辽宁省科技厅基金(2007408001-6)
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
- 相关作者：巴彩凤宋慧娟张轶博武洁杜鹏更多>>
- 相关机构：辽宁医学院辽宁医学院附属第一医院滨州医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 犬黑皮质素受体4真核表达载体的构建及表达被引量：3
- 2008年
- [目的]构建带myc和His标签的犬黑皮质素受体4真核表达载体并在MDCK细胞中进行表达。[方法]以犬MC4R基因组DNA为模板PCR扩增目的基因编码区,将扩增产物进行T-A克隆;酶切、测序鉴定成功后将目的基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A。重组体pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R经酶切和测序鉴定;采用FuGENE HD介导转染技术将重组体导入MDCK细胞;转染后继续培养72 h,提取细胞内总RNA,RT-PCR鉴定目的基因的表达;提取细胞总蛋白,Western Blot检测蛋白表达。[结果]构建带标签的pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R重组真核表达载体,测序结果与GenBank公布的序列相似性为99%。RT-PCR和Western Blot检测到目的基因表达。[结论]成功构建犬真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A-MC4R,重组体能在MDCK细胞中表达。
- 王光川巴彩凤苏荣健张轶博赵微宋慧娟武洁
- 关键词：真核表达载体MDCK细胞
- 比格犬黑皮质素受体3基因A167T对体质量性状的影响被引量：5
- 2010年
- 背景:MC3R基因突变是引起体质量增加的重要因素之一。目的:分析比格犬MC3R基因突变与体质量性状的关系。方法:抽取112只比格犬血液,记录体质量数据,然后提取DNA;采用AS-PCR技术对MC3R基因A167T位点进行分析,并克隆测序。观察比格犬MC3R基因T167A的基因型分布及其与体质量的关系。结果与结论:167位点表现为A、T2个等位基因和AA、AT及TT3种基因型;T167A碱基置换对犬体质量有显著影响(P<0.05)。表明MC3R基因突变可致犬体质量增加,可作为犬体质量标记的候选基因。
- 杜鹏巴彩凤周艳彬张轶博宋慧娟
- 关键词：体质量AS-PCR比格犬基因型
- 高渗盐水联合牛磺酸预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用被引量：2
- 2011年
- 目的探讨高渗盐水联合牛磺酸预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其作用机制。方法将30只SD大鼠随机等分为5组:假手术组(A组)、缺血再灌注组(B组)、高渗盐水预处理组(C组)、牛磺酸预处理组(D组)和高渗盐水联合牛磺酸预处理组(E组)。参照Pringle法建立大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型。再灌注6h后检测血清谷丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平,并在光镜下观察肝组织病理学的改变和肝脏的原位细胞凋亡的变化。结果缺血再灌注6h后血清ALT、AST、LDH和MDA水平比较,B、C、D和E组明显高于A组(P<0.01),C、D和E组明显低于B组(P<0.01),C组和D组明显高于E组(P<0.05);血清SOD水平比较,A、C、D和E组明显高于B组(P<0.01),E组明显高于C组和D组(P<0.01);肝组织病理学显示B组损害最重,C、D组次之,E组最轻。TUNEL法检测细胞凋亡显示大鼠肝细胞凋亡率B、C、D和E组明显高于A组(P<0.01),C、D和E组明显低于B组(P<0.01)。结论高渗盐水和牛磺酸联合应用可以改善大鼠肝脏缺血再灌注损伤。
- 王玉彬巴彩凤
- 关键词：牛磺酸再灌注损伤肝脏
- 犬黑皮质素受体-4突变体D298N真核表达载体的构建及其在MDCK细胞中的表达
- 2022年
- [目的]引进犬MC4R突变点,构建突变体D298N表达载体并在MDCK细胞中获得表达。[方法]设计带突变点D298N引物,以犬MC4R基因组DNA为模板,采用普通PCR和Overlap-PCR扩增编码区,将产物克隆、酶切、测序鉴定。将测序正确的基因连接到pcDNA3.1-myc-His/A载体上,将重组体pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R-D298N酶切、鉴定,将测序正确的重组体转染到MDCK细胞中,继续培养3 d,提取细胞总RNA,并采用RT-PCR方法检测基因表达。提取细胞总蛋白,Western Blot鉴定蛋白表达。[结果]构建带D298N突变点的真核表达载体,提取质粒后有2处碱基不同,分别是777位碱基T→C,892位碱基G→A(引入的突变位点)。转染到MDCK后,RT-PCR和Western Blot均检测到重组体在基因水平和蛋白水平的表达。[结论]成功构建犬的重组体真核表达载体并在MDCK细胞中表达。
- 宋立先刘春红王占青高蓉徐学振
- 关键词：真核表达载体定点诱变MDCK细胞
- 比格犬黑皮质素受体3基因291位点突变与体重性状相关性的分析
- 2010年
- 分析比格犬MC3R基因突变与体重性状的关系。抽取112只比格犬血液,记录体重数据,然后提取DNA;采用PCR-RFLP技术对MC3R基因G291A位点进行分析,并克隆测序。测序结果表明,291位点表现为G、A二个等位基因和GG、GA及AA三种基因型;统计分析结果显示AA型犬与GG型犬体重比较差异显著(P<0.05)。犬MC3R基因突变可致体重增加,可作为犬体重标记的候选基因。
- 宁素荣杜鹏巴彩凤
- 关键词：体重基因突变
- 犬MC4R突变体D90N真核表达载体的构建及表达被引量：2
- 2010年
- [目的]构建犬黑皮质素受体4(MC4R)突变体D90N真核表达载体,并在MDCK细胞中进行表达。[方法]以犬MC4R基因组DNA为模板,应用重叠PCR扩增MC4R突变体D90N目的基因,将扩增产物进行T-A克隆;酶切、测序鉴定成功后将目的基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A。重组体pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R-D90N经酶切和测序鉴定;采用FuGENEHD介导转染技术将重组体导入MDCK细胞;转染后继续培养72.0h,提取细胞内总RNA,用RT-PCR鉴定目的基因的表达;提取细胞总蛋白,用WesternBlot检测蛋白表达。[结果]构建带标签的pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R-D90N重组真核表达载体,测序结果显示含有D90N突变位点。RT-PCR和Western Blot检测到目的基因表达。[结论]成功构建犬真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R-D90N,重组体能在MD-CK细胞中表达。
- 魏嘉王光川武洁张轶博宋慧娟巴彩凤
- 关键词：真核表达载体MDCK细胞
