广西壮族自治区自然科学基金(2011GXNSFA018088)
- 作品数：6 被引量：37H指数：4
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- 相关机构：广西大学广西兽医研究所更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 禽流感病毒RT-LAMP检测技术的建立被引量：10
- 2012年
- 根据GenBank中禽流感病毒(AIV)M基因序列,设计针对所有亚型AIV的通用检测引物,并对反应条件进行优化,建立了检测AIV的逆转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)可视化检测方法。结果表明,建立的检测方法对禽流感病毒总RNA最小检出限为10fg,灵敏度为RT-PCR的1 000倍,能特异地检测出所有不同的HA亚型禽流感病毒,对其他禽呼吸道病原体无扩增反应;本方法快速,在常规水浴锅或金属恒温槽中50min就可完成,反应结束后不需开盖即可直接用肉眼根据反应液的颜色变化对结果进行判定。本研究建立的禽流感病毒RT-LAMP可视化检测方法具有操作简便、仪器设备要求简单、灵敏、快速、特异等优点,适合在基层进行AIV的快速早期筛检。
- 彭宜谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢志勤谢丽基范晴罗思思
- 关键词：禽流感病毒
- 巢式PCR检测H1亚型禽流感病毒方法的建立被引量：5
- 2013年
- 为建立快速、准确检测H1亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的方法,本研究针对H1亚型AIV血凝素(HA)基因保守区设计合成了2对特异性引物并优化反应条件进行巢式PCR反应。特异性和敏感性试验结果表明,该PCR方法能特异性检测到H1亚型AIV,其敏感性最低能检测到13.2 fg/μL的H1亚型AIV RNA模板。本研究建立的巢式PCR方法为H1亚型AIV的早期诊断及有效防制提供了快速、特异且敏感的检测方法。
- 郭捷谢芝勋罗思思刘加波邓显文谢志勤庞耀珊范晴
- H1亚型禽流感病毒的分离鉴定被引量：4
- 2013年
- 为了解广西H1亚型禽流感病毒(AIV)的分布情况及其致病性的特点,针对2011年至2012年广西自治区内活禽采集棉拭子样品进行H1亚型AIV的分离与初步鉴定,共分离纯化到6株H1亚型AIV。通过血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HI)发现分离株只与H1亚型AIV的血清反应,RT-PCR鉴定其在422bp处出现目的条带,进一步确定其为H1亚型AIV。再根据鉴定后的毒株对鸡胚半数感染量(EID50)、鸡胚半数致死量(ELD50)的测定与致病性试验,发现6株分离株均不会致SPF鸡死亡,确定所分离的H1亚型AIV为低致病性禽流感病毒。
- 郭捷谢芝勋刘加波罗思思庞耀珊邓显文谢志勤谢丽基范晴
- 利用RT-LAMP可视化检测技术检测H1亚型禽流感病毒及N1、N2亚型的分型被引量：18
- 2013年
- 为直接根据颜色变化进行可视化检测H1亚型、N1亚型、N2亚型禽流感病毒(AIV),根据环介导等温扩增技术(LAMP),建立针对H1亚型AIV及特异性鉴定N1、N2亚型的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。根据GenBank中的AIV基因序列,设计了三套分别针对H1亚型AIV-HA基因及N1、N2亚型AIV-NA基因的特异性简并引物,并优化反应条件和体系。结果表明建立的检测方法对其它亚型AIV及禽呼吸道病原体无交叉扩增反应并能特异性地检测N1、N2亚型AIV,灵敏度优于传统的RT-PCR方法。整个反应在常规水浴中50min就可完成,反应结束后不需打开反应管盖,可根据反应液的颜色变化对结果直接进行判定。120份临床样品用建立的RT-LAMP方法检测到14份H1N1亚型AIV、8份H1N2亚型AIV,结果与病毒分离结果相符。本研究建立的三种RT-LAMP可视化检测技术特异、灵敏、快速、操作和结果判定简便,适合在基层进行H1亚型AIV的快速检测及N1、N2亚型AIV的分型。
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- 关键词：H1N1
- 禽流感病毒H1、H3亚型和M基因三重PCR检测方法的建立被引量：1
- 2013年
- 【目的】建立用于检测禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)且能同时区分H1和H3亚型AIV的方法,为有效防控禽流感(Avianinfluenza,AI)奠定基础。【方法】根据H1亚型、H3亚型AIV-HA基因和M基因的保守核苷酸序列,分别设计3对特异性引物,以含有H1亚型AIV和H3亚型AIV的cDNA为模板,对三重PCR扩增条件进行优化,验证其特异性和敏感性,并对临床样品进行AIV检测。【结果】H1和H3亚型AIV混合模板经三重PCR扩增可获得3条特异性条带,其中302bp为H1亚型HA基因、453bp为M基因、626bp为H3亚型HA基因;含有H1或H3亚型AIV的模板均出现两条特异性条带,大小分别为302和453bp、453和626bp;含有其他亚型AIV的模板仅出现一条特异性条带(453bp);而其他禽呼吸道疾病病毒均未扩增出任何条带。优化后的三重PCR最低能同时检测出7.00pg的H1亚型AIV、3.62pg的M基因和20.60pg的H3亚型AIV;对100个临床样品进行AIV检测,AIV总阳性率为36%,其中H1亚型阳性率4%、H3亚型阳性率9%、其他亚型阳性率23%。【结论】禽流感病毒H1、H3亚型和M基因三重PCR检测方法具有快速、敏感、特异等特点,适用于AIV的检测及H1和H3亚型AIV的分型检测。
- 郭捷谢芝勋罗思思刘加波谢丽基庞耀珊范晴邓显文谢志勤
- 关键词：禽流感病毒H3亚型M基因三重PCR
- H1亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：4
- 2013年
- 本研究旨在建立一种检测H1亚型禽流感病毒(AIV)的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。根据对GenBank中H1亚型AIV HA基因序列的分析,设计针对H1亚型AIV的HA基因特异性引物,并以H1亚型AIV的cDNA为模版,构建重组阳性质粒。采用梯度稀释重组标准品阳性质粒DNA的方法,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(real-time PCR)标准曲线。敏感性试验结果显示,扩增效率和标准误差分别为100.9%和0.011 7,熔解曲线呈单一熔解峰。在35个Ct值内该方法可检测到100个拷贝的标准品DNA;特异性试验结果显示,该方法对于其他亚型AIV和禽呼吸道病原体不能检出;重复性试验结果显示,组内变异系数小于1%。建立的Real-time PCR具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于临床上H1亚型AIV的检测。
- 郭捷谢芝勋罗思思刘加波邓显文谢志勤庞耀珊范晴
- 关键词：SYBR实时荧光定量PCR
