国家自然科学基金(30940054)
- 作品数：13 被引量：59H指数：4
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- 相关机构：贵州大学贵州省动物疫病研究室贵州省畜牧兽医研究所更多>>
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- 山羊痘病毒P32蛋白在毕赤酵母中的表达与鉴定
- 2011年
- 为了获得具有生物安全性高的体外表达蛋白,以含山羊痘病毒贵州LD株P32基因的质粒pMD18-T-P32/LD为模板,应用PCR方法扩增P32基因不同片段,将基因片段克隆至毕赤酵母菌表达载体pPICZαA中,构建了重组表达载体,转化感受态毕赤酵母菌X-33中并诱导表达。SDS-PAGE分析结果显示,有分子量约为64 ku的融合蛋白获得表达,与预期结果相符;Western-blot证实该表达蛋白具有免疫学活性。
- 程振涛岳筠周碧君许乐仁王开功文明李永明朱时杰
- 关键词：山羊痘病毒P32基因毕赤酵母
- 山羊痘病毒和羊口疮病毒双重PCR检测方法的建立与初步应用被引量：20
- 2011年
- 根据GenBank发表的山羊痘病毒(goatpox virus,GPV)和羊口疮病毒(orf virus,ORFV)基因序列,分别合成针对GPVITR和ORFVH2L基因片段的2对引物,以GPV和ORFV的核酸混合物作为模板,经优化反应条件,成功建立了快速鉴别检测GPV、ORFV的双重PCR方法。特异性试验结果显示,该方法对GPV与ORFV核酸的扩增能获得289和507 bp的特异性目的片段,而对FMDV、FPV、BTV、健康山羊皮肤的核酸扩增均为阴性;敏感性试验结果显示,该方法对GPV核酸的最小检出量为4 pg,对ORFV核酸为0.4 pg;对临床采集的12份病料进行双重PCR扩增,GPV检出率为25%(3/12),ORFV的检出率为75%(9/12)。结果表明,建立的双重PCR方法具有特异性强、敏感性高、快速简便等特点,可用于GPV或/和ORFV临床感染病例的联合检测与鉴别诊断。
- 向智龙程振涛卓建华周碧君欧德渊鲜思美刘芳冉光鑫
- 关键词：山羊痘病毒羊口疮病毒双重PCR
- 山羊痘口服疫苗免疫后肠道主要细菌的动态变化被引量：1
- 2012年
- 为含山羊痘病毒P32基因真核表达质粒的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌黏膜疫苗(口服疫苗)的临床推广应用提供科学依据,采集不同时间山羊肠道内容物,提取细菌总DNA,以肠道最常见的大肠杆菌和葡萄球菌为检测对象,应用Real-time PCR方法测定细菌含量的动态变化。结果表明:口服疫苗组山羊的肠道大肠杆菌和葡萄球菌含量,与空白对照组山羊相比,免疫初期(7d左右)出现显著或极显著增加外,其余时间段均无明显差异,表明口服疫苗免疫后未造成山羊肠道微生态紊乱。
- 陈俊程振涛周碧君王开功文明
- 关键词：肠道葡萄球菌
- 山羊痘病毒TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立与应用
- 鉴于传统检测方法的诸多缺点,为了深入研究山羊痘病毒(GPV),利用DNAStar分析了GenBank中所有7株羊痘病毒全基因序列,选取位于山羊痘病毒(AY077835)基因组gp064区域约64bp的基因片段,设计并合成...
