国家高技术研究发展计划(2006AA10A206)
- 作品数：44 被引量：205H指数：8
- 相关作者：焦新安张培君赵战勤贺云霞孙慧玲更多>>
- 相关机构：华中农业大学扬州大学首都师范大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 大肠杆菌Ee株SLT-IIeB与FedF基因在大肠杆菌中融合表达\及抗血清的中和特性
- 根据猪水肿病大肠杆菌Ee株主要免疫原性片段SLT-IIeB和FedF的基因序列,利用PCR技术克隆目的片段,并将SLT-IIeB和FedF基因依序串联于谷胱甘肽-S-转移酶(GST)表达系统的GST下游,在大肠杆菌中成功...
- 刘国平吴斌林艺远胡长敏郭爱珍金梅林陈焕春
- 文献传递
- 副猪嗜血杆菌外膜蛋白TbpB基因的克隆和表达
- 2011年
- 为了克隆和表达副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)外膜蛋白TbpB基因,试验采用基因工程的方法对已发布的HPS外膜蛋白P5序列进行相关序列分析,设计并合成引物,以HPS血清5型基因组为模板,通过PCR扩增HPS外膜蛋白P5编码基因,获得长为1 116 bp的预期基因片段。该基因编码372个氨基酸的蛋白质,预测分子质量约为41 ku,将该基因片段定向克隆至表达载体pGE X-6p-1中。结果表明:诱导表达后分子质量约为67 ku,与副猪嗜血杆菌阳性血清发生了特异性反应。说明该蛋白与抗体发生了反应,有一定免疫原性。
- 叶飞张培君田德雨孙慧玲王宏俊龚玉梅贺云霞
- 关键词：副猪嗜血杆菌克隆
- 抗菌肽CAP18在大肠杆菌中表达、纯化及活性的初步鉴定被引量：2
- 2008年
- 根据抗菌肽CAP18活性片段的氨基酸序列,采用SOE技术,设计合成了CAP18的编码基因,将其克隆至pMD18-T载体,进行序列测定后亚克隆至pET-32a(+)表达载体中,在E.coli BL21(DE3)中表达融合蛋白CAP18。经Ni2+亲和层析后回收CAP18融合蛋白,纯度达到了85%以上。对纯化的融合蛋白进行酶切,用液体生长抑制方法检测切割后样品的活性,结果表明重组抗菌肽CAP18对大肠杆菌具有抑制活性。
- 徐灵龙石星明王云峰史春林王玫孙妍童光志
- 关键词：融合基因抑菌活性
- 副猪嗜血杆菌15个血清型标准分离株对小鼠毒力的研究被引量：9
- 2011年
- 为了确定Balb/c小鼠是否适合作为副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)的试验动物模型,试验用1～15血清型HPS标准菌株感染Balb/c小鼠,每只小鼠接种量为1.0×109 cfu。结果表明:用血清型1,2,5,10,12,13,14接种的5只小鼠均死亡4只,用血清型4,15接种的5只小鼠分别死亡2,3只,用血清型3,6,7,8,9,11接种的5只小鼠均没有死亡;各血清型的毒力与猪体试验的结果基本相符。说明Balb/c小鼠适合作为副猪嗜血杆菌的试验动物模型。
- 贺云霞徐慧叶飞孙慧玲王宏俊龚玉梅张莉黄秀芬张培君
- 关键词：副猪嗜血杆菌标准菌株小鼠毒力
- 禽致病性大肠杆菌未知功能基因突变株的构建及致病特性分析
- 2015年
- 采用抑制差减杂交技术(SSH)对禽致病性大肠杆菌(APEC)高致病株E037(血清型O78)与非致病菌株K-12 MG1655进行基因组差异片段克隆与分析。从E037株中共检出17个特异性差异片段,选取其中的编号为88#的基因进行突变株的构建。通过PCR扩增出88#的目的基因片段,并插入到T-easy载体的多克隆位点中,随之克隆到p MEG-375自杀性载体中,构建自杀性载体p MEG375-88#,将突变载体转化到受体APEC E037中,根据同源重组原理,筛选出E03788#基因插入突变株E037-1。对21日龄白来航SPF鸡右胸气囊分别接种E037、E037-1株0.1 mL(108cfu/mL),在6,24和48 h分别扑杀SPF鸡,无菌采集血液、心脏、肝、脾、左肺、肾进行细菌学检查,同时进行病变观察。结果显示:接种鸡6 h后,E037-1在肝、脾和肺中的细菌数比E037明显降低,差异极显著(P<0.01);接种鸡24 h后,E037-1在心脏、肝、脾和肺中的细菌数与E037比较有所降低,差异显著(P<0.05);接种鸡48 h后,E037-1在心、肝中的细菌数比E037明显降低,差异极显著(P<0.01),说明E037-1突变株的致病性明显下降。结果显示88#基因可能是APEC的致病相关基因,其功能值得进一步研究。
- 刘静徐亚亚卢炜陈祥高崧
- 关键词：禽致病性大肠杆菌抑制差减杂交
- 稳定携带新城疫病毒DNA疫苗减毒沙门氏菌的构建及其免疫原性
- 采用PCR技术从重组质粒pVAX1-F中扩增出新城疫病毒JS5株的融合蛋白(F)基因,将其克隆入真核表达质粒pmcDNA3.1+中,获得重组表达质粒pmcDNA3.1-F。通过电穿孔转化法将重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门氏菌...
