国家自然科学基金(30671582)
- 作品数：12 被引量：7H指数：2
- 相关作者：魏小娟张继瑜王松泰李剑勇李金善更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金甘肃省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生石油与天然气工程更多>>
- 福氏志贺菌2a主动外排基因acrA的克隆和分子特征被引量：1
- 2010年
- acrA基因在细菌耐药过程中起重要作用,通过生物信息学方法,结合PCR技术,对福氏志贺菌2a基因进行了克隆。基因序列分析表明,克隆得到的acrA基因ORF由1194个核苷酸组成,编码一个由397个氨基酸组成的多肽,含有一段24个氨基酸的信号肽,预测蛋白质分子量和等电点分别约为42.15ku和8.42。本研究获得的主动外排基因acrA的信息为进一步研究AcrA蛋白的结构与功能奠定了基础。
- 魏小娟张继瑜王松泰黄娇娇李剑勇周绪正牛建荣李金善
- 关键词：福氏志贺菌分子特征
- 福氏2a志贺菌DNA转录激活蛋白MarA的二级结构及其B细胞抗原表位预测
- 2009年
- 研究以福氏2a志贺菌(Shigella flexneri2a,s.f2a)的基因组序列为材料,采用Gamier-Robson法、Chou-Fasman法和Kamplus-Schulz法预测了其DNA结合转录激活蛋白MarA的二级结构,用Kyte-Doolittle法对结构蛋白的亲水性进行了分析,用Emini法预测了蛋白的表面可能性,以Jameson-Wolf法预测了蛋白的抗原指数,然后综合评价了福氏2a志贺菌转录激活蛋白MarA的B细胞抗原表位。结果表明:福氏2a志贺菌MarA蛋白的二级结构较为复杂,含有较多的转角和无规则卷曲等柔性区域以及α-螺旋和β-折叠区段,该蛋白有多处抗原指数较高的区段,其中含有潜在的B细胞优势抗原表位,因此其在免疫学中的地位也应当引起重视。
- 魏小娟张继瑜王松泰李剑勇周旭正牛建荣李金善
- 关键词：福氏2A志贺菌B细胞表位
- 福氏志贺菌外输调节蛋白基因marA的原核表达载体构建及其鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的构建志贺菌外输调节蛋白基因marA的原核表达载体并对其表达的蛋白进行鉴定。方法采用PCR从志贺菌基因组DNA中扩增得到志贺菌外输调节蛋白基因marA,并将其定向克隆到原核表达载体pET-30a,构建原核表达重组质粒pET-30a-marA,重组子经限制性内切酶分析、PCR及测序鉴定后,转化宿主菌BL21,IPTG诱导表达,产物进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹分析鉴定。结果经鉴定证实原核表达载体pET-30a-marA构建成功,且在大肠杆菌BL21中获得了MarA与His的融合表达,且表达蛋白产物的分子质量大小与预期值一致,并可被特异性抗体所识别。结论MarA在大肠杆菌中获得了高效的表达,为进一步研究其免疫学特性和功能奠定了基础。
- 魏小娟张继瑜王松泰牛建荣李剑勇周旭正吴培星李金善
- 关键词：志贺菌原核表达
- 志贺菌耐药性研究进展被引量：1
- 2008年
- 概述了致病性志贺菌的分类,对家畜及人类造成的危害,临床多重耐药性严重状况。从分子生物学角度介绍了志贺菌主要耐药性acrAB-tolC主动外排系统的作用特点及耐药性相关药物外输蛋白marA、acrA、acrB,基因hdeA、tolB、tol A、tol Q等研究进展,并阐述了克服志贺菌耐药性的对策。
- 牛建荣张继瑜魏小娟王松泰李剑勇周绪正吴培星胡振英李金善
- 关键词：志贺菌耐药性基因
- 福氏志贺菌多重耐药调节蛋白MarA的原核表达
- 2008年
