国家自然科学基金(31260420)
- 作品数：12 被引量：38H指数：4
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- 加工番茄马铃薯Y病毒一步法RT-PCR检测及CP基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2013年
- 本文通过一步法RT-PCR技术,检测新疆加工番茄马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)感染率。结果表明,新疆加工番茄马铃薯Y病毒感染率为25%。选取10个样品利用RT-PCR技术,克隆CP基因,获得807 bp全长CP基因,编码268个氨基酸。CP基因序列比对分析与系统进化树分析表明,侵染新疆加工番茄的马铃薯Y病毒属于PVYN:O株系。
- 梁学超向本春程朝玲苏海娣郑银英
- 关键词：马铃薯Y病毒加工番茄CP基因
- 新疆石河子南瓜和加工番茄CMV卫星RNA与RNA3序列分析被引量：3
- 2013年
- 为探究石河子地区侵染南瓜和加工番茄的CMV卫星RNA及基因组RNA3的分子变异及株系分化,从石河子蔬菜研究所采集南瓜和加工番茄样品并提取dsRNA,利用RT-PCR方法克隆5个CMV卫星RNA序列和2个CMV RNA3序列,南瓜样品卫星RNA及RNA3分别命名为N-sate和N-R322,片段大小分别为335nt和2 214nt;加工番茄样品卫星RNA及RNA3分别命名为To-9-sate、S18-1、S9、S18-2和To-9-R322,片段大小分别为381nt、396nt、334nt、334nt和2 216nt。卫星RNA序列分析结果显示,卫星RNA的序列差异与地域有一定的相关性,与寄主类别无关。同时这5个卫星RNA序列都不含有CMVYSAT所具有的黄化区域。N-R322和To-9-R322序列分析结果显示,二者均属于CMV亚组ⅠB,且CMV分离物有一定的地域相关性,没有明显寄主相关性。
- 程朝玲梁学超向本春郑银英
- 关键词：黄瓜花叶病毒卫星RNA株系分化
- 番茄叶绿素a/b结合蛋白基因cab-1a的克隆与定位被引量：3
- 2017年
- 在进行酵母双杂交试验时发现,马铃薯Y病毒HC-Pro蛋白与番茄未知蛋白发生相互作用,经测序、Blast比对,确认其为番茄叶绿素a/b结合蛋白Cab-1A,Genebank序列号为XM_010318610.1。为初步验证这一发现,设计引物,然后以番茄c DNA文库为模板,克隆出798 bp的cab-1a全长序列,并构建了cab-1a基因的亚细胞定位载体p SPGFP-Cab-1A,并运用叶盘法将其转化到烟草表皮细胞中,在荧光共聚焦显微镜下观察其定位情况。结果表明,cab-1a基因编码的Cab-1A-like蛋白位于细胞核和细胞质中,为与马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)蛋白HCPro(helper component proteinase)相互作用的后续研究奠定理论基础。
- 朱彬彬崔百明向本春
- 关键词：番茄叶绿素A/B亚细胞定位GFP
- 新疆石河子、伊宁地区黄瓜花叶病毒株系分化被引量：8
- 2013年
- 为了研究新疆黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)分子变异及株系分化,对从石河子和伊宁地区采集的205个加工番茄、23个辣椒、4个番茄、2个南瓜样品进行酶联免疫检测和RT-PCR检测。在4种寄主上均检出了亚组Ⅰ型CMV,其中加工番茄的感染率高达74.15%。进一步对来自辣椒的YN-6、LJ-4、L-10,加工番茄的S1-1、S1-14,番茄的YN-2,以及南瓜的YN-9等7个样品CP、RNA3、MP核苷酸序列进行相似性和进化树分析。7个样品与CMV亚组ⅠB株系分离物的相似性较高、亲缘关系最近,均可归为CMV亚组ⅠB。而来自辣椒的LJ-4、L-10与其余5个样品的序列相似性较低,亲缘关系较远,在进化树上形成独立分支。说明在新疆加工番茄及其它蔬菜上广泛流行的CMV存在分子变异。
- 程朝玲向本春崔百明郑银英
- 关键词：黄瓜花叶病毒血清学RT-PCR株系分化
- 新疆加工番茄上南方番茄病毒外壳蛋白基因的克隆与原核表达被引量：4
- 2015年
- 【目的】克隆南方番茄病毒(STV)的外壳蛋白(CP)基因,构建其原核表达载体并进行诱导表达,为制备检测该病毒的高效价血清提供参考。【方法】利用一步法RT-PCR从新疆加工番茄上克隆STVCP基因,将其连接到原核表达载体pET-28a(+)上,获得重组质粒pET-28a-STV CP。将重组质粒转化大肠杆菌BL21后用IPTG进行诱导表达。【结果】成功克隆了STVCP基因,其长度为1 134bp。构建了原核重组表达质粒pET-28a-STV CP,其在1mmol/L IPTG诱导下,成功表达出分子质量约47ku的蛋白。【结论】成功克隆了STV CP基因,并诱导了pET-28a-STV CP重组蛋白的原核表达。
- 张强崔百明郑银英向本春
- 关键词：外壳蛋白基因原核表达
- 抗CMV和ToMV RNAi载体的构建及加工番茄遗传转化被引量：3
- 2014年
