拥有较多的疏水区和抗原位点,可作为诊断候选蛋白。
- 谢丽基谢芝勋秦春香
- 关键词：禽呼肠孤病毒克隆
