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国家高技术研究发展计划(2009AA02Z112): 作品数：12 被引量：58H指数：5; 相关作者：邓宁王宏宋其芳向军俭徐萌更多>>; 相关机构：暨南大学暨南大学附属第一医院南方医科大学更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

重组人EGFL6在HEK293细胞中的瞬时表达被引量：4: 2013年; 旨在通过构建EGFL6的真核表达载体,在HEK293T细胞中进行表达,并利用HEK293T细胞表达的EGFL6条件培养基,探讨EGFL6对人黑色素瘤A375细胞和人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响。利用PCR方法亚克隆得到的EGFL6基因片段及EGFP基因片段,用重叠PCR方法构建成EGFP-EGFL6融合基因片段,并分别将测序正确的EGFP-EGFL6融合基因片段及EGFP基因片段构建到真核表达载体pAAV中。表达载体质粒去内毒素纯化后,瞬时转染HEK293T细胞进行表达,荧光定位分析和Western blot检测EGFL6的表达。CCK-8试验分析含EGFP-EGFL6融合蛋白的HEK293T条件培养基对A375细胞和SKOV3细胞的增殖能力的影响。结果显示,酶切鉴定pAAV-EGFP-EGFL6和pAAV-EGFP两个重组表达载体均构建成功;EGFP荧光定位及Western blot结果均显示EGFP-EGFL6在HEK293T细胞中成功表达;增殖抑制试验结果显示EGFL6促进了A375和SKOV3细胞的增殖,对肿瘤细胞的促增殖率分别达到(37.79±14.05)%和(30.53±6.31)%。成功地将EGFP应用于EGFL6真核表达载体的构建与表达,结果表明人EGFL6促进了A375和SKOV3细胞的增殖。; 亢中奎张晋霞姜浩武王宏宋其芳黄建芳邓宁; 关键词：肿瘤细胞

bFGF单克隆抗体抑制小鼠Lewis肺癌转移及血管新生被引量：9: 2010年; 背景与目的:碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)是一种具有广泛生物学功能的细胞因子,在肺癌等多种肿瘤组织高表达,并参与其发生、发展进程。本研究旨在探讨bFGF单克隆抗体对C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤生长、转移及血管新生的抑制作用。方法:采用皮下接种肿瘤细胞的方法,建立Lewis肺癌自发转移小鼠模型,随机分为PBS组、bFGF单克隆抗体MabF7治疗组,以及正常小鼠IgG阴性对照组,每组8只。自接种第9天开始给药,每3天1次,连续6次。同时观察Lewis肺癌小鼠健康状况,游标卡尺测量皮下移植瘤体积,给药6次后处死小鼠,称瘤质量,取肺组织计数各组小鼠肺表面转移瘤结节数,并用免疫组化法检测CD31的表达,以计算肿瘤组织微血管密度(microvessel density,MVD)。结果:MabF7治疗组小鼠肿瘤体积与PBS组相比生长缓慢,小鼠瘤质量为(2.6±1.0)g,较PBS组的(5.1±1.3)g显著降低(P<0.05);MabF7组小鼠肺表面转移瘤结节数为(3.0±2.1)个,显著低于PBS组的(12.3±2.4)个(P<0.05)。另外MabF7组可显著抑制肿瘤组织MVD表达水平。结论:bFGF单抗可明显抑制C57BL/6小鼠Lewis肺癌生长及转移,其作用与抑制肿瘤增殖及微血管生成相关。; 向军俭李丹王宏王盼盼邓宁; 关键词：BFGF 单克隆抗体肿瘤转移微血管密度

嵌合内含子对抗bFGF抗体基因在293T细胞中表达的影响被引量：4: 2010年; 目的:构建含嵌合内含子和抗bFGF抗体基因的真核表达载体并在293T细胞中表达,探讨嵌合内含子对抗体表达的影响。方法:设计引物分别从载体pCl-neo和pComb3-Fab25中扩增出内含子和抗体Fd段、κ链基因序列,按不同组合构建到含人免疫球蛋白IgG1恒定区Fc段基因的表达载体pIgG中。重组质粒经脂质体PEI转染293T细胞,荧光显微镜观察质粒转染情况,采用夹心ELISA和Western blot检测细胞上清中抗体的表达。结果:DNA测序和酶切分析表明,内含子和抗体基因成功插入pIgG,获得了重组质粒pIgG-Fd-κ、pIgG-Fd-intron-κ、pIgG-Fd-κ-intron和pIgG-Fd-intron-κ-intron。倒置荧光显微镜下可观察EGFP大量表达,Western blot分析上清中有抗体的表达,夹心ELISA检测pIgG-Fd-κ、pIgG-Fd-intron-κ、pIgG-Fd-κ-intron和pIgG-Fd-intron-κ-intron抗体表达量分别为1.21mg/L、0.468mg/L、7.39mg/L、0.601mg/L。结论:成功构建了含嵌合内含子和抗体基因的真核表达载体并在293T细胞中得到表达。嵌合内含子插入κ链基因5′端可提高抗体的表达,插入Fd段5′端则抑制抗体的表达。; 龚义平陶俊王宏宋其芳唐勇向军俭邓宁; 关键词：抗体基因 BFGF 293T细胞