- 【目的】利用农杆菌介导法将抗CMV和ToMV的RNAi表达载体pBi35STC12转入红番3号加工番茄,获得抗CMV和ToMV的加工番茄植株,为加工番茄病毒病的防治奠定基础。【方法】采用RT-PCR扩增,选取新疆加工番茄CMV分离物NS0-4 1a复制酶第1 051-1 350bp序列和ToMV分离物SCS-2 130/180ku复制酶第1 920-2 200bp序列,作为干扰片段CR12和To12。通过T克隆载体将CR12和To12连接成拼接片段TC12,构建成含反向重复结构拼接片段的RNAi表达载体pBi35STC12。通过农杆菌介导法,用其转化红番3号加工番茄,经过筛选、PCR检测得到转基因植株。【结果】成功构建了抗CMV和ToMV的RNAi表达载体pBi35STC12,并用其转化番茄植株,从转化的1 500个愈伤组织中获得33株再生植株,利用PCR对再生植株进行检测,显示从33株再生植株中获得了19株转基因植株,转化率为1.26%。【结论】构建了抗CMV和ToMV的RNAi表达载体pBi35STC12,用其转化红番3号加工番茄,获得了转基因植株。
- 乔亚红田桂英郑银英崔百明李诗林向本春
- 关键词：CMVTOMVRNAI载体加工番茄
- 新疆番茄病毒病检测及南方番茄病毒全基因组序列测定与传播特性分析被引量：4
- 2017年
- 为了解新疆番茄上病毒病的发生情况,利用一步法RT-PCR技术检测了南北疆番茄上南方番茄病毒(Southern tomato virus,STV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,ToMV)以及马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)的感染情况,并利用分段克隆的方法进行全基因组测序,通过RT-PCR方法检测健康植株与携带病毒植株杂交育种的F1代植株带毒率以分析STV的种子传播特性。结果显示,新疆番茄上CMV、STV、ToMV和PVY在北疆的检出率分别为52%、37%、27%和14%;在南疆的检出率分别为79%、60%、69%和0;且以STV、CMV及ToMV的复合侵染为主。从我国加工番茄上首次获得了长3 437 nt的STV SHZ-1核苷酸序列,序列比对分析发现其与已报道STV只有1~9个核苷酸的变异,且序列变异与地域无相关性。分析杂交F1代加工番茄植株上STV的传播特性,发现其除可由种子传播外,也可通过花粉传播。表明STV是侵染新疆番茄的主要病毒之一,且该病毒可通过种子或杂交育种途径进行传播。
- 杨海燕崔百明张强陈英杰郑银英向本春
- 关键词：RT-PCR检测种子传播
- 新疆加工番茄上一种类似南方番茄病毒的分子检测被引量：9
- 2013年
- 在对加工番茄里格87-5进行RNA测序时,我们发现存在南方番茄病毒的基因组序列,序列包含STV除5′末端12bp和3′末端35bp的其它全部3390bp的RNA序列,其中只有5个碱基存在差异(与EF442780相比),说明里格87-5感染了STV。为了快速检测加工番茄品种的病毒感染情况,我们设计了STV特异性的PCR引物STV168F/STV745R,用一步法RT-PCR方法,从里格87-5的总RNA中扩增得到了预期的577bp的扩增产物,回收、克隆到pGEM-T上,提取质粒经EcoRI酶切鉴定后进行序列测定,与已报道的STV的序列同源性为99%～100%,表明该片段是STV特异性的。运用这项技术调查了20份加工番茄材料,结果显示,有3份材料的全部植株均带毒,13份材料均不带毒,另外4份材料部分带毒。同时,在新疆石河子蔬菜花卉研究所随机采集了加工番茄叶片样品,统计大田检出率约为28%。
- 苏海娣梁学超崔百明郑银英王建江向本春
- 关键词：加工番茄
- 南疆温室番茄黄化曲叶病病毒种类的分子鉴定被引量：7
- 2013年
- 为明确南疆温室番茄黄化曲叶病的病毒种类,利用双生病毒的兼并引物通过PCR扩增,对采集的20个番茄病株进行了分子检测。从20个病株中均扩增到约500 bp的目标片段,对其中4株进行克隆和测序,其相互间序列同源性为97.1%～99.3%,与番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellowleaf curl virus,TYLCV)的同源性较高,为98.6%～99.5%。随机选取莎车分离物KS2-5进行全基因组的克隆和测序,KS2-5 DNA全长为2781 nt(序列号:JQ807735),具有典型的双生病毒基因组特征,与TYLCV其它分离物同源性达到98.9%～99.5%,而与其它粉虱传双生病毒的序列同源性较低,为68.3%～75.5%,表明危害南疆温室番茄的病毒种类为番茄黄化曲叶病毒TYLCV。
- 王喜刚黄家风都业娟
- 关键词：番茄番茄黄化曲叶病毒粉虱传双生病毒
- 加工番茄病毒病田间发生情况及毒原的分子检测被引量：4
- 2013年
- 2007-2012年,通过播期、品种试验及毒原的分子检测对石河子地区加工番茄病毒病进行研究。对不同播期加工番茄病毒病的调查表明:晚播(5月20日)发病率和病情指数高达67.94%和43.47,高于早播(4月5日)和适播(4月25日);对15个加工番茄品种发病情况调查并对病情指数进行差异显著性分析显示,‘里格87-5’、‘石番15’、‘屯河34’、‘石番18’4个品种田间发病较重;‘新番9’、‘新番4’、‘Q027’、‘石番3’4个品种田间发病相对较轻;对400份田间病样5种病毒的分子检测表明,田间发病主要以ToMV与另2种病毒(CMV+PVY、CMV+BB-WV、PVY+BBWV)的复合侵染为主。
- 都业娟石宝萍李成亮向本春
- 关键词：加工番茄病毒病播期分子检测
