湖北省卫生厅科研基金(NX200510)
- 作品数：12 被引量：45H指数：4
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CD2相关蛋白在肾脏细胞中的分布及其在足细胞中的作用被引量：4
- 2008年
- 目的观察CD2相关蛋白(CD2AP)在肾脏不同细胞系中的表达分布,及其与足细胞裂孔隔膜分子nephrin和细胞骨架蛋白F-actin之间的联系。方法以DMEM培养基培养人肾小球系膜细胞(HMC)和人肾小管上皮细胞系(HK-2),RPMI 1640培养基培养条件永生化小鼠足细胞系。以RT-PCR及Western blotting方法检测足细胞内CD2AP和nephrin的表达。间接免疫荧光结合激光共焦方法观察CD2AP在HMC、HK-2、未分化及已分化足细胞中的表达情况,及CD2AP与nephrin在足细胞中的共存。直接免疫荧光结合激光共焦方法观察F-actin在足细胞的表达及其与CD2AP的共存。结果CD2AP均匀分布于HK-2及未分化足细胞的核周及胞浆,而不表达于HMC细胞。在足细胞分化过程中,CD2AP的分布发生了变化,出现向周边聚集的现象。CD2AP与足细胞裂孔隔膜分子nephrin及细胞骨架蛋白F-actin在足细胞中存在共定位关系。结论CD2AP表达于上皮来源的肾脏固有细胞。CD2AP在足细胞中的分布特点,提示CD2AP可能参与足细胞的分化过程,并与裂孔隔膜分子功能及细胞骨架调节有关。
- 姜华军张春朱忠华刘建社邓安国
- 关键词：CD2相关蛋白足细胞肾小管上皮细胞系膜细胞激光共焦显微镜
- 活性氧介导醛固酮诱导的足细胞凋亡被引量：2
- 2010年
- 目的 观察醛固酮（ALD）及其受体拮抗剂螺内酯（SPI）对足细胞活性氧（ROS）产生及凋亡的影响,并探讨其可能机制.方法 体外培养条件的永生化小鼠足细胞系,分为空白对照组、ALD组、SPI组、ALD＋SPI组;用荧光分光光度计检测足细胞内ROS水平;间接免疫荧光检测nephrin表达;流式细胞仪检测足细胞凋亡率;RT-PCR、Western印迹法检测bax、bcl-2 mRNA及蛋白表达.同时观察抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）对上述效应的阻断作用.结果 与对照组相比,ALD诱导足细胞ROS产生增多（P＜0.05）,该作用可被SPI阻断（P＜0.05）.ALD可诱导足细胞nephrin表达降低及足细胞凋亡（P＜0.05）,同时伴有bax mRNA、蛋白表达升高及bcl-2 mRNA、蛋白表达降低（P＜0.05）,SPI及NAC可阻断这一变化（P＜0.05）.结论 ALD通过ROS途径作用于盐皮质激素受体上调促凋亡因子bax表达,下调抑凋亡因子bcl-2表达,进而诱导足细胞凋亡.
- 方展何方方孙希锋陈珊朱忠华邓安国刘建社张春
- 关键词：足细胞醛固酮活性氧细胞凋亡
- 足细胞损伤机制研究进展被引量：4
- 2008年
- 王惠何方方张春
- 关键词：足细胞损伤肾小球脏层上皮细胞毛细血管内皮细胞肾小球基底膜肾小球滤过膜蛋白质丢失
- CD2相关蛋白在肾脏固有细胞中的表达及分布被引量：5
- 2007年
- CD2相关蛋白（CD2AP）是与蛋白尿发生密切相关的足细胞分子。近年研究表明，CD2AP不仅是足细胞足突间裂孔隔膜的重要成分，而且还参与细胞骨架的重构，可能参与细胞许多重要的生理功能。本研究通过观察CD2AP在。肾脏固有细胞中的分布及其在足细胞分化中的分布变化，初步探讨其在足细胞中的生理功能。
- 姜华军张春朱忠华刘建社邓安国
- 关键词：CD2AP固有细胞相关蛋白足细胞分子裂孔隔膜细胞骨架
- 醛固酮通过转化生长因子β1途径调节足细胞基质金属蛋白酶2和9表达被引量：3
- 2009年
- 目的观察醛固酮（ALD）刺激对足细胞培养上清液中基质金属蛋白酶2、9（MMP-2、MMP-9）活性、Ⅳ型胶原的影响及探讨ALD对足细胞细胞外基质分泌、降解的调节机制。方法分别用不同浓度ALD（10^-11、10^-9、10^-7mol／L）以不同时间（24、48、72h）作用足细胞，并设立空白对照组。用明胶酶谱、Western印迹、ELISA方法检测培养上清液中MMP-2、MMP-9、Ⅳ型胶原仅5链及TGF-β1；流式细胞仪检测足细胞黏附率，同时观察ALD受体拈抗剂螺内酯（SPI）及TGF-β1受体抑制剂对上述效应的阻断作用。结果与对照组相比，ALD以时问及剂量依赖性导致培养上清液中MMP-2、MMP-9活性升高（P〈0．05）；Ⅳ型胶原仪5链蛋白表达下降（P〈0．05）；TGF-β1蛋白表达升高（P〈0．05）。SPI可完全阻断，而TGF-β1受体抑制剂SB314542可部分阻断ALD刺激足细胞引起的MMP-2、MMP-9活性升高、Ⅳ型胶原α5链蛋白及足细胞黏附率的下降（P〈0．05）。结论ALD通过TGF-β1途径使足细胞MMP-2、MMP-9活性升高，Ⅳ型胶原d5链蛋白表达下降，足细胞黏附率下降，从而使足细胞分泌基底膜成分异常，基底膜合成及降解失衡，导致足细胞损伤。
