国家高技术研究发展计划(2006AA10A203)
- 作品数：58 被引量：310H指数：10
- 相关作者：景志忠房永祥陈国华崔海信张继瑜更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃农业大学中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生一般工业技术更多>>
- Toll样受体2、4对病毒囊膜蛋白的识别被引量：6
- 2011年
- TLR2、4是TLRs家族中重要的成员,通过识别囊膜病毒的PAMPs/DAMPs,活化依赖和非依赖于MyD88的信号通路,诱导促炎性细胞因子和趋化因子等的释放,介导先天性抗病毒免疫反应。本文就TLR2、4的基本概况、结构特征、抗病毒信号通路以及对不同囊膜病毒的天然免疫反应等相关研究进展进行简要综述。
- 何小兵房永祥贾怀杰陈国华曾爽景志忠
- 关键词：TOLL样受体先天性免疫囊膜蛋白抗病毒免疫
- 硅烷偶联剂KH-570对纳米二氧化硅的表面改性研究被引量：43
- 2009年
- 为改善用作农药载体的纳米SiO2的分散性和疏水性,以硅烷偶联剂KH-570对纳米SiO2进行了表面改性,通过SEM、XRD、FTIR以及元素分析等表征方法对产物结构和性能进行了分析,结果表明,KH-570能够成功地对纳米SiO2进行改性,并且提高其分散性。最佳偶联改性的反应条件为：改性剂用量5%,改性时间5h。在此条件下,改性纳米SiO2的接枝率为11.7%。
- 刘琪崔海信顾微林春梅李颖
- 关键词：纳米二氧化硅硅烷偶联剂改性
- O型泛亚谱系口蹄疫病毒cDNA感染性克隆的建立被引量：10
- 2009年
- 本研究采用RT-PCR技术将O型口蹄疫病毒(FMDV)O/YS/CHA/05株全长基因组分4个cDNA片段进行克隆、拼接,构建了具有感染性的FMDV cDNA克隆pOKT7-O/YS/CHA/05。将线性化的pOKT7-O/YS/CHA/05在细胞外转录获得的病毒RNA转染BHK-21细胞,经培养可见典型的细胞病变(CPE)。同时,将线性化的pOKT7-O/YS/CHA/05与含有编码T7 RNA聚合酶的真核表达重组质粒共转染BHK-21细胞,同样也观察到典型的CPE。对拯救的病毒进行RT-PCR扩增、酶切和序列分析鉴定表明,拯救病毒含有不同于亲本病毒的分子标记,即在病毒核酸的3510位人工消除了XbaⅠ酶切位点。免疫电镜观察和间接免疫荧光试验进一步表明,拯救出了FMDV。病毒生长比较试验表明,拯救病毒与亲本病毒具有相似的增殖特性。本研究构建了O型口蹄疫病毒的感染性克隆并获得了拯救病毒,为深入研究FMDV的致病机理以及开发新型疫苗提供了有效的反向遗传操作平台。
- 杨德成涂亚斌王海伟周国辉于力
- 关键词：口蹄疫病毒全长CDNA病毒拯救
- 牦牛IFN-β基因在毕赤酵母中的分泌表达
- 2010年
- 用真核表达引物从pGEM-yakIFN-β重组质粒中扩增出牦牛IFN-β基因,将目的基因和真核表达载体pPIC9K连接转入E.coli的JM109中,得到pPIC9K-yakIFN-β重组表达质粒.通过电击法将经SalⅠ线性化的pPIC9K-yakIFN-β质粒转化到巴斯德毕赤酵母GS115感受态细胞中,采用G418抗性梯度法筛选得到多拷贝重组菌株,利用甲醇诱导表达,分泌表达产物用MTT法检测其生物学活性.经SDS-PAGE电泳分析表明:表达出约22ku大小分泌于胞外的牦牛IFN-β蛋白分子量,比理论值稍大;MTT结果表明:纯化的重组yak-IFN-β蛋白具有促进淋巴细胞增殖的活性.
