国家自然科学基金(30371232)
- 作品数：7 被引量：16H指数：3
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- 相关机构：军事医学科学院第二军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- DNA-PKcs失活对c-Myc蛋白表达的影响被引量：1
- 2005年
- 目的:通过DNA-PKcs表达抑制的细胞模型,研究DNA-PKcs与癌基因c-myc表达调控的关系。方法:利用siRNA技术或抑制剂建立DNA-PKcs表达抑制细胞模型,Western印迹检测DNA-PKcs和c-Myc蛋白表达变化,Northern印迹检测癌基因c-myc的mRNA表达,SEAP检测系统检测c-myc转录活性变化。结果:稳定表达DNA-PKcssiRNA的细胞DNA-PKcs蛋白和c-Myc蛋白表达明显降低,同时c-myc转录活性也被抑制,但c-myc在mRNA水平无明显变化。渥曼青霉素(wortmannin,0.2μmol/L)同样也可抑制c-Myc蛋白表达和转录活性,而对c-myc的mRNA表达无影响。结论:DNA-PKcs参与c-myc基因的表达调控,DNA-PKcs是一个潜在的肿瘤治疗靶分子。
- 安静徐勤枝隋建丽白贝臧远胜周平坤
- 关键词：DNA-PKCS渥曼青霉素转录活性
- SCF泛素化途径对c-Myc蛋白降解的调节作用被引量：3
- 2005年
- 泛素-蛋白酶体途径(ub iqu itin-proteasom e pathway,UPP)是细胞内降解蛋白质的重要途径,与细胞多种生理功能调节密切相关。本文主要论述了SCF(Skp-cu llin-F-box prote in)泛素化途径及对原癌基因c-myc产物的降解调控作用。
- 安静周平坤
- 关键词：泛素-蛋白酶体途径蛋白降解SCF
- SiRNA抑制DNA-PKcs表达细胞模型的建立及其表型变化
- DNA-PKcs是属于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)家族成员的蛋白激酶,与Ku70和Ku80共同构成DNA依赖蛋白激酶(DNAK)复合物,具有DNA修复、维护端粒稳定性、V(D)J重组等功能。我们在α粒子辐射诱发的癌变...
- 安静隋建丽周平坤
- 文献传递
- siRNA抑制DNA-PKcs表达及对HeLa细胞增殖的影响被引量：4
- 2005年
- 背景与目的:建立抑制DNA_PKcs表达的细胞模型,以此探讨DNA_PKcs的功能。材料与方法:构建DNA_PKcs的siRNA抑制表达载体,利用Lipofectamine介导,转染HeLa细胞,筛选稳定表达的转化克隆。Westernblot检测DNA_PKcs表达。通过细胞生长速度检测细胞辐射敏感性变化。结果:设计了作用于DNA_PKcs不同位点的3条siRNA,并构建表达质粒,转染HeLa细胞,获得了3个稳定转化克隆,Westernblot分析表明其DNA_PKcs表达受到明显抑制,细胞对γ射线和紫外线的敏感性增加,接种裸鼠后的肿瘤生长速度减慢。结论:成功建立了DNA_PKcs表达抑制细胞模型,并且发现DNA_PKcs表达抑制后除影响细胞的辐射敏感性外,还可能与肿瘤细胞增殖有关。
- 安静隋建丽徐勤枝周平坤
- 关键词：DNA-PKCSRNA干扰技术细胞增殖
- DNA-PKcs对c-myc蛋白稳定性的调控作用
- 2005年
- 安静徐勤枝隋建丽白贝周平坤
- 关键词：DNA-PKCSC-MYCWORTMANNIN转录活性
- 低剂量与大剂量γ射线辐照人淋巴母细胞的独特和交迭基因转录谱的比较研究(英文)
- 毒性物质如电离辐射诱发生物学效应的表型变化和严重程度与暴露剂量与时间密切相关,早期诱导基因表达变化是哺乳动物细胞对电离辐射损伤的基本反应,其在多样性细胞辐射反应中发挥重要作用。为了研究比较低到大剂量γ射线照射细胞诱导基因...
