国家自然科学基金(30671463)
- 作品数：23 被引量：171H指数：9
- 相关作者：胡方平蔡学清邱思鑫林娜陈炜更多>>
- 相关机构：福建农林大学福建省农业科学院洛阳理工学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金福建省发展和改革委员会项目福建省教委科研基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 4种茄科作物内生细菌的分离及拮抗菌的筛选被引量：22
- 2007年
- 番茄、茄子、烟草和辣椒健康植株内生细菌的分离及拮抗菌的筛选结果表明,植物的不同种、品种及植物的不同部位,内生细菌数量有所不同.不同作物每克鲜重平均内生细菌数量为1180-11160 cfu;各作物植株不同部位均以果中内生细菌的数量最少,根和茎中的内生菌数量较多.拮抗测定表明,各植物体内均存在对番茄青枯病菌和黄瓜枯萎病菌具有拮抗作用的内生细菌,对番茄青枯病菌具有拮抗作用的植物内生细菌占总数的16.21%,而对黄瓜枯萎病菌具有拮抗作用的内生细菌占总数的28.53%.从拮抗菌株中筛选出3株对多种植物病原真菌有较好拮抗作用的菌株,对黄瓜枯萎病有20.83%-79.17%的防病效果,此3菌株对水稻白叶枯病菌和番茄青枯病菌也有一定拮抗作用,内生性测定表明,3菌株均能进入宿主植物番茄和茄子体内,经初步鉴定3菌株均为芽孢杆菌(Bacillussp.).
- 洪鹏翔邱思鑫陈航赵秀丹胡方平
- 关键词：内生细菌拮抗细菌
- 环境因子对荔枝霜疫霉生长及侵染的影响被引量：9
- 2010年
- 系统的探讨了环境因子对荔枝霜疫霉的生长速度、产孢量、孢子囊萌发及侵染的影响。结果表明,该菌生长及产孢最适的温度为24℃,pH为7.0;菌丝生长和产孢最适的光照时间分别为20h和16h;该菌孢子囊的致死温度为45℃,10min。另外,结果还明确了该菌在不同的温度条件、光照时间、pH和营养成分下其萌发状态和萌发率不同。该菌在pH为7,光照时间为20h的PDA培养基上培养所产生的孢子囊,在24℃条件下萌发率最高。此外,该菌在24～28℃条件下最易侵染荔枝果实,其发病最为严重。试验结果加深了对该病菌的了解,为进一步了解该病的发生危害提供了理论依据。
- 蔡学清吴昌镇林通林娜谢玲平胡方平
- 关键词：荔枝霜疫霉环境因子侵染
- 萝卜软腐病生防菌株Hy11的筛选、鉴定及定殖特性被引量：4
- 2013年
- 为探讨银杏内生细菌对萝卜软腐病的防病作用,通过块根接种和温室盆栽试验筛选对萝卜软腐菌Pectobacterium carotovorum subsp.carotovorum具有高效抑制作用的生防菌株,共获得8株拮抗作用较强的内生细菌,其中菌株Hy11抑菌作用明显。对生防菌株Hy11进行了形态观察、生理生化特性测定、16S rDNA和gyrB基因序列分析,并应用绿色荧光蛋白基因标记菌株Hy11,研究该菌株在萝卜体内的定殖动态。结果显示,该菌株对萝卜软腐病具有较好的防效,对萝卜块根和幼苗的防治效果分别为77.9%和66.7%;对萝卜幼苗的促生率达113.28%。经鉴定,菌株Hy11为解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens。标记菌株Hy11-gfp在喷雾接种银杏叶片后0～3 d种群数量呈急剧下降趋势,10 d后保持相对稳定;其在萝卜的根、茎和叶中均能够定殖,在根中的定殖数量最高可达1.2×104CFU/g。
- 杨瑞先宋美仙邱思鑫胡方平
- 关键词：内生细菌生物防治定殖
- 基于锁式探针的番茄溃疡病菌实时荧光PCR快速检测被引量：10
- 2014年