- 程振涛岳筠李永明许乐仁王开功周碧君文明
- 关键词：山羊痘病毒TAQMAN-MGB探针荧光PCR
- 文献传递
- 稳定携带山羊痘病毒DNA疫苗减毒沙门氏菌的构建被引量：2
- 2011年
- 为构建质粒稳定型山羊痘DNA疫苗,采用PCR与限制性酶切技术去除真核表达质粒pcDNA3.1(+)的氨苄抗性bla基因启动子序列,构建改良质粒pmcDNA3.1(+),然后插入山羊痘病毒P32基因,获得重组表达质粒pmcDNA3.1-P32,通过TSS法将其转化至减毒沙门氏菌中,构建成功携带山羊痘DNA疫苗的重组减毒沙门氏菌SL7207(pmcDNA3.1-P32);体内和体外试验结果表明,重组质粒pmcDNA3.1-P32在沙门氏菌中的稳定性显著高于pcDNA3.1-P32。这为下一步减毒沙门氏菌介导的山羊痘DNA免疫研究奠定了基础。
- 尹传宝程振涛朱琦彭彩丽鲜思美周碧君文明
- 关键词：减毒沙门氏菌山羊痘疫苗
- 大肠杆菌与葡萄球菌实时定量PCR检测方法的建立被引量：4
- 2010年
- 为探索减毒胞内侵袭菌介导的粘膜免疫对宿主动物胃肠道微生态的影响,以大肠杆菌与葡萄球菌16S rRNA基因拷贝数为研究对象,采用实时定量技术(Real-time PCR)对2种细菌进行定量检测,建立大肠杆菌与葡萄球菌数量快速检测方法。结果表明:扩增出的2种细菌核苷酸序列与GenBank上已知目的菌种同源性为100%,构建的2条标准曲线相关系数均接近1,误差较小,熔解曲线显示均成单一峰值。成功构建了大肠杆菌与葡萄球菌实时定量PCR标准曲线,可为进一步研究减毒沙门氏菌介导的粘膜免疫奠定基础。
- 尹传宝陈俊朱琦毛君婷程振涛周碧君文明
- 关键词：粘膜免疫大肠杆菌葡萄球菌REAL-TIMEPCR
- 羊痘病毒P32基因生物信息学分析被引量：4
- 2011年
- 为获得羊痘病毒P32基因生物信息学资料,扩增山羊痘病毒贵州LD株的P32基因,并进行克隆、测序与序列分析;以P32基因的推导氨基酸序列为材料,应用计算机技术和生物学软件预测P32蛋白的跨膜结构、亲水性、抗原指数、柔韧性、表面可及性和二级结构,综合评价P32蛋白的抗原表位。结果表明,羊痘病毒P32基因核苷酸和氨基酸同源性分别达到97.8%和95.6%以上;P32蛋白为含有一个跨膜结构的膜蛋白;肽段227-251区域的各种预测指数均高,推断该区域为一个潜在的优势抗原表位。数据分析显示,P32蛋白具有较强的抗原性,该结果将为GPV P32基因工程疫苗的研究和体外表达产物的应用提供依据。
- 程振涛岳筠周碧君许乐仁王开功文明李永明
- 关键词：羊痘病毒P32基因生物信息学
- 山羊痘病毒诱导BHK-21细胞凋亡的检测被引量：2
- 2011年
- 为验证山羊痘病毒诱导BHK-21细胞出现凋亡现象的存在,分别采用HE染色、凋亡试剂盒检测、流式细胞仪检测和DNA Ladder检测,对山羊痘病毒感染的BHK-21细胞培养物进行细胞凋亡检测。不同方法检测结果均显示,山羊痘病毒感染BHK-21细胞组相同时间细胞凋亡数明显高于对照组。表明山羊痘病毒可诱导BHK-21细胞发生凋亡。
- 程振涛岳筠周碧君王开功文明李永明许乐仁朱时杰
- 关键词：山羊痘病毒BHK-21细胞细胞凋亡
- 羊口疮病毒PCR检测方法的建立与应用被引量：18
- 2010年
- 根据羊口疮病毒(ORFV)H2L基因序列,设计合成1对引物,通过确定最佳的PCR反应条件,建立了检测羊口疮病毒DNA的PCR检测方法。结果显示,用这1对引物均能扩增出羊口疮病毒507 bp的特异性片段,同时检测口蹄疫病毒和山羊痘病毒,结果均为阴性,最小检出量为5 pg。该方法具有良好的特异性和敏感性,可对临床组织病料中的ORFV进行快速检测。
- 向智龙程振涛卓建华欧德渊文明周碧君尹传宝吴飞冯会利刘芳冉光鑫鲜思美
- 关键词：羊口疮病毒PCR特异性敏感性
- 山羊痘的分子生物学诊断被引量：1
- 2011年
- 为山羊痘的防控提供科学依据,对2010年2月贵州省龙里县醒狮镇某养羊户饲养的疑似山羊痘发病羊进行了流行病学调查、临床病例剖检病变观察、山羊痘ELISA血清抗体检测和山羊痘病原核酸PCR扩增及序列分析。结果表明,该病例具有明显的山羊痘流行特点、临床症状;未免疫羊群山羊痘血清抗体ELISA检测结果阳性率达40%;山羊痘病毒核酸PCR检测结果阳性;扩增的ITR基因序列与国内外山羊痘病毒株同源性达100%,与绵羊痘病毒株同源性达98.3%。表明,该病例为羊痘病毒属的山羊痘病毒感染所致。
- 郭光容潘淑惠肖明才罗敏骆用芬胡明祥江楠程振涛周碧君
- 关键词：山羊痘分子生物学
