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家蚕热休克蛋白基因Bmhsp19.9启动子的活性分析被引量：2: 2010年; 通过PCR扩增出家蚕(Bombyxmori)热休克蛋白基因Bmhsp19.9启动子的序列,TA克隆后进行序列测定,并构建重组载体进行瞬时表达。结果显示,该基因序列长为1 258 bp,具有典型的热激蛋白启动子的结构特点;序列分析显示,hsp19.9启动子区域可形成潜在的复杂茎环结构,推测其与启动子的功能有关。瞬时表达试验结果显示,hsp19.9的启动子能通过热诱导在家蚕BmN细胞和家蚕组织中驱动红色荧光蛋白报告基因(DsRed)瞬时表达,表明所克隆的hsp19.9启动子序列具有热休克蛋白基因的启动子活性。; 王晓娟谢敏张星曹广力薛仁宇虞晓华贡成良; 关键词：家蚕启动子

转基因家蚕丝腺组织和转化家蚕培养细胞表达hIGF-Ⅰ被引量：6: 2009年; 为实现在家蚕培养细胞和家蚕丝腺组织中表达人胰岛素样生长因子（hIGF-I）基因，以家蚕丝胶基因启动子（Pser-1）驱动hIGF-I基因，构建了带有家蚕杆状病毒ie-1启动子（Pie-1）控制的neo基因表达盒的转基因载体pigA3GFP—hIGF-ie—neo．在可表达转座酶的辅助质粒存在下，分别转染BmN培养细胞，以700～800μg/mL的G418筛选，获得了稳定转化细胞系．Westernblotting分析可检测到hIGF-I的特异性条带，ELISA检测结果显示，hIGF-I在5-100个细胞中的表达水平约7800Pg．通过反向PCR分析表明，在转化细胞中外源DNA可通过随机整合或按照piggyBac特定的靶位点序列TTAA插入细胞基因组．转基因载体pigA3GFP-hIGF—ie-neo通过精子介导法导入蚕卵，利用neo，加基因的双重筛选，经过PCR和点杂交鉴定，获得了2头转基因家蚕．ELISA检测结果显示，在G1代hIGF-I在每克中部丝腺组织中的表达水平为2440Pg左右．; 赵越李曦曹广力薛仁宇贡成良; 关键词：PIGGYBAC 胰岛素样生长因子

Sequence and phylogenetic analysis of the complete mitogenome of Bombyx mandarina strain Qingzhou: The complete nucleotide sequence of the mitogenome of Bombyx mandarina strain Qingzhou was determined. The cir...; Xiao-long Hu; 文献传递

家蚕质型多角体病毒(苏州株)S10片段的cDNA克隆及序列分析被引量：4: 2009年; 为了探讨质型多角体病毒基因的遗传与变异,通过RT-PCR从家蚕(Bombyx mori)质型多角体病毒(Cytoplasmic Polyhedrosis Virus,CPV)苏州株(BmCPV-suzhou)的dsRNA中成功克隆了S10片段。该片段cDNA含有一个744bp的完整开放阅读框(ORF),编码由248个氨基酸残基组成的多角体蛋白,其分子量为28.46kD,等电点为7.12。比较不同宿主来源的CPV多角体蛋白基因氨基酸序列发现,同型CPV多角体蛋白基因高度相似,而不同型的CPV多角体蛋白之间几乎没有同源性;基于质型多角体蛋白基因的核苷酸序列和氨基酸序列的系统进化分析表明,BmCPV的不同株系与舞毒蛾(Lymantria dispar)CPV(LdCPV)和马尾松毛虫(Dendrolimus punctatus)CPV(DpCPV)聚为一类,表明三种CPV的亲缘关系较近。研究结果为深入探讨质型多角体病毒的变异与分子进化提供了新的参考。; 马焕艳孟祥坤朱越雄薛仁宇曹广力贡成良; 关键词：家蚕质型多角体病毒多角体蛋白

家蚕hsp20.4启动子克隆及其驱动表达产物EGT对家蚕蛹体发育的影响被引量：4: 2009年; 为验证家蚕Bombyxmori热休克蛋白基因hsp20.4启动子的活性以及家蚕核多角体病毒egt的表达产物对家蚕发育的影响,本实验通过PCR扩增分别得到hsp20.4启动子片段和egt片段。利用hsp20.4的启动子和红色荧光蛋白报告基因DsRed构建重组载体,在家蚕BmN细胞以及家蚕组织中得到了瞬时表达,表明所克隆的hsp20.4启动子序列具有热休克蛋白基因的启动子活性。又利用hsp20.4启动子和家蚕核多角体病毒的egt构建重组载体,通过注射到蚕蛹中进行瞬时表达,以检测egt表达产物对家蚕发育的影响,经42℃1h热诱导后,hsp20.4启动子控制的egt表达产物可以延迟家蚕发育。; 谢敏贡成良薛仁宇盛洁张晓荣李艳梅虞晓华曹广力; 关键词：家蚕家蚕核多角体病毒 EGT 发育

