国家自然科学基金(30671495)
- 作品数：12 被引量：10H指数：2
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- 相关机构：湖北省农业科学院西北农林科技大学运城学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金农业部全国畜牧总站动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室开放课题湖北省国际科技合作项目更多>>
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- 茎部长度为21、27、29bp的shRNA表达载体构建
- 2010年
- 利用shRNA(Small hairpin RNA)载体调控基因表达已经成为研究基因功能的有力工具。针对增强型绿色荧光蛋白标记基因(Enhanced green fluorescent protein,egfp),分别设计茎部长度为21bp、27bp、29bp的干扰片段,体外合成的单链shRNA片段退火后连入带有U6启动子的真核表达载体psiSTRIKE中,酶切及测序结果证明设计的干扰片段已经成功克隆进入表达载体,为进一步在小鼠细胞以及个体水平上综合评价不同茎部长度shRNA的干扰效应奠定了基础。
- 李莉刘西梅郑新民刘中华
- 关键词：小发夹RNA基因沉默RNA干扰绿色荧光蛋白基因
- 两种方法研究不同茎部长度串联shRNA表达载体对EGFP基因的干扰效应
- 2010年
- 目的:旨在观察不同茎部长度串联shRNA表达载体对EGFP基因的干扰作用。方法:采用体外培养的Vero细胞,选用不同茎部长度串联shRNA表达载体+EGFP表达载体+脂质体转染的方法,将构建好的干扰载体转染Vero细胞,然后使用实时荧光定量RT-PCR对其沉默效应进行定量分析。在小鼠腿部肌肉注射干扰质粒,实时荧光定量RT-PCR对其沉默效应进行定量分析。结果:转染Vero细胞时,pGenesilR21、pGenesilR27和pGenesilR29荧光表达量仅为对照质粒pEGFP-C1的4.3%、3.0%和6.9%;小鼠腿部肌肉注射干扰质粒时,pGenesilR21、pGenesilR27和pGenesilR29荧光表达量仅为对照质粒pEGFP-C1的2.5%、1.3%和5.1%。结论:在细胞和个体水平,不同茎部串联干扰载体对目的基因的抑制效应均很明显(达到90%以上),比单一位点产生的沉默效应要强许多,不同茎部长度干扰效应彼此间差异不显著。
- 肖红卫刘中华刘西梅郑新民乔宪凤李莉
- 关键词：SHRNA表达载体EGFP基因沉默效应干扰质粒PEGFP-C1脂质体转染
- α-1,3-半乳糖苷转移酶基因沉默小鼠的建立初探
- 2008年
- 目的获得转α-1,3-半乳糖苷转移酶沉默基因的小鼠。方法将α-1,3-半乳糖苷转移酶沉默基因用显微注射的方法导入小鼠受精卵。结果移植注射胚853枚,其中移植312枚1-细胞胚于11只受体鼠,6只受孕(54.5%)均中途流产(解剖发现子宫角明显增粗、充血、残骸);移植注射胚541枚2-细胞胚于23只受体鼠,18只受孕(78.3%),11只受孕均中途流产了,3只足日剖宫产获14只死胎,平均体重2.14g,未检测到阳性;4只12日龄左右剖宫获21只残骸有7只阳性。结论通过显微注射的方法,α-1,3-半乳糖苷转移酶沉默基因可以整合,但要得到整合成活个体还有待进一步研究。
- 李莉刘西梅谷习文肖红卫王亚刚田永祥郑新民
- 关键词：基因沉默小鼠小干扰RNA转基因
- 绿色荧光蛋白基因转基因小鼠传代中的生物学观察
- 引言随着转基因技术的发展,GFP报告基因已成为转基因动物上常用的的报告基因之一。目前对于转基因动物传代前后基因表达的变化,仅见个别基因的研究,常规育种所用的模型(数学方程式来表达,数学期望、
