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结球甘蓝花粉钙调素基因的克隆与表达分析被引量：4: 2012年; 根据芸薹属植物钙调素基因保守区域设计引物,采用同源克隆的方法从结球甘蓝自交不亲和系和自交系花粉中克隆得到一个钙调素开放阅读框cDNA序列,该序列长450bp,编码149个氨基酸;编码蛋白不含跨膜区,无信号肽,具有4个完整的EF-hand结构域。构建了结球甘蓝花粉钙调素原核表达系统,钙调素基因及其3个突变体在E.coli中得到表达,均获得分子量约为16kD的可溶性融合蛋白,在EGTA存在的条件下,各融合蛋白具有各自独特的凝胶迁移现象,活性检测表明甘蓝花粉钙调素活性依赖于钙离子。该基因在甘蓝自交不亲和系花粉萌发过程中表达量先上升后下降,在自交系中随花粉萌发增大而降低;在含有钙调素拮抗剂TFP的培养基中,自交不亲和系和自交系花粉中钙调素基因表达量均受到抑制;在含有W-7琼脂糖的培养基中无明显差异。; 孙梓健韦静宜王小佳宋明汤青林王志敏任雪松; 关键词：甘蓝花粉钙调素克隆

生姜二倍体与四倍体基因组DNA的RAPD和ISSR分析被引量：7: 2013年; 利用RAPD和ISSR标记对生姜二倍体和四倍体的遗传差异进行研究,结果表明:71个RAPD引物和14个ISSR引物对生姜二倍体和四倍体都扩增出了条带,其中有25个RAPD引物和7个ISSR引物在二倍体与四倍体之间扩增出了差异带,并且86%的ISSR引物序列为(GA)或(AG)的简单重复序列.表明在用一定浓度秋水仙素诱导生姜体细胞染色体加倍过程中,会引起基因组DNA的核苷酸碱基序列的改变,并以腺嘌呤和鸟嘌呤组合的简单序列重复区间易形成新的结合位点.; 王志敏牛义汤青林宋明; 关键词：生姜四倍体 RAPD ISSR

芸薹属作物抽薹开花调控途径的研究进展被引量：5: 2011年; 抽薹及开花对于芸薹属作物来说是非常重要的两个性状,对该性状的深入研究对芸薹属作物有着重要的理论及实际意义。通过综述芸薹属作物抽薹开花调控途径的最新研究进展,指出芸薹属作物的研究仍主要在确定具体基因位点标记和基因功能方面,而对相关基因的整体系统研究还明显不足。; 丁宁汤青林王志敏宋明; 关键词：芸薹属作物抽薹开花

结球甘蓝花粉蛋白延伸因子基因的克隆及其序列分析被引量：2: 2013年; 以结球甘蓝(Brassica oleracea L.var.capitata L.)E1花粉为试材,对萌发前后的花粉总蛋白进行双向电泳及差异蛋白质谱分析,发现延伸因子BoEF-Tu蛋白在花粉萌发后较萌发前表达上调。利用同源克隆得到甘蓝BoEF-Tu基因的全长cDNA序列,其长度为1 728 bp,具有一个完整开放阅读框(ORF),位于112～1 473 bp处,编码453个氨基酸残基,预测分子量为49.17 kD,等电点为6.52。生物信息学分析表明:BoEF-Tu蛋白含有9个α–螺旋结构,18个β–折叠结构,不含信号肽和跨膜区,在106～121位氨基酸残基处有1个GTP结合区域(DKAPEEKKRGITIATA)。氨基酸同源性分析表明,BoEF-Tu与拟南芥EF-TuM同源性较高,达到93%;系统进化分析表明,BoEF-Tu与拟南芥EF-Tu的亲缘关系最近。; 王志敏牛义许俊强孙梓健丁泽琴杨修勤汤青林宋明; 关键词：结球甘蓝花粉

结球甘蓝花粉类钙调素蛋白基因BoCML49的克隆及表达分析被引量：12: 2012年; 以结球甘蓝E1为材料,提取花粉萌发前和萌发后的混合花粉总蛋白,总蛋白双向电泳后通过MALDI-TOF-MS鉴定分析差异点,根据差异点分析结果,利用同源克隆得到甘蓝BoCML49基因707bp的cDNA片段。通过对BoCML49基因的qPCR分析表明其表达量在花粉萌发前约为萌发后的2.73倍,表明BoCML49基因在花粉萌发后表达下调。通过5-Race和3-Race分别得到550bp和721bp大小cDNA片段,最终得到结球甘蓝BoCML49全长cDNA序列,开放阅读框位于125~1078bp处,加尾信号（AATAAA）位于第1222bp处。通过cDNA推导得到的氨基酸序列分析表明,BoCML49编码317个氨基酸残基,预测分子量为33.51kD,pI为6.93,经Smart-embl预测其含2个重要的EF-hand结构,分别位于序列第150~178和第216~244位氨基酸残基处,预测结果显示其含有7个α-螺旋和10个β-折叠结构。系统发育树表明结球甘蓝BoCML49与拟南芥AtCML49和AtCML50的亲缘关系较近。BoCML49基因的原核表达得到37.55kD的融合蛋白。; 宋明许俊强孙梓健汤青林王志敏王小佳; 关键词：结球甘蓝花粉

结球甘蓝花粉膜联蛋白基因的克隆及其表达分析被引量：2: 2012年; 对结球甘蓝(Brassica oleracea L.var.capitata L.)花粉总蛋白双向电泳及差异蛋白质谱分析,发现膜联蛋白在花粉萌发后较萌发前表达下调。通过同源扩增和RACE等方法首次在结球甘蓝花粉中扩增得到BoAnnexin2基因的cDNA序列,该基因cDNA全长1157bp,开放阅读框为951bp,编码316个氨基酸残基,预测分子量为36.02kD,等电点6.33。BoAnnexin2编码蛋白C端有4个膜联蛋白重复序列,共2个Ⅱ型钙结合区域,在第4个钙结合区位点包含GXXXGXS(T)/DXXG基序。实时荧光定量试验表明,BoAnnexin2在甘蓝成熟未萌发花粉中的表达量是萌发45min后表达量的8倍,表明BoAnnexin2在甘蓝花粉萌发起始阶段起到重要调控作用。; 孙梓健许俊强宋明韦静宜汤青林王志敏王小佳; 关键词：结球甘蓝花粉膜联蛋白

抽薹开花调控基因SVP的作用机制被引量：3: 2013年; SHORT VEGETATIVE PHASE(SVP)基因属于MADS盒基因,它编码的蛋白转录因子对开花具有抑制作用。SVP主要在营养生长阶段表达,受自主途径等多个开花路径调控,并可以调节开花途径整合子FLOWERING LOCUST(FT),SUPPRESSOR OF OVEREXPRESSION OF CONSTANS1(SOC1)的表达,从而调控抽薹开花时间。本文综述了SVP基因调控抽薹开花的作用机制,并结合SVP基因的研究现状展望了未来的研究方向。; 杨修勤王志敏汤青林宋明; 关键词：抽薹开花 SVP

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国家教育部博士点基金(20090182120003)