国家自然科学基金(81370883)
- 作品数：7 被引量：8H指数：2
- 相关作者：庞希宁施萍王竟张殿宝刘晓玉更多>>
- 相关机构：中国医科大学中国医科大学附属第一医院学研究院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金沈阳市科学技术计划项目辽宁省科学技术计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 水通道蛋白1促进人羊膜间充质干细胞的迁移被引量：1
- 2013年
- 目的探讨水通道蛋白1(AQP1)在人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)迁移中的作用。方法免疫荧光染色、RTqPCR及Western blot检测hAMSCs AQP1的表达,siRNA干扰AQP1后,应用Transwell小室检测hAMSCs的迁移能力。结果 hAMSCs细胞膜上AQP1表达阳性。siRNA干扰AQP1 48 h后AQP1 mRNA表达水平降低60.13%;AQP1的蛋白表达水平降低40.42%。siRNA干扰组穿过细胞数目为23.7±1.45显著低于对照组的33.15±1.15(P<0.01)。结论 AQP1促进人羊膜间充质干细胞的迁移,推测AQP1参与创伤的修复过程。
- 张涛庞希宁施萍王竟王喜良
- 关键词：水通道蛋白1细胞迁移人羊膜间充质干细胞创伤修复
- EGF对hAMSCs基因表达谱影响及生物信息学分析被引量：3
- 2013年
- 目的探讨表皮生长因子(EGF)对人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)基因表达谱影响及分子机制。方法采用基因表达谱测序(Illumina RNA-Seq)技术和生物信息学分析方法,对100 ng/mL EGF干预前后的hAMSCs基因表达测序比对,确定hAMSCs基因表达谱,RT-PCR检测进行验证。结果筛选出差异表达基因104个(FDR≤0.001和|log2Ratio|≥1),其中上调差异表达基因56个,下调差异表达基因48个;GO生物学过程富集分析26个生物学过程具有显著性差异(P≤0.05);KEGG信号通路富集分析细胞因子与细胞因子相互作用信号通路具有显著性差异(Q≤0.05),RT-PCR检测验证与基因表达谱结果一致。结论 EGF干预hAMSCs引起基因表达谱的变化,显著差异表达的基因和信号通路可能在hAMSCs增殖和迁移及促进创伤修复过程中具有重要作用。
- 庞希宁李彩虹施萍王竟刘晓玉张涛张殿宝赵峰
- 关键词：表皮生长因子人羊膜间充质干细胞基因表达谱生物信息学
- 负向调节因子重编程诱导大鼠骨髓间充质干细胞向胰岛内分泌细胞分化的研究被引量：1
- 2016年
- 目的重编程诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向胰岛内分泌细胞分化并探讨其可能的分化机制。方法原代培养的大鼠骨髓MSCs经分离、培养至第3代后,用负向调节因子Rest/Nrsf、Shh慢病毒干扰载体转染并培养10 d,通过实时定量RTPCR和免疫荧光检测胰岛细胞分化相关基因的表达。结果 MSCs慢病毒转染后,胰岛素、胰高血糖素及生长抑素的表达明显升高,并表达胰岛内分泌细胞分化的相关基因。结论通过转染shRest/Nrsf、shShh慢病毒载体能够诱导大鼠MSCs向胰岛内分泌细胞分化,EGFR、ERK1、MMP以及PI3K等参与这一分化过程。
- 李宏图林学文李彩虹庞希宁
- 关键词：骨髓间充质干细胞慢病毒载体
- EGF促进人羊膜间充质干细胞迁移上调MMP14和IL-1β表达
- 2013年
- 目的研究表皮细胞生长因子(EGF)促进人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)迁移过程对基质金属蛋白酶14(MMP14)和白细胞介素1β(IL-1β)表达的影响。探讨EGF促进hAMSCs迁移的机制。方法贴壁法分离培养原代细胞流式细胞术鉴定Transwell小室检测EGF对hAMSCs迁移能力影响;Western blot和real-time PCR检测MMP14和IL-1β蛋白及mRNA表达。结果原代细胞表达间充质干细胞表面标记CD44,不表达CD45;不同浓度EGF作用hAMSCs 24 h 100μg/L EGF迁移指数最大为2.0;100μg/L EGF作用hAMSCs12、24和48 h迁移指数为1.6、2.0和1.7;MMP14蛋白表达12 h为(0.81±0.20)显著高于对照组的(0.63±0.12)(P<0.05);IL-1β蛋白表达48 h为(0.55±0.16)显著高于对照组的(0.30±0.05)(P<0.05)MMP14和IL-1βmRNA表达上调显著高于对照组(P<0.05)。结论 EGF促进hAMSCs迁移上调MMP14和IL-1β表达;MMP14、IL-1β和EGF协同激活MAPK/ERK、P13K/AKT信号通路参与调控EGF促进hAMSCs迁移。
