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利用PCR和限制性酶切技术鉴别3种鳗鱼被引量：3: 2011年; 根据日本鳗、欧洲鳗和美洲鳗3种鳗鱼的16S rRNA基因序列,设计特异性引物,进行16SrRNA基因的PCR扩增,然后对PCR产物进行ApaI酶切反应.结果显示,日本鳗和欧洲鳗的PCR产物均出现211 bp的特异性扩增条带,美洲鳗的PCR产物出现两条DNA条带;日本鳗的PCR产物经ApaI酶切产生大小为135 bp和76 bp的两条条带,而欧洲鳗的PCR产物经ApaI酶切没有变化.因此,利用该方法可鉴别出日本鳗、欧洲鳗和美洲鳗等3种鳗鱼.; 刘光明史千玉曹敏杰苏国成倪辉蔡慧农; 关键词：鳗鱼 RRNA PCR 限制性酶切分子鉴别

加工处理方式对蟹类原肌球蛋白的消化稳定性和过敏原性的影响被引量：15: 2011年; 在超声波处理对拟穴青蟹(Scylla paramamosain)过敏原(原肌球蛋白,Tropomyosin,TM)影响的研究基础上,本文采用超声波、微波、超声波结合蒸煮处理拟穴青蟹蟹肉,提取其蛋白粗提液,通过模拟胃肠液消化及SDS-PAGE电泳、Western-blotting、抑制性ELISA等方法分析TM的消化稳定性及过敏原性。结果显示,与未经处理的样品及非过敏蛋白相比,TM在超声波(200W,30℃)处理后降解较快;微波处理后TM的消化稳定性及过敏原性没有明显变化,超声波处理、超声波结合蒸煮处理后TM的消化稳定性及过敏原性明显降低。该结果提示,超声波、超声波结合蒸煮等加工处理方式可降低蟹肉的致敏性。; 刘光明余惠琳黄秀秀蔡秋凤苏文金曹敏杰; 关键词：原肌球蛋白免疫检测

九孔鲍鱼纤维素酶的分离纯化与性质分析被引量：7: 2010年; 采用SP-Sepharose阳离子葡聚糖凝胶交换柱层析、Sephacryl S-200丙烯葡聚糖凝胶柱层析和Hydrox-yapatite羟基磷灰石柱层析,从九孔鲍鱼(Haliotis diversicolor)消化腺中分离纯化到一种纤维素酶。SDS-PAGE结果显示,该酶的分子质量约为55kDa。该酶水解羧甲基纤维素钠的最适温度50℃,最适pH5.5。该酶在温度40℃以下,pH5.0～7.0之间具有较好的稳定性。; 孙乐常巫朝华蔡秋凤张凌晶苏文金曹敏杰; 关键词：纤维素酶纯化

日本鳗鲡胶原蛋白和小清蛋白的过敏原性被引量：8: 2010年; 以日本鳗鲡皮与肌肉组织为研究对象,采用碱溶、酸溶、盐析、冻干等方法纯化得到胶原蛋白,采用加热、饱和硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose阴离子交换层析等方法纯化得到两种亚型的小清蛋白(PV-Ⅰ和PV-Ⅱ),纯化的目标蛋白经动物特异性抗体的免疫印迹实验确证。酶联免疫吸附测定和免疫印迹分析结果显示,纯化的胶原蛋白和小清蛋白分别与鱼类过敏患者阳性血清发生特异性反应,且二者之间无免疫交叉反应。体外模拟胃液消化实验和SDS-PAGE分析结果显示,胶原蛋白和小清蛋白均具有较高的消化稳定性。结果提示,日本鳗胶原蛋白和小清蛋白具有较高的消化稳定性和免疫原性,二者可引发不同患者的IgE介导特异性超敏反应。; 刘光明史千玉蔡秋凤潘冰青翁武银苏文金曹敏杰; 关键词：日本鳗鲡胶原蛋白小清蛋白免疫分析