- 周平坤丁库克贺性鹏龙贤辉王豫徐勤芝陈英
- 关键词：DNA损伤细胞周期检测点低剂量辐射
- 文献传递
- DNA依赖蛋白激酶催化亚基与细胞周期蛋白T2相互结合的鉴定被引量：2
- 2005年
- 目的鉴定与DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNAPKcs)相互结合的蛋白,以深入探讨其生理功能。方法通过免疫共沉淀获得DNAPKcs的相互结合蛋白复合物,SDSPAGE电泳分离蛋白,肽质指纹分析和Western印迹鉴定蛋白。结果以DNAPKcs抗体进行免疫共沉淀从HeLa细胞中获得DNAPKcs的相互结合蛋白,对部分结合蛋白进行质谱分析和蛋白数据库检索,发现转录延伸因子PTEFb的亚基细胞周期蛋白(cyclin)T2是其中之一。其后,通过Western印迹检测,进一步证实DNAPKcs与cyclinT2相互结合作用。结论首次发现DNAPKcs与cyclinT2的相互结合,提示DNAPKcs参与基因转录调控或转录偶联修复反应的生物学功能。
- 孙敬芬隋建丽周平坤吴德昌
- 关键词：免疫共沉淀DNA修复基因转录
- 三氟拉嗪诱发细胞凋亡及对DNA依赖蛋白激酶催化亚单位表达和P38磷酸化的抑制作用被引量：3
- 2005年
- 目的 探讨三氟拉嗪(TFP)对肿瘤细胞生长的抑制作用和分子机制,寻找抑制肿瘤生长的作用靶分子。方法 用不同剂量TFP作用于人宫颈癌上皮细胞(HeLa) ,体外细胞计数绘制生长曲线;荧光染料染色及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;γ射线及TFP处理细胞观察TFP对细胞辐射敏感性的影响;Western印迹分析蛋白表达或磷酸化。结果TFP作用后HeLa细胞的生长受到抑制,对γ射线的敏感性增加,且随着剂量的增加细胞凋亡的比率也增加。TFP还可有效诱导DNA修复蛋白DNA依赖蛋白激酶催化亚单位(DNA-PKcs)被切割,且可抑制辐射诱发的P3 8的磷酸化。结论 TFP可抑制肿瘤细胞的生长,对DNA-PKcs的表达和P3
- 安静隋建丽徐勤枝周平坤
- 关键词：磷脂酰肌醇3-激酶三氟拉嗪凋亡辐射耐受性
- 沉默DNA-PKcs对细胞信号转导相关基因转录的影响被引量：3
- 2005年
- 利用RNA干扰技术构建DNA-PKcs表达抑制细胞模型,探讨DNA-PKcs对HeLa细胞信号转导相关基因表达的调控作用.通过观察细胞对辐射及顺铂的敏感性,鉴定细胞表型变化.用寡核苷酸芯片检测细胞信号转导相关基因的转录谱,并用RT-PCR方法和SEAP检测系统进一步验证基因的表达变化.所筛选出的DNA-PKcs表达抑制细胞对辐射及顺铂的敏感性升高,15个与细胞信号转导相关的基因表达升高,其中7个是与干扰素信号转导反应相关的基因.8个表达下降,包括有细胞增殖分化相关基因,如NFAT.RT-PCR检测结果与芯片结果相一致,利用SEAT报告系统检测,进一步证实NFAT转录活性下调.实验结果表明,DNA-PKcs除了参与DNA修复外,还调控细胞信号转导相关基因的表达,而且大多与细胞增殖分化相关.
- 安静徐勤枝隋建丽白贝周平坤
- 关键词：RNA干扰基因芯片细胞信号转导转录活性