- 谭丽萍庞希宁施萍王竟王喜良
- 关键词：白细胞介素1Β表皮生长因子羊膜间充质干细胞
- 人羊膜间充质干细胞储备库的构建被引量：1
- 2013年
- 目的构建人羊膜间充质干细胞库,为间充质干细胞的应用提供充足的细胞来源。方法将胎盘冲洗干净后,分离出羊膜组织,从羊膜组织原代和传代培养羊膜间充质干细胞(hAMSCs)。用MTT法检测细胞生长方式,流式细胞仪分析细胞表型及干细胞标记,使用不同的诱导分化培养基检测鉴定hAMSCs多向分化的能力,细胞周期等鉴定其生物学特性,将磁性纳米颗粒标记的人羊膜间充质干细胞移植到小鼠创面进行细胞功能评价。结果羊膜来源的细胞生长呈典型的成纤维细胞形态。细胞传代过程中未发现细菌、真菌、霉菌、支原体和内毒素等的污染。细胞表达间充质干细胞表面标记CD90和CD105,不表达CD45、CD14、CD34和HLA-DR。在不同的条件培养基培养状态下,细胞可向成骨、成软骨和成脂方向分化。细胞大多数处于G1期,仅少数细胞处于活跃的增殖期G2;建库用人羊膜间充质干细胞可显著促进小鼠创面愈合(P<0.05)。结论所得到的细胞为人羊膜间充质干细胞。羊膜间充质干细胞具有与骨髓间充质干细胞相似的生物学特性。初步建立了库存细胞的生物学特性检测标准和相应的干细胞质量控制体系。
- 庞希宁刘晓玉施萍王竟林学文张殿宝谭丽萍
- 关键词：人羊膜间充质干细胞生物学特性细胞分化细胞库
- 人羊膜间充质干细胞的超微结构观察被引量：2
- 2013年
- 目的观察羊膜间充质干细胞的超微结构。方法分离和培养人羊膜间充质干细胞(AMSC),进行传代培养、扩增,在显微镜下观察细胞形态。对传代培养至第3代的hAMSC进行流式检测和鉴定细胞表型,并在透射和扫描电子显微镜下进行超微结构的观察。结果人AMSC呈梭形和多角形;高表达表面标志CD44,CD90,CD105和波形蛋白,不表达CD34和CD45。扫描电镜下可见细胞表面有大量小泡和微绒毛突起;透射电镜下见到胞核较大,呈圆形或椭圆形;胞质内线粒体、粗面内质网和高尔基体等细胞器数量丰富,有较多小泡。结论从羊膜中分离培养的细胞具有间充质干细胞的生物学特性的超微结构。丰富的粗面内质网和高尔基体,提示,AMSC具有产生大量分泌蛋白的功能,可能是羊膜间充质干细胞旁分泌作用的基础。
- 庞希宁王竟施萍孟涛霍双枝张殿宝谭丽萍
- 关键词：间充质干细胞羊膜超微结构
- 普罗布考减轻糖基化终末产物诱导人真皮成纤维细胞NF-κB活化及ICAM-1表达
- 2013年
- 目的观察普罗布考对糖基化终末产物(AGEs)诱导成人真皮成纤维细胞(Fb)细胞核因子κB(NF-κB)活化与ICAM-1表达的影响。方法取足部创面皮肤进行Fb培养。实验分4组:对照组、AGE-BSA作用组(AGE-BSA浓度100 mg/L)、高浓度普罗布考组(100μmol/L普罗布考+100 mg/L AGE-BSA)、低浓度普罗布考组(50μmol/L普罗布考+100 mg/L AGE-BSA)。光镜下观察细胞形态学改变,测定细胞中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,应用Western blot检测细胞核NF-κB P65蛋白和总ICAM-1蛋白表达。结果 1)与对照组相比,AGEBSA作用组Fb形态改变,核蛋白NF-κB P65表达明显增加(P<0.01),细胞总ICAM-1表达明显升高(P<0.05);普罗布考可在不同程度纠正上述变化。2)普罗布考显著抑制AGE-BSA诱导Fb MDA含量增加和SOD活性下降(P<0.05);普罗布考能抑制AGE-BSA诱导Fb NF-κB和ICAM-1蛋白表达水平上升。结论普罗布考对AGE-BSA诱导Fb的保护作用可能是通过抑制NF-κB活化以及减低ICAM-1表达来实现的。
- 王哲张殿宝施萍刘晓玉庞希宁
- 关键词：糖基化终末产物成纤维细胞细胞黏附分子1