- 【目的】从口岸进境番茄种子中检测番茄溃疡病菌(Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis,CMM),一直以来都受检测周期的限制,快速、特异地从种子中检测该病原细菌需要新的方法。研究在锁式探针扩增方式上,选择连接酶依赖的PCR扩增方式,并结合实时荧光PCR技术,旨在建立番茄溃疡病菌基于锁式探针技术的实时荧光PCR快速检测方法,为口岸番茄种子快速检疫提供技术支持。【方法】根据番茄溃疡病菌的一段特异基因Pat-1序列,设计锁式探针的T1和T2臂,使之与CMM的特异性片段碱基序列互补,再按照锁式探针的设计原则设计锁式探针和扩增引物以及荧光探针。试验时,先将锁式探针与CMM以及参照菌株的DNA模板在DNA连接酶作用下分别进行环化连接,再用核酸外切酶Ⅰ和核酸外切酶Ⅲ消化未环化的线性锁式探针,最后以环化的锁式探针为模板,在扩增引物的作用下进行实时荧光PCR试验。建立CMM基于锁式探针技术的实时荧光PCR检测方法,分别比较该方法的特异性和灵敏度与常规PCR方法的差异,并用该方法对收集的来自日本、韩国和中国台湾的番茄种子以及国内采集的共45份样品进行检测。【结果】基于锁式探针技术的实时荧光PCR检测方法能够从供试的菌株中特异性地检出CMM,在供试的10种菌株中,只有靶标细菌能被特异性地检测到阳性,空白对照和其他参试菌株均没有荧光信号的增加,检测为阴性。比较该检测方法与常规PCR方法,其特异性和常规PCR方法一致。该检测方法检测灵敏度高,DNA最低浓度检测为50 fg·μL-1,而常规PCR方法检测DNA最低浓度为5 pg·μL-1,灵敏度高于常规PCR两个数量级。对收集的样品进行检测,结果显示,45份样品中共有5份样品CMM检测结果为阳性,分别是日本的番茄种子样品2份(编号Jap1214、Jap1102),永泰采集的样品2份(编号为Yongt1001、Yongt1002)和闽清采集的样品
- 王念武王婷沈建国胡方平
- 关键词：锁式探针番茄种子
- 超分支滚环扩增技术快速检测番茄溃疡病菌被引量：4
- 2013年
- 根据番茄溃疡病菌(Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis,cmm)的一段特异致病基因pat-1序列,按照锁式探针的设计原理设计探针和扩增引物,优化系列反应条件,建立了特异性的cmm超分支滚环扩增技术。实验结果表明该检测技术能够从供试的10种菌中特异性地检出番茄溃疡病菌,检测灵敏度高,DNA最低检测浓度为500 fg/μL。
- 王念武王婷沈建国胡方平
- 关键词：番茄溃疡病菌锁式探针
- 内生枯草芽孢杆菌BS-2防治荔枝霜疫病及其生化机理被引量：9
- 2010年
- 研究内生枯草芽孢杆菌BS-2(Bacillus subtilis)菌株对荔枝采后果实霜疫病的防治效果,及其对体内活性氧代谢(SOD、POD、CAT、MDA、超氧阴离子自由基的产生速率)和病程相关蛋白(β-1,3葡聚糖酶活性、几丁质酶活性)等的影响。结果表明,BS-2菌株对荔枝霜疫病具有较好的防治效果,接种处理后6d,其防治效果为37.83%;经内生细菌处理的荔枝果皮的β-1,3葡聚糖酶活性、几丁质酶活性、CAT和SOD酶活性均比病菌处理的高,而POD、PPO酶活性以及膜透性、MDA含量与超氧阴离子自由基的产生速率却比病菌处理的低。当接种后6d,经内生细菌处理的荔枝果皮的β-1,3葡聚糖酶活性、几丁质酶活性和SOD酶活性分别比病菌处理的高70.73%、30.76%和297.43%;而POD、PPO酶活性和超氧阴离子自由基的产生速率却分别比病菌处理的低15.11%、4.96%和28.95%。
- 蔡学清胡方平陈炜林娜林建强
- 关键词：防病机制
- 内生解淀粉芽孢杆菌TB2液体发酵条件的研究被引量：21
- 2010年
- 采用单因素试验和正交试验对具有广谱拮抗作用的内生解淀粉芽孢杆菌TB2菌株的摇瓶发酵培养基和发酵条件进行优化。结果表明,最佳培养基组份为:玉米淀粉1.0%、豆粉1.0%、(NH4)2SO40.5%、MgSO4·7H2O0.1%、FeSO4·7H2O0.03%、K2HPO4·3H2O0.02%、KH2PO40.01%;培养条件为:初始pH值为7.5,温度35℃,接种量3%,装液量50mL/250mL三角瓶,摇床转速200r/min,发酵周期22～26h。优化条件下发酵水平活菌数达到8.52×1010cfu/mL。