- 方展孙希锋何方方朱忠华张春
- 关键词：足细胞醛固酮基质金属蛋白酶类肾小球基底膜
- 未分化和分化足细胞生物学性状及相关结构蛋白表达的变化被引量：4
- 2008年
- 体外33℃许可条件下培养由H-2Kb-tsA58转基因小鼠所建立的未分化足细胞系,并在37℃非许可条件下诱导其分化。观察足细胞分化后形态学改变;MTT法测定细胞的生长曲线;红色荧光染料PKH-26标记足细胞,追踪其在子代细胞中的分布,检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期的改变;Western印迹检测足细胞相关蛋白CD2AP、α-actinin和足细胞分化相关蛋白nephrin的表达;免疫荧光结合激光共聚焦方法检测CD2AP、nephrin、α-actinin、F-肌动蛋白和微管蛋白的表达变化。结果显示:与未分化足细胞相比,分化足细胞形态发生改变,生长速度减慢,增殖能力下降;细胞周期表现为G0/G1期细胞比例的增多和S期及G2/M期的细胞比例下降;CD2AP、nephrin和α-actinin的表达明显增高;CD2AP、nephrin、α-actinin、F-肌动蛋白和微管蛋白在表达分布上均发生明显的改变。以上结果表明,足细胞分化后生物学性状明显发生改变,细胞骨架重新分布;CD2AP、nephrin、α-actinin、F-肌动蛋白和微管蛋白均在足细胞的分化过程中发挥重要作用。
- 姜华军张春常莹朱忠华刘建社邓安国
- 关键词：足细胞分化细胞骨架CD2相关蛋白
- CD2AP在足细胞中的生理功能研究被引量：3
- 2008年
- CD2相关蛋白(CD2 associated protein,CD2AP)是新近发现的足细胞裂孔隔膜(slit diaphragm,SD)分子。近年来的研究发现,CD2AP在足细胞内与多种结构蛋白相互作用,参与了足细胞多种重要的生理过程,并在蛋白尿的发生、发展中发挥着重要作用。文章综述了CD2AP的分子结构及其在肾脏足细胞中的表达分布,深入探讨CD2AP的生理功能及作用机制。
- 姜华军张春朱忠华
- 关键词：CD2AP足细胞裂孔隔膜
- TRPC6高表达对小鼠足细胞裂孔隔膜分子和细胞骨架的影响被引量：4
- 2009年
- 瞬时受体电位阳离子通道蛋白6（TRPC6）是新近发现的联系足细胞裂孔隔膜与细胞骨架的重要分子，TRPC6功能异常在遗传性及获得性蛋白尿性肾小球疾病蛋白尿的发生、发展中起重要作用。本研究观察了TRPC6高表达对体外培养的小鼠足细胞nephrin、α-actinin-4、α-tubulin分布及表达的影响，以期进一步揭示TRPC6高表达的致病机制。
- 孙希锋张春方展朱忠华杨晓姜华军何方方
- 关键词：细胞骨架裂孔隔膜足细胞膜分子小鼠Α-TUBULIN
- TRPC6高表达对血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠足细胞凋亡的影响
- 2008年
- 目的观察瞬间受体电位阳离子通道蛋白6（TRPC6）高表达对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的小鼠足细胞凋亡的影响并探讨其作用机制。方法用脂质体将针对小鼠TRPC6的基因真核表达载体pEGFP—N1-mTRPC6转染体外培养的永生化小鼠足细胞系。24h后用荧光显微镜观察增强绿色荧光蛋白（EGFP）的表达。Western印迹法检测转染后TRPC6蛋白表达的变化。将足细胞分组，应用不同浓度AngⅡ处理足细胞，Fluo-3AM结合激光共聚焦显微镜检测各组足细胞胞质内钙离子的浓度。RT—PCR及Western印迹法检测Bax、Bcl-2mRNA及蛋白的水平。流式细胞仪及Hoechst染色法检测足细胞凋亡。结果pEGFP—N1-mTRPC6转染足细胞后，约35％细胞出现绿色荧光；足细胞TRPC6蛋白表达明显上调（P〈0．01）。TRPC6高表达可以明显促进AngⅡ诱导的足细胞钙离子内流（P〈0．01），在蛋白及基因水平均上调Bax的表达而下调Bcl-2的表达（P〈0．01，P〈0．05）。在低剂量AngⅡ（10^-10mol／L）作用下，足细胞凋亡率为（2．50±0．72）％，转染TRPC6以后凋亡率为（4．33±0．45）％，差异有统计学意义（P〈0．05）。在高剂量AngⅡ（10^-6
mol／L）作用下，足细胞凋亡率为（15．46±1．40）％，转染TRPC6以后凋亡率为（18．33±0.87）％，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论TRPC6在AngⅡ诱导的足细胞凋亡中发挥重要作用。TRPC6可能通过增加钙离子内流，进而启动其下游的凋亡调节成分参与凋亡过程。
- 孙希锋张春史秀岩方展朱忠华杨晓姜华军
- 关键词：足细胞
- 蛋白尿发病机理研究进展被引量：11
- 2007年
- 何方方张春
- 关键词：肾小球性蛋白尿发病机理肾小球滤过屏障肾功能进行性减退肾小管重吸收肾小球内皮细胞