- 潘志明程宁宁游猛崔一晨黄金林焦新安刘秀梵
- 关键词：新城疫DNA疫苗减毒鼠伤寒沙门氏菌质粒稳定性免疫效力
- 文献传递
- 支气管败血波氏杆菌dnt基因的克隆、表达及活性鉴定被引量：3
- 2010年
- 通过PCR扩增获得支气管败血波氏杆菌的全长4 395 bpdnt基因,并利用pET-28a/BL21系统对其进行了融合表达。Western-blot检测结果表明,表达产物具有良好的免疫学活性。使用His-band purification kit纯化后,得到纯度为93.2%的融合蛋白HIS6-DNT。在乳鼠皮肤坏死试验中,表达产物HIS6-DNT和天然DNT均能导致乳鼠皮肤产生坏死性病变。在乳鼠皮肤坏死阻断试验中,兔抗HIS6-DNT血清能中和天然DNT,使其失去对乳鼠皮肤的坏死毒性。试验结果表明,重组蛋白具有天然DNT的生物学毒性和免疫原性,所产生的抗体具有中和活性,为DNT的结构和功能研究奠定了基础。
- 赵战勤薛云裴洁王臣丁轲程相朝
- 关键词：支气管败血波氏杆菌
- 融合蛋白MBP-enterocin A的表达、纯化及抗菌活性检测被引量：4
- 2010年
- 以重组质粒pGAIF为模板,PCR扩增编码细菌素enterocin A的基因片段OAH,克隆到表达载体pMAL-p2x中正确构建重组表达质粒pMA。将pMA转化大肠杆菌DH5α,构建enterocin A融合表达系统。加入IPTG诱导目的基因的表达,然后通过亲和层析方法纯化表达产物,并采用琼脂打孔扩散试验或者琼脂点种试验检测抗菌活性。SDS-PAGE分析结果显示,大肠杆菌表达系统能够高效表达可溶性的融合蛋白MBP-enterocin A,其相对分子质量与推测值(约47 000)相符。抗菌活性结果表明,MBP-enterocin A具有抗李斯特菌活性,而对金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠杆菌O157∶H7均不表现活性;以无害李斯特氏菌LIN3为指示菌,MBP-enterocin A纯化样品的抗菌活性可表示为800 BU/mL。
- 赵爱珍韩文瑜徐兴然
- 关键词：ENTEROCIN抗菌活性
- 选择性捕获禽病原性大肠杆菌体内转录序列被引量：8
- 2007年
- 采用选择性捕获转录序列(SCOTS)方法鉴定禽病原性大肠杆菌E037株(血清型O78)在感染SPF鸡过程中的转录表达基因。通过总RNA分离、cDNAs合成、PCR扩增和SCOTS对cDNAs选择和致病性特异转录序列的富集,致病性特异的cDNAs被分离鉴定,共获得31个转录序列(命名为aec),其中分别有2、1、4、14、2和8个aec序列与黏附素、LPS的合成、铁的摄取系统、质粒编码基因、噬菌体编码基因和一些其它功能基因相关;从气囊中分离到16个aec序列,心包膜中分离到15个aec序列;有3种与质粒编码基因相关序列在气囊和心包膜中都被分离到。结果显示APEC致病性特异序列包括黏附素、LPS的合成、铁的转运、质粒编码基因、噬菌体编码基因和一些其它功能基因等。通过SCOTS方法建立了一种体内表达致病性特异基因的方法和APEC在自然宿主感染模型中致病性相关基因的表达谱的筛选方法。
- 陈祥高崧王晓泉焦新安刘秀梵
- 关键词：禽病原性大肠杆菌
- 副猪嗜血杆菌EZ-Tn5转座子插入突变体库的构建及减毒株的筛选(英文)被引量：1
- 2011年
- [目的]获得副猪嗜血杆菌减毒株.[方法]应用转座子技术构建转座子插入突变体库,卡那抗性筛选阳性菌株,PCR扩增卡那特异片段去除假阳性,小鼠感染试验检测突变株毒力,并对获得的减毒株进行生物学特性检测。[结果]所获得减毒突变菌株具有与野毒株相似的增殖能力,传代后毒力稳定,遗传学特性稳定。[结论]该研究结果为进一步探讨HPS毒力因子、致病机制奠定了基础。
- 贺云霞徐慧叶飞孙慧玲王宏俊龚玉梅张莉黄秀芬张培君
- 关键词：副猪嗜血杆菌转座子突变体库减毒株
