广东省医学科学技术研究基金(B2007061)
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 相关作者：王辉巴越洋宁昕杰陆新华更多>>
- 相关机构：中山大学附属第三医院中山市人民医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人胶质细胞源性神经营养因子基因修饰猴雪旺细胞的构建与鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的构建人胶质细胞源性神经营养因子(human glial cell derived neurotrophic factor,hGDNF)基因修饰的猴雪旺细胞稳定细胞系。方法以pUC19-hGDNF为模板,扩增含hGDNF基因序列,将其插入质粒pBABEpuro,构建pBABE-puro-hGDNF重组真核表达载体,经酶切鉴定及DNA测序鉴定重组质粒。从恒河猴提取、培养、纯化雪旺细胞。包装病毒,利用含hGDNF基因的重组逆转录病毒转染雪旺细胞,实时荧光定量PCR、Western blot检测hGDNF mRNA及蛋白表达情况。结果 PCR产物hGDNF基因编码序列大小约596 bp。重组表达载体经双酶切鉴定,含有1条596 bp的特异性条带,其基因测序结果与基因库中hGDNF基因序列片段相同,提示hGDNF基因成功转入逆转录病毒。逆转录病毒转染的雪旺细胞hGDNF mRNA及蛋白表达量显著高于未转染雪旺细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建hGDNF基因修饰的猴雪旺细胞稳定细胞系,能长期稳定高效释放hGDNF,为进一步将其应用于神经损伤修复奠定了基础。
- 巴越洋王辉宁昕杰
- 关键词：重组逆转录病毒雪旺细胞恒河猴
- MicroRNA-21促进大鼠雪旺细胞增殖的实验研究被引量：3
- 2015年
- 目的:探讨神经损伤后microRNA-21(miR-21)促进雪旺细胞增殖的分子机制。方法:通过实时荧光定量PCR检测miR-21的表达。通过脂质体介导将人工合成的miR-21模拟物(mimic)及其阴性对照转染大鼠雪旺细胞,CCK-8法检测转染miR-21的雪旺细胞的增殖。流式细胞术分析miR-21对雪旺细胞细胞周期的影响。使用Western blotting实验分析转化生长因子β诱导蛋白(TGFBI)和cyclin D1的表达水平。结果:miR-21在损伤模型组中的表达分别为假手术组和正常神经组织的(7.87±0.75)和(7.75±0.80)倍(P<0.01)。miR-21 mimic组miR-21的表达分别为对照组和空白组的(2.21±0.14)和(2.29±0.21)倍(P<0.05)。转染48 h后miR-21 mimic组CCK-8实验的A450值较阴性对照组和空白对照组增高(P<0.05)。实验组细胞增殖指数高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01)。同时与对照组相比,转染miR-21后48 h实验组细胞TGFBI明显降低,cyclin D1表达增多(P<0.05)。结论:miR-21可促进雪旺细胞增殖,其机制可能与其下调TGFBI的表达有关。
- 宁昕杰王辉陆新华罗骏成巴越洋
- 关键词：微小RNA-21雪旺细胞周围神经损伤神经再生