- 肖红卫郑新民刘中华孙健
- 关键词：绿色荧光蛋白基因转基因小鼠传代生物学观察
- 文献传递
- 细胞和个体水平沉默效应的差异
- 2011年
- [目的]研究3种不同长度的四联shRNA载体及其在细胞与个体水平的沉默效应差异。[方法]以EGFP为靶标基因,用hU6、mU6、h7SK、hH1 4种启动子,构建21、27、29 bp的3种四联沉默载体,通过转染Vero细胞和注射小鼠肌肉,以实时荧光定量PCR的方法检测绿色荧光蛋白基因的mRNA水平。[结果]3种载体都有很强的沉默效应,其在细胞水平上的沉默效应远高于个体水平上,可以通过未成年鼠的肌肉注射进行转基因。[结论]多位点串联表达shRNA是一种可以达到较好干扰效果的方法,肌肉注射将是一个简便的转基因途径。
- 郑新民刘中华程妮肖红卫乔宪凤毕延震
- 关键词：细胞沉默
- 不同长度茎部shRNA表达载体构建与鉴定
- 2010年
- 本研究针对同一目的基因设计构建不同茎部长度的shRNA表达载体,并对其在细胞及胚胎水平的干扰效应做一比较。以绿色荧光蛋白基因为沉默效应的靶基因,设计茎部长度分别为21bp、27bp、29bp的干扰片段,退火后连入带有H6启动子的真核表达载体psiSTRIKE中(分别命名为EGFP-21siRNA、EGFP-27siRNA和EGFP-29siRNA),将构建成功的载体以脂质体法转染小鼠胚胎成纤维细胞,利用荧光定量PCR对其荧光表达进行精确定量。不同茎部长度的shRNA载体均使绿色荧光蛋白基因表达降低,茎部为29bp时比21bp、27bp表现出更明显的沉默效应。细胞水平沉默效应的初步验证,为筛选适合小鼠个体水平的最佳发夹结构奠定了基础。
- 刘中华乔宪凤肖红卫刘西梅王华岩郑新民
- 关键词：基因沉默SHRNA绿色荧光蛋白小鼠荧光定量PCR
- 动物基因修饰的发展动态
- 2010年
- 基因修饰是改变动物生物性状的重要手段之一,其相关的方法和技术已逐步应用于医学、动物遗传育种、基因功能研究等方面,但在家畜育种过程中,基因修饰不应带标记基因,这就需要动物基因修饰技术得到进一步完善。因此,从转基因动物、体细胞克隆、转基因体细胞克隆、基因打靶及标记基因删除等方面,阐述了动物基因修饰的发展现状及发展趋势,为现代动物育种学的发展提供参考。
- 郑新民熊忠良汪宏才程妮李莉乔宪凤肖红卫刘西梅
- 关键词：动物基因修饰
- 转基因技术在动物遗传改良上的应用进展被引量：6
- 2009年
- 简要介绍了几种比较常用的转基因方法,包括显微注射法、脂质体介导法、电转染法、胚胎干细胞法、病毒载体法、精子载体法、卵巢直接注射法。传统的转基因方法与基因打靶、体细胞核移植、RNA干扰以及线粒体转移技术相结合,在基因功能研究和疾病治疗中发挥越来越重要的作用。特别是近年来在植物上出现的外源基因清除技术,为我们在动物上彻底去除外源基因的影响提供了新思路。
- 刘中华王华岩乔宪凤郑新民
- 关键词：转基因技术动物外源基因
- 基因沉默技术的研究动态及在畜牧业中的应用
- 2008年
- 从RNA干扰现象的发现、筛选及基因沉默的发生开始,概述了细胞水平基因沉默的效应,并由细胞水平上过渡到模型动物试验阶段,在此基础上,着手家畜基因沉默的研究,最后,涉及到基因沉默技术在畜牧业上的应用前景。
- 郑新民刘中华周木清肖红卫李莉乔宪凤王亚刚田永祥
- 关键词：基因沉默RNA干扰畜牧
- 不同剂量PMSG对未性成熟小鼠卵巢发育的影响被引量：3
- 2009年
- 探讨了不同剂量PMSG对20-21日龄未性成熟小鼠卵巢发育的影响，结果表明，PMSG处理后小鼠卵巢出现增大现象，其中20IU、15IU、10IU、6IU组处理的小鼠卵巢增重最明显，且组问差异不显著；卵巢内生长卵泡数量差异不显著，随激素作用量的上升，有腔卵泡数和有腔卵泡所占比例而增大。
- 孙健肖红卫郑新民吴曙限刘中华李莉刘西梅刘西梅
- 关键词：小鼠PMSG卵巢卵泡