- 郭龙涛邱思鑫蔡学清胡方平
- 关键词：发酵单因素试验正交试验
- 福建荔枝酸腐菌的生物学特性研究被引量：12
- 2009年
- 对福建省分离的荔枝酸腐病菌的形态学特征、生长速度、产孢、分生孢子萌发及侵染的影响因子进行研究。结果表明:福建荔枝酸腐病的病原菌为白地霉(Geotrichum candidum);该菌最适生长温度为24～28℃,pH值为8～9,光照时间为12～20h,最适生长与产孢培养基为PDA,分生孢子致死温度为65℃,10min;该菌分生孢子的萌发率与pH值、培养基、光照时间、温度及营养成分等有关,其中该菌在24～32℃,光照时间为16～20h,培养15d时所产生的分生孢子萌发率最高;该菌不同培养时间所产生的分生孢子及不同温度条件对其侵染荔枝的能力也不同,培养10d所产生的分生孢子侵染力最强,侵染最适温度为28～32℃。该菌除了寄生荔枝外,人工接种还能侵染胡萝卜、番茄、水蜜桃、龙眼、葡萄、茄子和黄瓜。试验结果为进一步了解该病的发生危害提供理论依据。
- 蔡学清林通谢玲平吴昌镇林娜胡方平
- 关键词：荔枝生物学特性
- 内生细菌在荔枝体内的定殖及其防病保鲜功能被引量：18
- 2011年
- 用含有GFP基因标记的内生细菌菌株BS-2-gfp和TB2-gfp,采用喷雾接种的方法,研究其在荔枝叶片、花、幼果及成熟果实果皮内的定殖动态及其与防病保鲜之间的关系.结果表明:内生细菌BS-2-gfp和TB2-gfp能在荔枝叶片、花、幼果及采后果皮上定殖,能在各组织内繁殖并可在花和幼果间传导.内生细菌在荔枝叶片上的定殖因季节和荔枝生长期的不同而异,与秋季相比,春季定殖期限长,定殖量大.内生细菌在荔枝不同部位的定殖时间和定殖量也不同,在叶片上接种37d后还可分离回收到接种的2种目标细菌,在花上接种10d后就回收不到BS-2-gfp,而成熟荔枝果皮上2种菌的定殖量最大.防病试验表明,当荔枝霜疫病的病情指数急剧上升时,TB2-gfp在荔枝果皮的定殖量达到最大,为1.90×106CFU.g-1FM;保鲜试验发现,TB2-gfp菌株的保鲜效果优于BS-2-gfp,菌株在荔枝果皮内的定殖量也高于菌株BS-2-gfp,表明供试内生细菌在荔枝果皮的定殖量与其防病及保鲜效果呈正相关.
- 蔡学清陈炜林娜林通胡方平
- 关键词：荔枝内生细菌定殖防病保鲜
- 内生解淀粉芽孢杆菌TB2内切β-1，4-葡聚糖酶基因的克隆和原核表达分析被引量：7
- 2008年
- 以内生解淀粉芽孢杆菌TB2菌株基因组为模板,克隆了该菌的β-1,4-内切葡聚糖酶基因的ORF。测序结果表明该ORF全长1 500 bp,编码499个氨基酸,分子量为55.07 ku,等电点为7.83。Blast同源性分析结果表明,该序列与GenBank登录的1株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis M28332)纤维素酶核苷酸序列的同源性最高(98%),其氨基酸同源性也达98%,已被GenBank收录(Accession number)。用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切目的片段和表达载体pET-29a(+)后相连接,构建重组表达载体pET-glu,并导入BL21细菌中表达。酶学特性表明:SDS-PAGE电泳在59 ku左右有融合蛋白带,该酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH为6.4,为中性纤维素酶。实验结果为进一步研究内生解淀粉芽孢杆菌TB2纤维素酶的功能和应用打下了基础。
- 范晓静邱思鑫胡方平
- 关键词：克隆大肠杆菌表达