- 王生富孙晓林段风云何延华闫鸿斌景志忠
- 关键词：牦牛巴斯德毕赤酵母分泌表达
- 抑制性消减杂交技术的应用被引量：11
- 2009年
- 基因的差异表达是调控各种生命活动的核心分子机制,而分离、克隆并进一步研究差异表达基因已成为现代分子生物学研究的热点,也是功能基因组学研究的重要内容。在研究差异表达基因的诸多项技术中,抑制性消减杂交(SSH)技术具有特异性强、假阳性率低、灵敏度高和快速简便等优点,被广泛地应用于生命科学和医学领域的基因差异表达的研究中。近年来,抑制性消减杂交(SSH)技术得到了相应的改进和完善,而在许多研究领域,该技术在广度和深度上都有了一些新进展。主要就抑制性消减杂交技术的产生背景、原理、技术流程、特点及其最新应用研究进展等方面作简要综述。
- 李小庆景志忠
- 关键词：抑制性消减杂交CDNA微阵列
- 猪IL-18在毕赤酵母中的表达及活性分析被引量：4
- 2007年
- 采用PCR方法从pGEM-IL-18重组质粒中扩增出IL-18基因并构建真核融合表达载体pPIC9K-IL-18,电激法转化入毕赤酵母GS115,采用G418抗性梯度法筛选得到多拷贝重组菌株,甲醇诱导表达,应用SDS-PAGE分析重组蛋白的表达情况,并将表达蛋白用凝胶层析柱纯化后,用MTT法检测其生物学活性。实验结果表明重组的GS115酵母菌株可表达分泌pIL-18,其表达在72h时达高峰,分泌量可达160mg/L,纯化的重组pIL-18蛋白具有显著的促进淋巴细胞增殖的活性,说明本试验已在毕赤酵母中在国内首次成功表达了具有生物学活性的pIL-18。
- 宋世斌景志忠陈国华王笑笑宗瑞谦
- 关键词：毕赤酵母纯化生物活性
- 纳米TiO_2光半导体溶胶对植物光合机能的影响被引量：7
- 2008年
- TiO2半导体颗粒的光催化机理类似于人工模拟光合作用,笔者初步探讨了其在植物体上对光合机能的影响;以锐钛型纳米TiO2光半导体溶胶为材料,在栽培试验中,对黄瓜喷施不同浓度的纳米TiO2溶胶,然后测定光合参数、根系活力及叶片丙二醛含量的变化;结果表明,黄瓜叶片喷施一定浓度的纳米TiO2溶胶材料后,在叶片表面形成透明、连续、稳定的TiO2薄膜,能显著促进光合速率的增加,同时根系活力得到提高。这为纳米TiO2光半导体材料在农业上的应用提供了一定的理论依据和技术参考。
- 张萍崔海信张志娟钟儒刚
- 关键词：纳米TIO2光半导体光合作用
- O型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及生物学特性分析被引量：1
- 2009年
- 以纯化的O型口蹄疫泛亚毒株O／YS／CHA／05抗原免疫BALB／c小鼠，在加强免疫3d后，取脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行融合，经间接ELISA法和间接免疫荧光法（IFA）筛选，获得2株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为4A8和1F6，同时确定二者均为O型口蹄疫病毒特异性单克隆抗体。中和试验和Western—blot分析结果表明，4A8和1F6均识别线性表位，无中和活性。亚类鉴定结果显示：4A8和1F6重链类型分别为IgG1和IgG2b；轻链类型均为κ。相加ELISA分析结果表明，两者针对的抗原位点相同或相近。
- 于永忠赵磊周国辉徐香玲于力
- 关键词：口蹄疫病毒单克隆抗体
- 两种阳离子纳米基因载体及植物基因介导效果的研究被引量：16
- 2009年
- 以阳离子聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)和壳聚糖(chitosan,CS)作为两种植物基因载体,分别制备了载基因PEI纳米粒(PEI/DNA)和壳聚糖-DNA纳米粒(CS/DNA),并对其形态、粒度分布、包封率、DNA结合的稳定性及纳米颗粒对DNA的保护等方面进行表征。并以GFP基因为报告基因进行植物细胞转染,比较两者转化效率。结果表明PEI/DNA纳米粒稳定性,对DNA的保护以及转染效率等方面均优于壳聚糖-DNA纳米粒。
- 宋瑜李颖崔海信李瑶
- 关键词：聚乙烯亚胺纳米粒基因载体转基因
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白在重组牛痘病毒中的表达与鉴定被引量：2
- 2010年
- 为重组表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)M蛋白,本研究将RT-PCR获得的PRRSV CH-1a株M蛋白基因,克隆于pMD18-T载体中,经测序鉴定正确后,亚克隆至牛痘病毒重组转移质粒pSC11中,构建了转移重组质粒pSC11-PRRSV-M。将pSC11-PRRSV-M在脂质体的介导下转染WR株牛痘病毒感染的TK-143细胞,在含有X-gal的琼脂培养基上通过蓝斑筛选含有PRRSV M基因的重组病毒rWR-PRRSV-M。Western blot与IFA检测表明,重组病毒成功表达了PRRSV M蛋白,而且所表达的蛋白保持了良好的免疫原性。动物实验表明,rWR-PRRSV-M所表达的PRRSV M蛋白在免疫小鼠体内诱生了抗PRRSV的抗体。rWR-PRRSV-M的构建,为进一步探讨PRRSV M蛋白免疫原性提供了基础数据,也为PRRS重组活载体疫苗的研究奠定了基础。
- 张维军田野林燕王群徐青元孙庆歌刘霓红杨涛田志军步志高童光志李文京吴东来
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白
