广东省自然科学基金(013072)
- 作品数：52 被引量：167H指数：7
- 相关作者：黄宗海俞金龙厉周苏国强李强更多>>
- 相关机构：南方医科大学中国人民解放军第一军医大学广州军区广州总医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家高技术研究发展计划深圳市科技计划项目更多>>
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- TNP-470对大鼠血管平滑肌细胞生长的抑制作用及细胞周期的影响
- 2002年
- 目的研究TNP-470对血管平滑肌细胞生长的影响。方法采用MTT法检测TNP-470对体外培养的SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测TNP-470对细胞周期分布及其相关蛋白CDK4、CyclinD1和p27表达的影响。结果TNP-470对血管平滑肌细胞生长具有抑制作用,IC50约为23.3μg/L。TNP-470处理组细胞S期比率[(15.43±5.16)%]和G2/M期比率[(9.49±2.70)%]明显低于对照组[(22.29±6.80)%、(16.51±8.61)%,P<0.05,P<0.05];而G0/G1期则相反,G0/G1期比率[(75.14±6.62)%]显著高于对照组[(60.38±7.23)%,P<0.001];处理组PI(23.76±7.92)明显小于对照组(39.62±7.23,P<0.001)。TNP-470处理组CyclinD1蛋白(27.93±4.22)和CDK4蛋白(51.80±6.65)表达明显低于对照组(32.13±3.28、59.65±7.34,P<0.05、P<0.05);但p27蛋白(51.27±3.75)表达较对照组(39.62±7.23)显著增多(P<0.001)。结论TNP-470通过细胞周期阻滞作用抑制血管平滑肌细胞的生长,该抑制作用与TNP-470影响VSMCs中CyclinD1、CDK4和p27蛋白的表达有关。
- 范应方黄宗海聂晶
- 关键词：TNP-470细胞周期血管平滑肌细胞
- 双自杀基因系统对胰腺癌细胞Capan-2的特异性杀伤作用被引量：1
- 2007年
- 目的:研究腺病毒介导的VEGF启动子驱动CD/TK融合基因系统(Ad-VEGFP-CDTK)对胰腺癌细胞Capan-2的特异性杀伤作用。方法:重组腺病毒载体体外感染表达VEGF的Capan-2细胞株,观察其感染效率,并以RT-PCR方法检测转基因细胞内CDTK的表达;然后给予不同浓度的前药更昔洛韦(ganciclovir,GCV)和5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC),MTT法观察该体系对Capan-2细胞增殖的影响及其旁观者效应;电镜观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞周期和DNA含量的变化;建立小鼠Capan-2细胞动物模型,计算抑瘤率。结果:两种腺病毒对Capan-2的感染率相似,其感染率随腺病毒效价的增高而递增。RT-PCR方法检测发现转染Ad-VEGFP-CDTK的细胞有目的基因表达。MTT法检测显示前药呈剂量依赖性抑制Capan-2细胞生长,且观察到该体系明显的旁观者效应。电镜下可见Capan-2细胞有凋亡改变;流式细胞仪测定用药组出现典型的凋亡峰,细胞周期分析显示治疗后细胞G0/G1期比率增多,G2/M及S期细胞减少。体内裸鼠移植瘤模型的建立成功,实验组肿瘤体积缩小。结论:VEGF启动子可调控双自杀基因体系选择性杀伤胰腺癌细胞Capan-2,并诱导细胞凋亡,可显著抑制人胰腺癌裸鼠移植瘤的生长。
- 孔恒黄宗海于洪波韩新军闫振宇陈旭
- 关键词：胰腺肿瘤异种移植模型抗肿瘤试验
- KDR启动子驱动的双自杀基因对实体瘤细胞及血管内皮细胞的靶向杀伤作用被引量：5
- 2005年