- 为获得福氏志贺菌多种耐药调节蛋白MarA,将扩增出的marA基因亚克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,经PCR和双酶切鉴定以及序列测定,重组质粒构建成功。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,表达的蛋白再经Ni-NTA亲和层析纯化,结果显示,MarA蛋白的表达量占菌体总蛋白的30.2%,经Western-bloting检测,表达的蛋白能被福氏志贺菌阳性血清特异识别,说明表达蛋白具有良好的免疫反应性。
- 魏小娟张继瑜王松泰牛建荣李剑勇周旭正吴培星李金善
- 关键词：福氏志贺菌原核表达蛋白纯化
- 细菌革兰阴性菌的耐药机制——外膜通透性降低被引量：2
- 2009年
- 黄娇娇张继瑜魏小娟
- 关键词：耐药机制膜通透性革兰阴性菌非特异性修饰酶
- 福氏2a志贺菌MarA蛋白纯化复性及活性检测
- 2009年
- 目的纯化、复性志贺菌MarA蛋白并分析其生物学活性。方法将构建好的BL21大肠埃希菌工程菌经异丙基-β-D-硫代-乳糖苷(IPTG)诱导,His-tag形式表达MarA融合蛋白(约21ku),采用超声波破碎细菌,提取包涵体用高浓度尿素裂解,经镍柱亲和层析纯化,纯化后的蛋白质在小分子保护剂及还原型谷胱甘肽(GSH)/氧化型谷胱甘肽(GSSG)的存在下对融合蛋白进行复性。用凝胶薄层扫描法测纯度。结果从融合蛋白包涵体中获得纯度达90%以上的目的蛋白,免疫蛋白印迹试验结果显示,复性后的MarA融合蛋白能与抗福氏志贺菌抗体发生特异性结合。结论成功建立有效纯化融合蛋白包涵体His-MarA的方法。
- 魏小娟张继瑜王松泰李剑勇周绪正牛建荣李金善
- 关键词：纯化复性活性检测
- 志贺菌耐药性的分子机制
- 2008年
- 随着抗菌药物的广泛应用,耐药及多重耐药细菌已经严重威胁着人类和动物的健康。志贺菌的耐药机制主要是产生灭活酶、细胞壁的改变、主动外排以及作用靶位结构的改变。本文对其耐药机制的研究进展作简要综述。
- 魏小娟张继瑜李剑勇周绪正牛建荣李金善王松泰
- 关键词：志贺菌耐药性分子机制
- 福氏志贺菌主动外排基因acrA的克隆及原核表达被引量：2
- 2008年
- 目的对福氏志贺菌外排基因acrA进行克隆和原核表达,为进一步研究其在志贺菌外排机制中的作用奠定基础。方法参考福氏志贺菌2aacrA基因序列设计一对特异引物,在引物的5′和3′端分别加入含有BamHⅠ和SalⅠ限制性酶切位点序列。以福氏志贺菌2a菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增acrA基因并与pMD18-T载体连接,然后转化DH5α。提取重组质粒pMD18-acrA,经BamHI/SalI双酶切并与载体pET30a连接后转化宿主菌BL21(DE3)pLys,通过IPTG诱导表达目的蛋白。结果克隆的acrA基因长度为1122bp,核苷酸序列与GenBank上公布的序列完全相同。原核表达经SDS-PAGE及WesternBlotting检测和鉴定,结果表明重组载体pET-30a-acrA可成功地在大肠杆菌中表达AcrA蛋白。结论成功构建了福氏志贺菌acrA基因的原核表达质粒,并在大肠杆菌中得到有效表达,该研究为了解AcrA蛋白的特性、功能以及对福氏志贺菌多药耐药机理的深入研究奠定了基础。
- 王松泰张继瑜魏小娟付元芳曹小安邱昌庆
- 关键词：福氏志贺菌克隆原核表达
- 福氏志贺菌2a多药耐药基因marA的克隆及其原核表达
- 2008年
- 根据福氏志贺菌2a多药耐药基因marA的序列,设计并合成了1对特异性引物,在引物的5′和3′端分别加入含有BamHⅠ和SalⅠ限制性酶切位点的序列,以福氏志贺菌2a菌株基因组DNA为模板扩增了marA基因序列。将PCR产物与pMD18-T载体连接,转化到大肠杆菌DH5α。鉴定成功获得目的片段后,经BamHⅠ+SalⅠ双酶切并与载体pET-30a连接,构建原核表达质粒pET-30a-marA,并将其转化宿主菌BL21(DE3)pLys,用IPTG诱导其表达。SDS-PAGE分析表明,重组载体pET-30a-marA可成功地在大肠杆菌中表达MarA蛋白。Western-blotting检测证明,该蛋白能与志贺菌阳性血清发生特异性反应。
- 王松泰张继瑜魏小娟曹小安邱昌庆
- 关键词：克隆原核表达
