国家自然科学基金(30672173)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
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- 相关机构：第三军医大学西南医院解放军第一八一医院武警浙江省总队更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠CCR7基因重组腺病毒的构建与鉴定被引量：3
- 2007年
- 目的：构建含有小鼠趋化因子受体-7（CCR7）基因的重组腺病毒，为下一步转染不成熟树突状细胞（imDC）诱导免疫耐受研究奠定基础。方法：提取小鼠胸腺总RNA，应用逆转录PCR（RT-PCR）方法，以自行设计的带有酶切位点的引物，扩增获得CCR7基因全部序列，经过T-A克隆，酶切亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上，在BJ5183菌内和pAdeasy-1同源重组，筛选阳性克隆，酶切鉴定，线性化后脂质体法转染HEK293细胞进行包装、PCR鉴定及扩增，得到含有CCR7基因的重组腺病毒，根据报告基因GFP测定病毒滴度。结果：成功构建小鼠CCR7基因重组腺病毒，病毒滴度为1×10^9U／mL。结论：该重组腺病毒载体的成功构建，为进一步研究携带CCR7基因的imDC的趋化迁移性等研究提供了一定的工作基础。
- 郭浩彭毅志辛海明
- 关键词：腺病毒CCR7
- CCR7基因转染对小鼠未成熟树突状细胞成熟及迁移功能的影响
- 2009年
- 目的研究趋化因子受体-7(chemokine receptor-7,CCR7)重组腺病毒体外转染对小鼠未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,imDCs)成熟和迁移功能的影响。方法小鼠骨髓经梯度离心及rmIL-4、rmGM-CSF诱导培养未成熟树突状细胞;CCR7重组腺病毒经增强离心法转染未成熟树突状细胞,观察CCR7重组腺病毒对未成熟树突状细胞的形态、细胞表型及趋化功能的影响。结果扫描电镜显示CCR7腺病毒转染后细胞树枝状突起较未成熟DC增多,即轻微地诱使imDCs向成熟转化,但IL-10可抑制成熟;流式结果表明转染后细胞表型符合典型imDCs的特征;Western blot证实CCR7重组腺病毒转染imDCs后可增强CCR7的表达;体外趋化实验显示转染后imDCs体外迁移百分比由4.2%增加到36.1%。结论CCR7重组腺病毒转染imDCs后,其仍保留未成熟特性,CCR7蛋白表达增强,体外迁移能力明显增强。
- 辛海明彭毅志郭浩袁志强
- 关键词：CCR7未成熟树突状细胞重组腺病毒免疫耐受
- CCR7基因修饰未成熟树突状细胞诱导小鼠皮肤移植免疫耐受的研究被引量：4
- 2009年
- 目的研究CCR7基因重组腺病毒体外转染未成熟树突状细胞(imDCs)对小鼠同种异体皮肤移植免疫耐受的影响。方法小鼠骨髓细胞经梯度离心及rmIL-4、rmGM-CSF诱导培养未成熟树突状细胞;CCR7重组腺病毒经增强离心法转染未成熟树突状细胞;体外观察转染细胞混合淋巴细胞反应;取CCR7修饰imDCs于皮肤移植前2d、移植后第5天,经腹部注入受体小鼠,观察皮肤移植物存活时间和病理变化。结果CCR7基因成功转染入imDCs;腺病毒转染后imDCs刺激T细胞增殖的能力较imDCs组增强但弱于mDCs组,IL-10可以明显降低刺激能力;CCR7腺病毒转染组皮肤存活时间长于转染前,IL-10能显著延长皮肤存活时间。结论CCR7重组腺病毒转染imDCs后,imDCs刺激T细胞增殖的能力部分增强,皮肤移植物存活时间明显延长。
- 辛海明彭毅志郭浩袁志强童亚林
- 关键词：CCR7未成熟树突状细胞免疫耐受MST
- 携带供者抗原的第三方树突状细胞诱导小鼠皮肤移植耐受的研究
- 2007年
- 目的了解携带供者抗原的第三方树突状细胞（DC）是否具有与供者源未成熟DC相似的免疫功能。方法雌性C57 BL／6小鼠、BALB／c小鼠和昆明小鼠分别为皮肤移植的供者、受者和第三方。将40只BALB／c小鼠分为对照组、环磷酰胺组、供者源未成熟DC组、第三方未成熟DC组、携带供者抗原第三方DC组，每组8只。后4组大鼠皮肤移植术前4d用环磷酰胺（200mg／kg）预处理，对照组同法给予等量等渗盐水。后3组术前2d用1ml相应DC悬液（1×10^7个／m1）预处理，并在术后12d重复给予1mlDC悬液（1×10^7个／m1）1次；前2组于上述2个时相点同法给予等量等渗盐水。记录各组皮片平均成活时间（MST）并于术后5d对皮片进行组织学观察。结果与对照组（16．1±3．5）d比较，供者源未成熟DC组和携带供者抗原第三方DC组小鼠移植皮片的MST明显延长，分别为（38．3±7．7）、（34．9±7．7）d（P〈0．01）；携带供者抗原第三方DC组与供者源未成熟DC组皮片的MST相近（P〉0．05），但与第三方未成熟DC组（23．7±2．7）d比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。镜下见携带供者抗原第三方DC组移植皮片结构较清楚、排列有序，与供者源未成熟DC组情况相近。结论携带供者抗原的第三方DC与供者源未成熟DC，均可在一定程度上建立抗原特异性免疫耐受。
- 王强彭毅志彭毅志王逸涛王永权游波王元元
- 关键词：树突细胞皮肤移植细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4