- 目的腺病毒介导KDR启动子驱动的CDglyTK融合基因(AdKDRCDglyTK)体系对实体肿瘤细胞及血管内皮细胞靶向杀伤作用。方法分别将KDR和CMV启动子融合基因腺病毒体外感染表达KDR的ECV304、MCF7、MGC803及SW620细胞株和不表达KDR的LS174T细胞株,并给予不同浓度的前药5FC和/或GCV,观察其对各细胞株的杀伤效应及其旁观者效应。结果两种腺病毒对各细胞的感染率随腺病毒滴度的递增而增加,当MOI为200时,各细胞株均达约100%感染;感染AdCMVCDglyTK的各组细胞和感染AdKDRCDglyTK的ECV304、MCF7、MGC803及SW620对前药具有较高的敏感性,且其敏感性差异无统计学意义(P均>0.05);与其他细胞相比,感染AdKDRCDglyTK的LS174T细胞对前药不敏感(P<0.01);且观察到该体系明显的旁观者效应。结论KDR基因启动子调控的CDglyTK融合基因体系可选择性杀伤实体肿瘤细胞及血管内皮细胞。
- 苏国强黄宗海苏刚俞金龙厉周范应方周广军林荣凯陈建雄
- 关键词：KDR启动子双自杀基因实体瘤细胞血管内皮细胞靶向杀伤
- 新法制备含VEGF启动子驱动的CD/TK融合基因重组腺病毒被引量：5
- 2004年
- 目的 应用简化的细菌内同源重组法高效制备含血管内皮细胞生长因子(VEGF)启动子驱动的CD／TK融合基因重组腺病毒。方法 先以氯化钙法替代电穿孔法将腺病毒基因组质粒pAdEasy-1导入BJ5183细菌，制备BJ5183pAdEasy-1细菌；再以后者作感受态细菌，与线性化的转移质粒pAdtrack-VEGFP-CDglyTK进行同源重组，获得重组腺病毒质粒pAdEasy-VEGFP-CDglyTK，转染293细胞，制备含VEGF启动子驱动的CD／TK融合基因重组腺病毒。结果 构建重组腺病毒质粒的成功率为60％(6／10)。转染293细胞后7～12d可收获病毒。结论 简化的细菌内同源重组法简便易行，重组效率较高，易于推广应用。
- 黄元媛黄宗海陈建发汤福祥杨文宇郑全车小燕
- 关键词：VEGF启动子重组腺病毒血管内皮细胞生长因子基因治疗
- 双自杀基因重组腺病毒对胰腺癌细胞特异性杀伤作用
- 2008年
- 目的 研究腺病毒介导的KDR启动子驱动CD／TK融合基因系统（AdKDRCDTK）对胰腺癌细胞Capan-2特异性的杀伤作用。方法 重组腺病毒体外感染表达KDR的Capan-2细胞株，用不表达KDR的肝癌细胞HepG2做对照，观察其感染效率并以RT-PCR方法检测转基因细胞CDTK的表达，然后给予不同浓度的前药更昔洛韦（ganciclovir，GCV）和5-氟胞嘧啶（5-fluorocytosine，5-FC），MTT法观察该体系对Capan-2和HepG2细胞生长增殖的影响及其旁观者效应；电镜观察细胞的病变；流式细胞仪检测细胞周期的变化和DNA含量的变化。建立Capatv-2裸鼠皮下移植瘤模型，瘤内注射Ad-KDR-CD／TK，腹腔注射前药GCV（50mg·kg^-1·d^-1）和5-FC（500mg·kg^-1·d^-1）14d，观察肿瘤生长抑制效应。结果 腺病毒对两种细胞株的感染率相似，其感染率随腺病毒滴度的增高而递增。RT-PCR方法检测发现转染Ad-KDR-CDTK的Capan-2细胞有目的基因表达。MTT法检测显示前药呈剂量依赖性抑制Capan-2生长，而不表达KDR的肝癌细胞HepG2对前药不敏感，且观察到该体系对Capan-2明显的旁观者效应。电镜下可见Capan-2有凋亡改变。用流式细胞仪测定用药组出现典型的凋亡峰；细胞周期分析显示治疗后细胞G0-G1，期比率增多，G2-M及S期细胞减少。在Capan-2裸鼠移植瘤模型中，该双自杀基因系统能够显著抑制肿瘤的生长。结论 KDR启动子可调控双自杀基因体系选择性杀伤胰腺癌细胞Capan-2，诱导胰腺癌细胞凋亡，并可显著抑制人胰腺癌裸鼠移植瘤的生长。
- 闫振宇陈旭孔恒黄宗海俞金龙厉周
- 关键词：胰腺癌自杀基因治疗腺病毒KDR启动子
- Ad-VEGFP-CD/TK系统诱导胃癌细胞凋亡的实验研究被引量：1
- 2007年
- 目的探讨腺病毒介导的VEGF启动子驱动的CD/TK双自杀基因体系(Ad-VEGFP-CD/TK)对胃癌细胞SGC-7901的体外杀伤作用。方法用重组腺病毒Ad-VEGFP-CD/TK体外感染表达VEGF的SGC-7901细胞,荧光显微镜观察其感染效率,然后给予前药GCV和5-FC,用光镜、透射电镜观察及流式细胞术等方法观察细胞凋亡、细胞周期、细胞内DNA含量及钙离子浓度的变化。结果腺病毒的感染率随病毒滴度的增高而递增,在感染复数为100时,前药GCV和5-FC在一定浓度搭配范围内呈剂量和时间依赖性地诱导SGC-7901细胞凋亡,电镜下可见细胞凋亡的典型改变。用流式细胞仪测定用药组出现典型的凋亡峰;细胞周期分析显示治疗后细胞G0-G1期比率增多,G2-M及S期细胞减少;此外,前药还可以引起细胞内Ca2+浓度持续增加。结论VEGF启动子可调控双自杀基因系统选择性诱导表达VEGF的SGC-7901细胞凋亡,其机制与细胞内钙离子浓度升高有关。