伊马替尼耐药CML患者ABL基因激酶区突变检测被引量：4: 2011年; 目的研究伊马替尼(imatinib,IM)治疗慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)耐药患者ABL酪氨酸激酶区突变情况。方法用巢式PCR扩增对IM治疗耐药的56例CML患者骨髓样本ABL基因激酶区序列,通过测序和序列同源性检索分析ABL激酶区突变情况。结果 56例患者检出突变17例,其中14例为点突变,包括T315I、N358D、F359V、T389A、P441L、E450K、S410G、F486S;3例检测出插入突变c.1423-1424ins 35bp(p.C475YfsX11)。慢性期患者突变12例(28.6%),加速期、急性期突变者分别为4例和1例。。IM急变期、加速期患者突变率高于慢性期,但差异无显著性(χ2=0.253,P>0.05)。结论 ABL基因激酶区点突变是CML患者对IM耐药的重要原因,通过检测ABL基因激酶区突变有助于预测IM疗效并及时调整治疗方案。; 宋其芳瞿燕春杨红宇王宏; 关键词：伊马替尼慢性粒细胞白血病突变

人源性抗bFGF抗体抑制人黑色素瘤生长的作用研究被引量：5: 2013年; 目的研究人源性抗bFGF抗体对人黑色素瘤A375细胞的体内外增殖抑制作用。方法体外培养人黑色素瘤A375细胞,CCK-8法检测人源性抗bFGF抗体对A375细胞增殖的影响;Western blot检测人源性抗bFGF抗体对bFGF下游信号通路中ERK1/2磷酸化的影响;建立裸鼠皮下移植瘤模型,通过记录各处理组裸鼠皮下移植瘤的体积、质量及裸鼠体质量变化,研究人源性抗bFGF抗体在体内对人黑色素瘤生长的抑制作用;免疫组化检测肿瘤组织内的微血管密度。结果 CCK-8实验结果表明人源性抗bFGF抗体能抑制A375细胞的生长,在800 ng/ml的质量浓度下,抑制率为24%;Western blot结果表明人源性抗bFGF抗体显著抑制FGFR下游信号通路中ERK1/2的磷酸化;裸鼠体内试验中,人源性抗体明显抑制了肿瘤的生长,抑制率为28.12%。免疫组化结果显示各组肿瘤组织中微血管密度均有下降。结论该株人源性抗体在体外可有效的抑制人黑色素瘤细胞的生长,并能在体内抑制肿瘤生长及血管新生。; 杜超超亢中奎陈文慧潘磊宋其芳王宏黄建芳邓宁; 关键词：黑色素瘤碱性成纤维细胞生长因子人源性抗体

人源性EGFL6的重组表达及多克隆抗体制备研究被引量：7: 2013年; 目的研究发现人源性类表皮生长因子域EGFL6可促进组织血管新生并在肿瘤组织细胞中表达上调,预示其与肿瘤发生发展密切相关,本研究通过对EGFL6基因克隆,表达和纯化并制备其多克隆抗体,为深入研究EGFL6相关功能奠定基础。方法用实时荧光定量PCR方法检测肿瘤及正常组织细胞系中EGFL6基因表达水平,并扩增EGFL6基因片段,采用基因重组技术构建EGFL6原核表达载体,经诱导表达后利用镍离子柱亲和纯化EGFL6重组蛋白,免疫昆明小鼠制备抗EGFL6多克隆抗体,ELISA、Western blot方法检测抗体灵敏度和特异性。结果 RT-PCR检测发现EGFL6在肿瘤细胞系A375及SKOV3中高表达。成功构建表达载体pET32a(+)-EGFL6,实现可溶性EGFL6蛋白的诱导表达,纯化和抗体制备。SDS-PAGE和Western blot证实,重组EGFL6蛋白质与预期结果一致,抗血清能够特异地识别重组片段蛋白,重组全长蛋白及细胞系中天然EGFL6蛋白。结论 qRT-PCR检测得知EGFL6在肿瘤细胞系A375及SKOV3中表达量较高,并成功实现了EGFL6的重组表达,抗体制备及初步应用研究。; 杨晶王金胜张辉挺王宏宋其芳黄建芳邓宁; 关键词：肿瘤细胞多克隆抗体

人源性抗bFGF单链抗体表达载体的构建与酵母表达被引量：3: 2012年; 为了提高人源性抗bFGF抗体的表达量,从噬菌体抗体库筛选出的人源性抗bFGF抗体基因中亚克隆单链抗体(single chain fragment variable,ScFv)基因,并将其构建到酵母表达载体pPICZαA中。表达载体质粒经线性化后,电转化法转化至毕赤酵母GS115中,甲醇诱导表达。表达产物经镍离子亲和层析和阴离子交换层析纯化,并检测其生物学活性。酶切鉴定结果显示人源性的酵母表达载体构建成功。SDS-PAGE和Western blot结果显示,抗bFGF单链抗体获得了高效表达,表达量可达124mg/L,目的蛋白大小为36 kDa左右。通过两步纯化方案,目的蛋白的纯度可达95%以上。ELISA结果显示纯化的目的蛋白可与bFGF特异性结合。CCK8检测结果显示,纯化的抗bFGF单链抗体可剂量依赖性地抑制人肺腺癌细胞株A549的增殖。研究结果表明在毕赤酵母中可获得人源性抗bFGF单链抗体高效表达,表达产物具有很好的生物学活性。; 吕卫东杜超超王宏姜浩武劳学军宋其芳邓宁; 关键词：BFGF 单链抗体