鱼类主要过敏原小清蛋白的检测被引量：13: 2010年; 目的:鱼类是主要的致敏食物之一。痕量的过敏原即可能导致过敏患者产生严重的过敏反应,因此,本研究拟对多种鱼类主要过敏原小清蛋白的存在情况进行分析及相对定量检测。方法:采用热抽提获得鱼肌肉中小清蛋白的粗提物,通过Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析粗提物中蛋白的存在情况,利用ELISA法对不同鱼类白肉和红肉中的小清蛋白含量进行测定。结果:Tricine-SDS-PAGE和Western blot结果显示粗提物蛋白主要为小清蛋白,分子量在10～14kD并具有一定的种属特异性。在不同的鱼类中存在着不同数量的小清蛋白异构体,它们与抗蛙小清蛋白单克隆抗体PARV-19的反应程度存在差异,表明小清蛋白的含量有所不同,与PARV-19结合的表位也可能存在一定的差异。ELISA结果显示,不同鱼类白肉中小清蛋白的含量为红肉中的4～33倍。结论:本研究建立的方法可用于多种经济鱼类主要过敏原小清蛋白的有效检测。; 蔡秋凤刘光明王瑞芳王锡昌苏文金曹敏杰; 关键词：小清蛋白纯化

猪血激肽原的分离纯化及其对白鲢鱼鱼糜的凝胶作用被引量：5: 2012年; 以猪血为原材料,通过硫酸铵盐析和柱层析等方法,分离纯化出2种半胱氨酸蛋白抑制剂激肽原(kininogen).激肽原Ⅰ的得率为0.7%,纯化倍数为613.7;激肽原Ⅱ的得率为24.1%,纯化倍数为295.7.SDS-PAGE结果表明,激肽原Ⅰ和激肽原Ⅱ的分子质量分别为58 ku和116 ku.激肽原Ⅰ和激肽原Ⅱ对白鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix)鱼浆中肌原纤维蛋白降解都有一定的抑制作用,当激肽原Ⅱ添加量为鱼浆质量的0.03%时,可以使鱼糜凝胶强度提高24%.因此,激肽原可作为添加剂有效提高鱼糜制品的凝胶强度.; 钟婵江韬玲翁武银蔡秋凤翁凌曹敏杰; 关键词：组织蛋白酶猪血白鲢鱼

锯缘青蟹原肌球蛋白的过敏动物模型研究被引量：3: 2011年; 目的建立锯缘青蟹(Scylla serrata)原肌球蛋白(tropomyosin,TM)的食物过敏性小鼠模型,并对其致敏性进行评价。方法锯缘青蟹TM以灌胃方式刺激小鼠使其致敏,并对小鼠粪便组胺、血清IgE以及脾脏细胞IL-4、IL-13、IFN-λ等淋巴因子的水平进行检测。结果 TM组小鼠均出现了不同程度的过敏症状,其血清IgE的含量是阴性对照组(生理盐水)小鼠的2倍;TM组实验小鼠IL-4、IL-13、IFN-λ的水平分别为(17.508±2.189)pg/ml、(3.150±0.434)pg/ml、(15.056±1.974)pg/ml,粪便中组胺含量为6 244.651 nmol/l,与阴性对照组小鼠相比均有显著差异(P<0.05)。结论锯缘青蟹TM以灌胃方式刺激小鼠,TM组小鼠出现了不同程度的过敏症状,其粪便组胺、血清IgE以及脾脏细胞IL-4、IL-13、IFN-λ等淋巴因子的水平与阴性对照组小鼠相比均有显著差异(P<0.05),建立的TM过敏动物模型可望为蟹类过敏的诊断和免疫治疗提供技术依据。; 沈海旺李兵苏文金曹敏杰蔡秋凤刘光明; 关键词：锯缘青蟹原肌球蛋白动物模型 BALB/C小鼠

蓝圆鲹骨骼肌GPI的纯化及其对肌原纤维降解的抑制被引量：1: 2012年; 通过硫酸铵分级沉淀、Q-Sepharose阴离子交换层析和SP-Sepharose阳离子交换层析等方法,从蓝圆鲹骨骼肌中分离纯化得到葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI).SDS-PAGE结果显示,GPI分子质量约为56 ku;Western-blot分析显示,纯化的蛋白质与抗白姑鱼GPI多克隆抗体有很强的阳性反应,表明其为GPI;GPI的最适pH值和最适温度分别为8.0和40℃;GPI能有效抑制蓝圆鲹肌原纤维蛋白在55℃下的自身降解,且随着GPI添加浓度的增加,肌原纤维蛋白的降解逐渐受到抑制,提示GPI可用于鱼糜制品生产以提高产品的凝胶强度.; 张超群钟婵王诚苏文金曹敏杰; 关键词：葡萄糖-6-磷酸异构酶蓝圆鲹纯化降解肌原纤维

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国家自然科学基金(20872049)