国家高技术研究发展计划(2006AA10A415)
- 作品数：13 被引量：80H指数：6
- 相关作者：喻达辉黄桂菊龚世园成书营王晓宁更多>>
- 相关机构：中国水产科学研究院南海水产研究所上海海洋大学华中农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学天文地球更多>>
- 大珠母贝种苗海区深水中间培育技术研究被引量：11
- 2011年
- 开展了大珠母贝种苗不同深度和密度的养殖试验,以优化、筛选合适的养殖密度和深度,为大珠母贝养殖提供技术支撑。贝苗初始大小为平均壳长4.11 mm,平均壳高3.89 mm,平均体重0.0143 g,养殖水深包括3、5、7 m和海底(12 m)(贝苗密度为2 000个/笼),养殖密度包括500、1 000、1 500、2 000、2 500个/笼(养殖水深为5 m)。经过两个月的养殖,7 m水深的贝苗生长最快,平均壳长达30.80 mm(平均生长速度为0.41 mm/d),平均体重达3.34 g(平均生长速度为36.69 mg/d);密度为500个/笼的生长较快,平均壳长达30.15 mm(生长速度为0.42 mm/d),平均体重达3.18 g(生长速度为31.90 mg/d)。深度组中存活率最高的是海底组(12 m),为17.7%,明显高于其他3组(P<0.05),最低的是3 m组,为6.9%;密度组存活率最高的是1 500个/笼组,为15.3%,显著高于其他组(P<0.05),最低的是2 500个/笼组,为7.4%。不管是深度组还是密度组,第1个月与第2个月的平均壳长增长没有明显差异,而第2个月的平均体重增长明显大于第1个月。说明大珠母贝苗海区养殖适宜在较深水层、密度为1 500～2 000个/笼的条件下进行。
- 成书营喻达辉黄桂菊潘俐玲王晓宁
- 关键词：种苗养殖方式
- 皱纹盘鲍和盘鲍南方养殖群体遗传变异的微卫星分析被引量：11
- 2007年
- 利用4对微卫星引物分析了皱纹盘鲍Haliotis discus hannai和盘鲍H.discus discus在福建和广东养殖群体的遗传多样性。结果表明，4个养殖群体平均等位基因数为3．750—5．500，平均有效等位基因数为2．941～3．885，平均期望杂合度为0．641～0．698，平均观察杂合度为0．456～0．620，平均多态信息含量PIC值为0．558～0．645，其中惠来盘鲍群体遗传多样性最高，东山盘鲍遗传多样性最低。AMOVA分析表明，群体间的遗传变异仅为总遗传变异的4．78％，但群体间遗传分化显著（FSC=0．048，P〈0．001）。群体间NEI氏遗传距离为0．084—0．186，UPGMA聚类分析表明，东山盘鲍与惠来盘鲍群体间亲缘关系最近，并与惠来皱纹盘鲍聚为一类，东山皱纹盘鲍与其它群体间亲缘关系较远。皱纹盘鲍和盘鲍南方养殖群体遗传多样性较高，有利于遗传选育，但与野生群体相比等位基因有所丧失。
- 杜博龚世园童馨黄桂菊喻达辉
- 关键词：皱纹盘鲍盘鲍养殖群体微卫星
- 大珠母贝外套膜基因PMMG1的克隆、表达及其特征分析被引量：3
- 2010年
- EF-hand结构域在真核生物细胞内钙离子吸收和运输中发挥重要作用,在贝类中可能参与贝壳和珍珠质的形成。根据已报道的贝类中具有EF-hand结构域的碱基序列设计简并引物,从大珠母贝外套膜cDNA文库中筛选得到PMMG1基因(大珠母贝外套膜基因1)。PMMG1基因全长618 bp,开放读码框编码140个氨基酸,N-端的22个氨基酸肽段为信号肽。PMMG1氨基酸序列与合浦珠母贝PFMG1的一致性为56%,预测有两个EF-hand结构域。选取编码PMMG1成熟蛋白的cDNA序列插入pET-32a质粒构建表达载体,通过IPTG诱导,Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,成功获得预期大小的融合蛋白。凝胶电泳迁移率的变化证明PMMG1蛋白具有结合Ca2+/Mg2+的活性,组织特异性表达表明PMMG1基因在外套膜的表达量远高于其他组织。大珠母贝外套膜基因PMMG1的克隆与表达研究为进一步研究该蛋白在珍珠质矿化中的作用、探讨珍珠质形成的分子生物学机制奠定了一定基础。
- 王玉梅夏建红黄桂菊喻达辉
- 关键词：大珠母贝融合蛋白珍珠质
- 九孔鲍养殖群体遗传变异的RAPD分析被引量：4
- 2007年
