南京市医学科技发展项目(ZKX0412)
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
- 相关作者：徐运杨振军刘卓陈蕾朱文静更多>>
- 相关机构：南京大学医学院附属鼓楼医院更多>>
- 发文基金：南京市医学科技发展项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 兔大脑中动脉局灶性脑缺血模型制作和正电子发射断层显像观察被引量：2
- 2007年
- 目的探讨线栓法制作兔大脑中动脉局灶性脑缺血模型的最适线栓头端直径，并采用正电子发射断层显像技术（PET）检查缺血脑组织葡萄糖代谢水平的变化。方法将兔龄5～6个月的健康雄性新西兰白兔27只随机分为假手术组和手术组，其中假手术组3只，手术组24只。根据线栓头端直径不同再将手术组随机分为0．25～0．29（A组）、0．30～0．34（B组）、0．35～0．39（C组）及0．40～0．45mm组（D组），每组6只兔。所有兔在手术后30min、3及6h行脑PET检查，6h行神经功能评分。检查结束后，解剖观察并取脑组织做氯化三苯基四氮唑（TFC）染色。结果①有1／3枕动脉起自颈内动脉。②手术组24只兔中，有15只模型成功，线栓进人大脑中动脉，A、B、C及D组插线成功的比例分别为3／6、5／6、5／6及2／6，B、C组与D组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。③缺血30min，15只成功模型的PET结果即显示双侧基底核、颞叶、顶叶皮质葡萄糖代谢率的比值（右侧／左侧）下降，且随缺血时间延长下降越明显；似手术组无下降。与假手术组比较，A、B、C、D组比值下降的差异均有统计学意义（P〈0．05，P〈0．01，P〈0．01，P〈0．05）。④A组6h神经功能评分〈2级，TFC染色未发现明显异常：B、C及D组6h神经功能评分≥2级，TTC染色可见明显的梗死病灶。结论制作兔大脑中动脉局灶性缺血模型最佳线栓头径为0．30～0．40mm。PET检查对早期血流量减少很敏感，可作为研究脑缺血的有效评估手段。
- 王晓云朱文斌陈雪梅陈蕾徐运
- 关键词：正电子发射断层显像术
- 骨髓间充质干细胞体外转化为神经细胞的环境特征
- 2007年
- 目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养条件,体外定向诱导传代骨髓间充质干细胞向神经干细胞转化并进一步向神经细胞分化的环境,并对分化的神经元进行鉴定。方法:实验于2005-08/2007-03在南京大学医学院附属鼓楼医院科研部完成。①选用健康SD大鼠,分离纯化并培养大鼠骨髓间充质干细胞。②应用流式细胞仪检测细胞表面抗原的表达,通过免疫表型鉴定骨髓间充质干细胞.③贴壁培养诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化,分为对照组和诱导剂组,对照组中不加诱导剂,诱导剂组分两步诱导:首先加入含终浓度均为10μg/L的表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子诱导分化剂,连续培养12 d:然后应用20μg/L的脑源性神经营养因子和1μmol/L的全反式维甲酸继续诱导6 d,分别收集诱导1 d,6 d,12 d,18 d的细胞进行细胞免疫荧光鉴定。结果:①传代第3代骨髓间充质干细胞为梭形成纤维样细胞,均一稳定的表达与间充质干细胞相关的表面抗原标记物CD29,CD44,CD90、阳性率分别为98.88%,96.90%.95.86%,但极少表达造血细胞标志CD34。②经碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子诱导12 d后诱导剂组巢蛋白阳性表达率为(89.24±2.12)%,而对照组细胞未表达巢蛋白。③经脑源性伸经营养因子和全反式维甲酸联合诱导6 d后,诱导剂组均可见微管相关蛋白2阳性细胞,大部分细胞转变为神经元样细胞形态;对照组微管相关蛋白2阴性.细胞形态仍为梭形成纤维样细胞。结论:实验采用并改良了全骨髓贴壁法,操作简单快速.细胞活性好,是一种较为理想的分离和纯化骨髓间充质干细胞的方法.骨髓间充质干细胞可分化成神经干细胞,进一步诱导分化为神经细胞。
- 陈蕾刘卓杨振军徐运
- 关键词：骨髓细胞细胞培养干细胞
- 骨髓间充质干细胞移植入脑缺血大鼠侧脑室后的迁移及分化:免疫荧光标记被引量：7
- 2007年
- 目的:骨髓间充质干细胞可以分化成神经细胞替代受损组织,并可分泌生长因子和营养因子来促进其体内细胞的存活和分化。实验将体外扩增和Hoechst33342标记的骨髓间充质干细胞移植入缺血性大鼠侧脑室内,观察干细胞在大鼠脑内的生存、迁移、分化情况及对神经功能恢复的影响。方法:实验于2004-12/2007-06在南京大学医学院附属鼓楼医院科研部完成。①取体质量120～160g的SD大鼠用于制备移植细胞;另取80只体质量250～300g的SD大鼠用于制作大脑中动脉闭塞模型。实验方法符合动物伦理学要求。②应用直接贴壁法分离纯化及扩增大鼠骨髓间充质干细胞,荧光染料Hoechst33342标记。③将造模成功的75只大脑中动脉闭塞大鼠按随机数字表法分为3组:模型对照组15只;磷酸缓冲液组30只;骨髓间充质干细胞移植组30只,将骨髓间充质干细胞立体定向移植到大鼠缺血侧脑室中。④术后1,3,6,12,24d测定大鼠神经功能损害评分,荧光显微镜下观察Hoechst33342标记的骨髓间充质干细胞在脑内的生存和迁移情况,采用免疫荧光法检测胶质原纤维酸性蛋白和微管相关蛋白2的表达。结果:①细胞移植后6d,12d骨髓间充质干细胞移植组大鼠的神经功能评分均显著低于磷酸缓冲液组(P<0.05)。②移植的骨髓间充质干细胞可在大鼠脑组织中存活,并向缺血区域迁移。③移植第24天Hoechst33342/微管相关蛋白2、Hoechst33342/胶质原纤维酸性蛋白双阳性细胞占Hoechst33342阳性细胞的百分率为(10.45±1.35)%,(8.73±1.38)%。结论:骨髓间充质干细胞可以在动脉闭塞局灶性脑缺血模型大鼠脑中存活,并向缺血区域附近迁移,在一定条件下可分化为神经元和星形胶质细胞,同时能促进局灶性脑缺血大鼠的神经功能恢复。
- 朱文静刘卓杨振军徐运
- 关键词：干细胞骨髓细胞细胞移植脑缺血