洛铂对比顺铂治疗晚期非小细胞肺癌疗效和安全性的Meta分析被引量：10: 2014年; 目的:系统评价以洛铂为主的联合化疗方案对比以顺铂为主的联合化疗方案治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效和安全性,以为临床提供循证参考。方法:计算机检索Cochrane Library、PubMed、EMBase、中国期刊全文数据库、中国生物医学文献数据库、维普中文期刊数据库、万方数据库,纳入以洛铂为主的联合化疗方案对比以顺铂为主的联合化疗方案治疗晚期NSCLC的随机对照试验(RCT),运用改良后的Jadad量表评价纳入文献的方法学质量,并采用Cochrane协作网提供的Rev Man 5.2统计学软件进行Meta分析。结果:共纳入11项RCT,合计724例患者。Meta分析结果显示,试验组患者的客观缓解率[RR=0.96,95%CI(0.79,1.16),P=0.65]、白细胞减少发生率[RR=0.95,95%CI(0.83,1.08),P=0.42]和血小板减少发生率[RR=0.96,95%CI(0.80,1.15),P=0.68]与对照组比较差异无统计学意义;试验组患者恶心呕吐发生率[RR=0.55,95%CI(0.46,0.64),P<0.05]、腹泻发生率[RR=0.43,95%CI(0.31,0.61),P<0.05]显著低于对照组,两组比较差异有统计学意义。结论:以洛铂为主的联合化疗方案治疗NSCLC患者的疗效与以顺铂为主的联合化疗方案相当,但安全性优于后者。由于纳入研究的样本量偏小、质量较低,该结论尚需大样本、多中心的RCT进一步验证。; 赵凤芝徐萌赵建夫; 关键词：非小细胞肺癌洛铂顺铂 META分析随机对照试验

肿瘤治疗新靶点:碱性成纤维细胞生长因子及其受体信号被引量：5: 2014年; 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是一个促细胞分裂、增殖及血管生成的多肽生长因子,肿瘤组织中bFGF及其受体过度表达为抗肿瘤治疗提供潜在靶目标,研制靶向性抗bFGF抗体、FGFR抑制剂等抑制肿瘤细胞增殖和新血管形成,阻断肿瘤生长的营养和转移途径,成为抗肿瘤热点。本文就bFGF及其受体信号在肿瘤的发生、发展和转移中的作用及临床转化研究进行综述。; 陈文慧徐萌; 关键词：BFGF FGFR 信号转导

碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体通过P-糖蛋白逆转乳腺癌MCF-7/ADM细胞多药耐药性的分子机制被引量：11: 2013年; 目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体(monoclonal antibody to basic broblast growth factor,bFGF mAb)通过P-糖蛋白(permeability glycoprotein,P-gp)对人乳腺癌多柔比星(adriamycin,ADM)耐药细胞株MCF-7/ADM多药耐药(multidrug resistance,MDR)性的逆转机制。方法:CCK-8(cell counting kit-8)法检测bFGF mAb对MCF-7/ADM细胞增殖的影响及其对化疗药物耐药的逆转作用;bFGF mAb作用后,FCM检测MCF-7/ADM细胞的细胞周期、P-gp的表达及细胞内罗丹明(rhodamine,Rho)123的荧光强度,实时荧光定量PCR检测MCF-7/ADM细胞中MDR1和碱性成纤维细胞生长因子(basic broblast growth factor,bFGF)mRNA的表达。结果:1μg/mL bFGF mAb对MCF-7和MCF-7/ADM细胞的抑制率分别为(19.87±1.05)%和(27.34±2.79)%,差异有统计学意义(P<0.01)。bFGF mAb可有效逆转MCF-7/ADM细胞对ADM、吉西他滨(gemcitabine,GEM)和奥沙利泊(oxaliplatin,OXA)的耐药性,逆转指数分别为4.46、4.25和2.18。bFGF mAb作用MCF-7/ADM细胞后,细胞阻滞于G0/G1期,P-gp表达下调,细胞内Rho123的荧光强度增强,MDR1和bFGF mRNA的表达下调,与未作用组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:bFGF mAb能抑制MCF-7/ADM细胞增殖并逆转其MDR,该作用机制可能与bFGF mAb下调MDR1/P-gp表达、抑制P-gp功能以及增加细胞内化疗药物浓度有关。; 陈文慧徐萌杜超超赵建夫潘兰红李汉初向军俭邓宁; 关键词：碱性成纤维细胞生长因子单克隆 P-糖蛋白抗药性

国家高技术研究发展计划(2009AA02Z112)

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