- 为了解我国养殖九孔鲍Haliotis diversicolor supertexta的遗传多样性和遗传结构,用RAPD技术对我国福建、广东和海南的九孔鲍5个养殖群体进行了遗传变异分析。12条引物共扩增出141条清晰稳定的条带,大小范围为0.2—2.4kb,其中多态性条带97条,多态位点比例为68.8%。基因多样性介于0.210±0.193与0.247±0.187之间,平均为0.224,各群体间没有显著差异。聚类分析表明,福建东山群体和广东惠来群体亲缘关系最近,聚为一支;深圳、湛江和三亚群体亲缘关系较近,聚为另一支。群体间遗传距离介于0.062与0.135之间,福建东山群体与广东惠来群体间遗传距离最小,惠来群体与深圳群体间遗传距离最大。群体间FST值介于0.176与0.326之间,随机组合检验表明,群体间遗传分化已经达到显著水平,但东山和惠来与深圳、湛江和三亚2组之间遗传分化不显著。较高的遗传多样性水平表明近年来九孔鲍大规模死亡事件可能与遗传多样性并无直接相关,而较高的遗传多样性有利于遗传选育。不同地方群体间的显著分化表明,各地方群体应分别作为单独的"管理单元(management unit)"进行遗传资源管理,群体之间的移植应严格监管。
- 杜博童馨黄桂菊龚世园喻达辉
- 关键词：RAPD遗传分化
- 中国海南三亚大珠母贝不同年代种群的遗传变异研究被引量：7
- 2011年
- 利用10个多态微卫星标记对中国海南三亚海域大珠母贝（Pinctada maxima）3个不同年代（2007、2009和2010）群体的遗传变异进行了分析，每个群体30个样品。10个位点共扩增出60个等位基因，平均每个位点6（2—8）个，3个群体分别丢失了1、2和4个稀有等位基因。平均期望杂合度（Hc）、平均多态信息含量（PIC）、平均Shannon多样性指数均呈下降趋势。各群体均存在一定程度的杂合子缺失。30个数据中（3个种群×10个位点）有18个偏离了Hardy—Weinberg平衡。两两群体间的平均近交系数（FIS）介于0．2273～0．2601之间，平均遗传分化指数（FST）介于0．0204～0．0462，遗传分化显著（P〈0．01）。结果表明，3个年代群体遗传多样性水平已经出现了逐渐降低的趋势，遗传结构存在显著差异，近交程度增加，因此，人工繁育工作中应注意避免近亲繁殖和遗传多样性的降低。
- 柳明喻达辉黄桂菊卢传亮
- 关键词：大珠母贝微卫星
- 大珠母贝组织蛋白酶D的cDNA克隆、序列特征分析及应激表达研究被引量：4
- 2011年
- 通过同源克隆方法和cDNA末端快速扩增技术(RACE),获得了大珠母贝(Pinctada maxima)组织蛋白酶D基因(命名为pmCTSD)的cDNA全长序列1 742 bp,其中5’非翻译区(UTR)38 bp,3’UTR 534 bp,开放阅读框1 170 bp,编码390个氨基酸,分子量约为41.9 ku,等电点约为7.57。序列特征分析表明,pmCTSD蛋白由信号肽(Met1-Ala18)、前体域(Leu19-Lys47)和成熟域(Thr48-Asn390)3部分组成。同源性分析表明,pmCTSD氨基酸序列与其他物种高度保守,相似性介于64%～70%之间。进化分析表明,pmCTSD与栉孔扇贝亲缘关系最近,与传统分类结果基本一致。组织表达荧光定量分析发现,pmCTSD在闭壳肌、性腺、肝胰脏、外套膜和鳃组织中都有表达,但在性腺中表达量最高,肝胰脏次之。
- 潘俐玲黄桂菊喻达辉成书营王晓宁
- 关键词：大珠母贝组织蛋白酶D
- 温度和盐度对栉江珧耗氧率和排氨率的影响被引量：19
- 2009年
- [目的]探讨温度和盐度对栉江珧耗氧率（OR）和排氨率（NR）的影响。[方法]设置5个温度梯度和5个盐度梯度，测定温度和盐度对栉江珧OR和NR的影响。[结果]在18～34℃范围内，栉江珧单位体重OR和NR均随温度升高而增加，分别为260．82～585．90μg/（g·h）和26．32～42．19μg/（g·h），OR和NR与温度的相关方程分别为：ORT=-16．14lt^2＋197．58t＋89．29l（R^2=0．9738）；NRT=-0．6981t^2＋8．4677t＋17．792（R^2=0．9733）：在21～41盐度范围内，栉江珧单位体重OR和NR先随盐度增加而降低，在盐度31时达最小值，然后随盐度增加而升高，其变化分别为：575．82～734．40μg/（g·h）和36．78～54．45μg/（g·h），0R和NR与盐度之间的相关方程分别为：ORs=37．929s^2一214．27s＋867．6（R^2=0．9872）；NRs=3．5442s^2-19．748s＋62．08（R^2=0．9461）；表明在正常盐度下，贝体能量消耗较低。[结论]温度和盐度对栉江珧OR和NR均有显著影响，