- 孔恒黄宗海厉周俞金龙陈海金韩新军
- 关键词：自杀基因治疗腺病毒凋亡
- “两步转化法”高效制备携带自杀基因的重组腺病毒载体被引量：6
- 2004年
- 目的采用“两步转化法”高效制备含胞嘧啶脱氨酶(CD)自杀基因的腺病毒重组载体。方法将质粒pAdEasy-1线性化后转化于BJ5183菌,制备AdEasy-1细菌;自载体pBS-CD中切出CD基因,亚克隆至穿梭质粒pAdtrackCMV上,构建的pAdtrackCMV-CD线性化后转化AdEasy-1细菌,抽提同源重组腺病毒质粒,PacⅠ酶切后转染293细胞,在293细胞中包装与扩增,利用GFP报告基因进行滴度测定。同时按“一步转化法”进行同样的重组腺病毒制备,比较二者的优劣性。结果“两步转化法”终产物17个克隆中13个正确,正确率为76.5%(13/17);“一步转化法”重组产物17个克隆中有2个正确,正确率为11.8%(2/17),两者具有显著性差异(P=0.000 17)。结论“两步转化法”细菌内同源重组是一种更高效、更方便的重组腺病毒制备方法。
- 杨文宇黄宗海汤福祥钱勇车小燕
- 关键词：自杀基因重组腺病毒载体恶性肿瘤基因治疗
- 重组腺病毒介导的KDR-CDglyTK基因诱导人胃癌细胞凋亡的研究被引量：4
- 2007年
- 目的 探讨KDR启动子驱动双自杀基因体系对人胃癌细胞靶向治疗的作用。方法用重组腺病毒AdEasy-KDR—CDglyTK体外感染SCG7901细胞和HepG2细胞，观察该体系对SCG7901细胞的杀伤效应。应用透射电镜、Hoechest33258／PI染色、流式细胞仪观察细胞超微结构、细胞凋亡率和细胞周期的变化。建立小鼠SCG7901细胞动物模型，计算抑瘤率。用TUNEL法检测细胞凋亡率。结果 受感染SCG7901细胞和HepG2细胞中均有绿色荧光蛋白的表达。已转染腺病毒的SCG7901细胞和HepG2细胞的存活率分别为（21．5±3．2）％和（89．1±3．4）％，两种细胞表现出对前药不同的敏感性（t=25．23，P=0．00）。流式细胞术检测表明该体系抑制SCG7901细胞的DNA合成，亚二倍峰数值之间差异有统计学意义（t=8012，P=0．00）。Hoechest33258／PI染色和电镜下可见SCG7901细胞有凋亡改变。裸鼠移植瘤的肿瘤体积明显缩小。实验组肿瘤细胞凋亡指数为（36±6）％，较对照组显著增加（P=0．00）。结论 KDR启动子可以调控融合基因体系在体外选择性地杀伤人胃癌SCG7901细胞，并且诱导体内外人胃癌细胞的凋亡。
- 黄宗海李强俞金龙苏国强厉周周广军
- 关键词：细胞凋亡转录启动子
- KDR启动子驱动双自杀基因诱导胃癌细胞凋亡的实验研究被引量：1
- 2006年
- 目的探讨KDR启动子驱动双自杀基因体系对胃癌细胞凋亡的诱导作用。方法以重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染表达KDR的SCG7901细胞株和不表达KDR的HepG2细胞株,并给予不同浓度的前药GCV和(或)5-FC,观察该体系对SCG7901细胞的杀伤效应。分别应用透射电镜、Hoechest33258/PI染色、流式细胞仪观察细胞超微结构、细胞凋亡率和细胞周期的变化。结果携带双自杀基因(CDglyTK)和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体转染后,95%以上SCG7901和HepG2细胞中有GFP表达。表达KDR的SCG7901细胞对前药具有较高的敏感性,不表达KDR的HepG2细胞对前药不敏感(P<0·01)。两种前药联合应用优于任一前药单独应用的疗效(P<0·01)。流式细胞术检测表明该体系可抑制SCG7901细胞DNA的合成,表现为S期细胞比例增高及G2期细胞减少。同时,Hoechest33258/PI染色和电镜下可见SCG7901有凋亡改变。结论KDR启动子可以调控融合基因体系选择性地杀伤人胃癌SCG7901细胞,并且该体系可以诱导胃癌细胞凋亡。
- 李强黄宗海苏国强俞金龙厉周周光军
- 关键词：KDR启动子自杀基因治疗腺病毒
- KDR启动子介导CD/TK双自杀基因重组体腺病毒的高效构建被引量：1
- 2005年
- 苏国强黄宗海俞金龙厉周范应方宋慧娟张进华
- 关键词：肿瘤自杀基因腺病毒载体