家蚕vasa样基因表达的可变剪接被引量：4: 2009年; VASA样蛋白是决定生殖系发育的重要调控蛋白因子之一,具有广泛的保守性,因此vasa的表达被认为是生殖细胞中最可靠的分子标记。为研究家蚕vasa样基因(Bombyx mori vasa-like gene,Bmvlg)的基本结构特征,通过RT-PCR从家蚕雄性性腺组织中获得了4个不同长度的BmvlgcDNA片段。经克隆分析,其中一个完整的BmvlgcD-NA全长1 806 bp,编码全长601个氨基酸的家蚕VASA样蛋白,该蛋白的结构特征与已知同源VASA样蛋白的结构特征基本一致;另3个不同长度的BmvlgcDNA均有各自的起始密码子和终止密码子。推测Bmvlg基因可能存在着多种可变剪接。; 盛洁贡成良薛仁宇谢敏张晓荣李艳梅曹广力; 关键词：家蚕生殖发育可变剪接

fib-H启动子驱动hGM-CSF在转基因家蚕丝腺中的表达研究: 为了建立家蚕表达hGM-CSF的转基因技术体系,我们构建了基于piggyBac转座子的带有人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因（hGM-CSF）和新霉素抗性基因（neo）表达元件的转基因载体pigA3GFP-FH-hGM-...; 李曦赵越曹广力薛仁宇贡成良; 关键词：转基因家蚕 HGM-CSF PIGGYBAC; 文献传递

家蚕核型多角体病毒egt基因的分子进化分析被引量：2: 2008年; 通过PCR方法获得家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nuclearpolyhedrosis virus,BmNPV)的蜕皮甾体尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶基因(egt)片段,序列分析表明该片段带有EGT的完整ORF,推测的多肽可形成EGT结构域的高级结构。为了研究egt的起源,利用家蚕基因组数据库,电子克隆了多个家蚕尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)基因,在此基础上进行了进化分析,表明BmNPV的EGT为antennal-enriched型UGT;推测核型多角体病毒(nucleopolyhedrivirus,NPV)和颗粒体病毒(granulovirus,GV)的egt基因在进化上来源于昆虫的UGT基因,但GV的egt基因在进化上的起源可能要早于NPV的egt基因;可能在昆虫祖先种进化形成不同昆虫目的某一时期,杆状病毒的祖先种从昆虫中获得了antennal-enriched型UGT基因,并进化为egt基因。家蚕的部分UGT基因与转座子元件连锁的基因组结构特点反映了杆状病毒的egt基因可能通过转座子的传递而获得。; 曹广力贡成良薛仁宇朱越雄魏育红; 关键词：核型多角体病毒颗粒体病毒尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶进化起源

家蚕质型多角体病毒(苏州株)基因组片段8 cDNA克隆与分析: 2010年; 为研究家蚕质型多角体病毒(BmCPV1)的遗传与变异、探讨S8片段的功能,通过RT-PCR克隆BmCPV1苏州株(BmCPV1-SZ)S8的cDNA,并对其核苷酸序列(GenBank登录号:GQ150539)和编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果显示:S8由1 328 bp构成,具有一个编码390个氨基酸残基的开放阅读框;在BmCPV1-SZ S8的编码氨基酸序列与BmCPV1-I和BmCPV1-H的一致性达93%,但与其他非CPV1型的相似程度较低;在推导的蛋白的氨基酸序列中间区域,具有E-丰富和P-丰富的区域,其局部区域的氨基酸序列与某些蛋白的功能(细胞周期控制、蛋白降解和RNA降解)区域的序列具有一定的相似性;结构域家族分析显示,BmCPV1-SZ S8编码蛋白属GcrA家族,具有与DNA结合的HTH结构域。Blocks分析显示,S8编码蛋白同时具有DNA聚合酶家族、RNA聚合酶2的结构功能域;高级结构分类显示,S8编码蛋白具有与TIM桶酶、肽酶、核苷三磷酸水解酶相似的同源结构。推测该蛋白具有转录调控因子和多功能酶的功能。基于S8编码的氨基酸序列的进化分析显示,相同类型的CPV聚为一类,同一宿主不同类型的CPV相距较远,推测CPV主要根据其类型聚类,而宿主昆虫对聚类的影响相对较小。; 张晓荣孟祥坤朱越雄贡成良薛仁宇曹广力; 关键词：家蚕质型多角体病毒 RT-PCR 克隆生物信息学

家蚕质型多角体病毒苏州株基因组片段2的克隆与分析: 2011年; 为了探讨呼肠孤病毒科依赖RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RDRP)基因的遗传与变异,通过RT-PCR对家蚕质型多角体病毒(Bombyx moricytoplasmic polyhedrosis virus)苏州株(BmCPV-suzhou)的S2片段进行了分段克隆,对各克隆的测序结果进行拼接,获得了S2片段的全长序列。分析显示,BmCPV-suzhou S2片段的全长为3 854 bp(GenBank登录号:GQ924586),含有1个3 678 bp的编码RDRP基因的开放阅读框,并分别在5′和3′端发现了保守序列AGUAA和GUUAGCC。RDRP的氨基酸序列比对分析结果显示,BmCPV-suzhou与BmCPV-china、BmCPV-1、舞毒蛾(Lymantria dispar)CPV-1(LdCPV-1)、马尾松毛虫(Dendrolimus punctatus)CPV-1(DpCPV-1)、舞毒蛾CPV-14(LdCPV-14)、棉铃虫(Heliothis armigera)CPV-14(HaCPV-14)的相似性分别为99%、97%、94%、94%、54%、55%。基于RDRP氨基酸序列的系统进化分析表明,BmCPV的不同株系与LdCPV-1、DpCPV-1聚为一类。; 刘卫星孟祥坤薛仁宇曹广力贡成良; 关键词：家蚕质型多角体病毒 RDRP

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国家自然科学基金(30671590)

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