- 李金碧龚世园喻达辉
- 关键词：栉江珧温度盐度耗氧率排氨率
- 大珠母贝微卫星DNA标记的分离与筛选被引量：11
- 2010年
- 采用生物素标记的（CA）15探针和磁珠富集法构建了大珠母贝（Pinctada maxima）微卫星DNA文库，随机挑选1200个菌落，经PCR筛选得到298个候选克隆，成功测序246个，分析获得251个微卫星序列，其中完美型、非完美型和混合型分别占63％、32％和5％。除探针中使用的CA重复外，还得到AT、GT、TC、AG、GC、TAA、CAA、AGG、GATA、GACA、GTGC、CGTC、GACG、CTGT等重复序列。设计引物90对，挑选其中30对合成并筛选出21对能在大珠母贝基因组有效扩增的引物。种群PCR扩增后利用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行检测，获得了10个多态位点，共检测出59个等位基因，片段长度范围为133～444bp。各位点等位基因数2～8个，平均等位基因数5．9个；有效等位基因数为1．3423-6．0000，平均为4．1240；多态性信息含量（CPI）为0．2225-0．8118，平均0．7179；期望杂合度（Hc）为0．2593-0．8475，平均0．7179；观测杂合度（H0）为0．3000-0．8000，平均0．5333。这些微卫星多态性标记的获得，为进一步开展大珠母贝遗传育种、保护生物学和种群遗传多样性等研究奠定了一定基础。
- 柳明喻达辉黄桂菊
- 关键词：磁珠富集法微卫星
- 大珠母贝(Pinctada maxima)α-淀粉酶基因cDNA及内含子克隆分析被引量：2
- 2013年
- α-淀粉酶广泛分布于动物、植物和微生物中,是贝类软体动物的主要消化酶,对贝类生长有重要影响。文章首次获得大珠母贝α-淀粉酶基因(命名为pmAMY,Pictada maxima alpha amylase),其cDNA全长1732bp,其中5'UTR 25bp,ORF 1554bp,编码518个氨基酸,3'UTR 153bp,分子量为57.7KDa,等电点7.63。氨基酸序列分析表明,pmAMY的氨基酸序列包括16个氨基酸组成的信号肽序列(MLLIVCSIAFFHSVYG)、8个半胱氨酸位点(Cys46、Cys104、Cys157、Cys176、Cys392、Cys398、Cys464、Cys476)、3个活性催化位点(Asp213、Glu249、Asp314)、4个钙结合位点(Asn118、Arg174、Asp183、His217)、3个氯离子结合位点(Arg211、Asn312、Arg350)和4段保守序列(Ile111—Val116、Val207—Ala215、Phe247—Val251、Val308—Asn315)。pmAMY的氨基酸序列与企鹅珍珠贝(Pteria penguin)同一性最高,为82%;与超嗜热古菌(Thermococcus hydrothermalis)同一性最低仅为27%;与其他物种的同一性在57%—79%之间。克隆获得大珠母贝pmAMY基因的2个内含子,长度分别为846bp、162bp。2个内含子都起始于GT,终止于AG,符合内含子共同剪接位点序列。组织表达分析表明pmAMY只在肝胰脏中表达。本研究为α-淀粉酶基因的功能分析、单核苷酸多态性(SNP,single nucleotide polymorphism)位点分离及其与生长性状的关联分析奠定了基础。
- 潘俐玲黄桂菊成书营王晓宁喻达辉
- 关键词：大珠母贝Α-淀粉酶基因内含子
- 珍珠贝prismalin-14基因的组织表达与钙沉降抑制的比较分析
- 2012年
- 对大珠母贝(Pinctada maxima)和合浦珠母贝(Pinctada fucata)的棱柱层形成相关基因prismalin-14的组织表达和碳酸钙沉降抑制进行了比较研究。选取编码prismalin-14蛋白的cDNA序列插入pET-32a质粒,构建表达载体,通过IPTG诱导、亲和层析柱纯化,成功获得预期大小的融合蛋白并用于碳酸钙沉淀的抑制试验。结果表明,大珠母贝的prismalin-14蛋白对碳酸钙沉降的抑制能力比合浦珠母贝弱。组织特异性表达表明,prismalin-14基因在外套膜的表达量远高于其他组织。对大珠母贝外套膜3个不同部位的荧光定量PCR表明,prismalin-14基因在大珠母贝外套膜边缘表达量最高,在外套膜皮质部和外套膜中心表达量较低,与合浦珠母贝的表达模式相似。
- 王晓宁黄桂菊潘俐玲成书营喻达辉
- 关键词：大珠母贝合浦珠母贝
