教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-08-0583)
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 相关作者：张琪陈规划杨卿张英才刘剑戎更多>>
- 相关机构：中山大学附属第三医院更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”广东省科技计划工业攻关项目广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 5/35嵌合型溶瘤腺病毒SG635对肝癌细胞的抑制作用被引量：1
- 2011年
- 目的:研究5/35嵌合型溶瘤腺病毒SG635在体外对肝癌HepG2和SMMC-7721细胞的特异性杀伤作用。方法:将SG600载体中5型腺病毒(Ad5)纤毛蛋白的knob和shaft结构域替换为35型腺病毒(Ad35)纤毛蛋白的相应结构域,构建成5/35嵌合型溶瘤腺病毒SG635。流式细胞术检测5/35嵌合型腺病毒Ad5/35-EGFP对HepG2和SMMC-7721细胞的感染效率,体外病毒增殖实验观察溶瘤腺病毒SG635的增殖能力,Western blotting检测SG635感染后肝癌细胞中E1A蛋白的表达,CCK-8实验检测SG635对肝癌HepG2和SMMC-7721细胞的杀伤作用。结果:在肝癌HepG2和SMMC-7721细胞中,Ad5/35-EGFP的感染效率明显强于5型腺病毒Ad5-EGFP;5/35嵌合型溶瘤腺病毒SG635在HepG2和SMMC-7721细胞中72 h的增殖倍数高于5型溶瘤腺病毒SG600(15 848.93vs6 309.57,6 309.57vs5 011.87,均P<0.01),而在人正常成纤维细胞BJ中几乎不增殖。SG635感染后,HepG2和SMMC-7721细胞中E1A蛋白表达高于SG600感染,在BJ中则无E1A表达。在一定MOI范围内,SG635对于HepG2细胞和SMMC-7721细胞的杀伤作用逐渐增强,且杀伤率明显强于SG600(MOI为1时,90%vs60%;MOI为10时,90%vs50%),对BJ无杀伤作用。结论:5/35嵌合型溶瘤腺病毒SG635能够高效感染并特异性杀伤肝癌细胞,具有较好的靶向性和安全性。
- 武玉强张琪陈伟刘炜台艳陈规划
- 关键词：溶瘤腺病毒肝癌病毒治疗
- 人脐带间充质干细胞分离扩增方法的优化被引量：4
- 2011年
- 【目的】探讨一种高效稳定分离和扩增人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)的方法。【方法】取脐带20条,获得Wharton’s Jelly组织,分别用酶联合消化法(12例)和酶序贯消化法(8例)来分离、提取hUC-MSC,比较两种方法分离hUC-MSC的成功率、原代培养时间及获得的细胞数量;利用低糖DMEM(LG-DMEM)完全培养基和LD-Mesen培养基(MesenProRSTM与LG-DMEM的混合培养基)分别培养hUC-MSC,比较两种培养体系的扩增效率。对所获取细胞的免疫表型以流式细胞术进行鉴定,并诱导成脂、成骨分化验证其多向分化潜能。【结果】酶联合消化法和酶序贯消化法成功率分别为100%(12/12)和12.5%(1/8),两者相比有显著统计学差异(P=1.03×10-4),前者原代培养平均时间为(14.17±1.14)d,获得细胞(1.30±0.14)×106个。2×105个hUC-MSC用LD-Mesen和LG-DMEM两种体系培养12 d后,扩增所得的细胞数分别为(14.86±0.08)×106和(5.08±0.08)×106,两者有显著统计学差异(P=1.38×10-8)。hUC-MSC高表达CD73、CD105、CD90、CD29、CD44,不表达CD31、CD34、CD45、HLA-DR;并可向成骨细胞及脂肪细胞诱导分化。【结论】酶联合消化Wharton's Jelly组织并以LD-Mesen体系进行扩增可高效获取hUC-MSC,效率明显优于传统方法。
- 杨卿杨扬刘剑戎潘国政张英才陈规划张琪
- 关键词：间充质干细胞脐带细胞分离
