浙江省自然科学基金(303648)
- 作品数：19 被引量：79H指数：5
- 相关作者：张怀勤杨德业黄伟剑肖方毅黄晓燕更多>>
- 相关机构：温州医学院附属第一医院温州医学院附属第二医院复旦大学上海医学院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金温州市科技局科研基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 姜黄素对内皮祖细胞功能及内皮型一氧化氮合酶的影响被引量：14
- 2008年
- 目的观察姜黄素对体外培养的人外周血内皮祖细胞(EPCs)数量及功能的影响。方法采用贴壁选择法培养人外周EPCs,培养6 d后,收集贴壁细胞并加入姜黄素(0、5、10、15μmol/L)培养一定时间(6、12、24和48 h)。荧光显微镜鉴定EPCs,分别观察EPCs的体外增殖、黏附、迁移、体外血管生成能力。Griess法检测NO分泌量,并RT-PCR半定量测定eNOS基因表达。结果姜黄素增加外周血EPCs的数量,改善EPCs的体外增殖、黏附、迁移、体外血管生成能力(P<0.01)。并上调eNOS基因表达,促进EPCs来源的NO的释放(P<0.01)。结论姜黄素增加体外EPCs数量及改善其功能,上调eNOS基因表达并增加EPCs来源的NO分泌。
- 吴钟伟张怀勤黄伟剑杨德业徐家窈
- 关键词：内皮祖细胞姜黄素内皮型一氧化氮合成酶
- 内皮祖细胞培养条件的正交设计研究被引量：9
- 2005年
- 目的:研究内皮祖细胞(EPCs)培养的适宜条件。方法:以L827正交表安排影响FPCs扩增贴壁的几个主要因素,光镜下观察集落形成,流式细胞术分析CD34、VE-Cadherin双阳性细胞,以此为指标分析各因素对EPCs培养的影响。结果:血管内皮生长因子(VEGF)及接种密度对集落形成影响显著, 内皮细胞生长添加剂(ECGS)及纤维连接蛋白皿底包被无影响。4个因素对EPCs得率均有影响,且VEGF 及接种密度之间尚有交互作用。结论:EPCs培养的适宜条件为:皿底包被纤维连接蛋白,5×106/cm2接种密度,VEGF 10 ng/ml及ECGS 150μg/m1。
- 张怀勤季亢挺杨德业黄晓燕林捷黄伟剑徐力辛
- 单个核细胞的接种密度对贴壁筛选法培养内皮祖细胞增殖的影响被引量：7
- 2006年
- 目的:探讨单个核细胞接种密度对内皮祖细胞体外培养扩增的影响。方法:采集正常脐血,用密度梯度离心法分离单个核细胞并接种在包被纤维连接蛋白的24孔培养板中。按接种的密度分为5组,即1×106/cm2,2×106/cm2,3×106/cm2,4×106/cm2及5×106/cm2。在培养的第7天,计数各组每孔细胞的集落数和贴壁细胞数。用流式细胞术和免疫荧光染色法对细胞的表面标志及功能进行鉴定。结果:以不同密度接种的各组每1×106个单个核细胞得到的集落数和贴壁细胞数不同。3×106/cm2组的细胞集落和细胞数最多,细胞的集落数和贴壁细胞数具有良好的相关性。结论:贴壁筛选法培养内皮祖细胞,脐血单个核细胞接种密度以3×106/cm2为宜,通过计数细胞集落可粗略估计内皮祖细胞的增殖能力。
- 肖刚峰张怀勤季亢挺邓武黄晓燕
- 关键词：细胞培养内皮祖细胞单个核细胞
- ADMA对内皮生长晕细胞凋亡及其相关p38丝裂素活化蛋白激酶表达的影响被引量：4
- 2010年
- 目的:探讨非对称性二甲基精氨酸(ADMA)对内皮生长晕细胞(EOCs)凋亡和黏附能力的影响以及凋亡相关p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)表达水平的变化。方法:分离脐血中单个核细胞并原代培养扩增内皮生长晕细胞,免疫细胞化学染色和荧光染色法鉴定其内皮细胞特性。将浓度为0、1、5、10、30μmol/L ADMA与内皮生长晕细胞作用48 h,流式细胞仪检测细胞凋亡率,DAPI染色及AnnexinV/PI双染观察凋亡细胞核形态变化。在倒置显微镜下观察计数重黏附细胞数来测定细胞黏附能力。用特异性的phospho-p38MAPK抗体的W esternb lotting检测p38MAPK的活性。结果:采用贴壁法培养的细胞具有多种内皮细胞特性。ADMA(1-30μmol/L)诱导内皮生长晕细胞的凋亡(P<0.01),同时ADMA(5-30μmol/L)使phospho-p38MAPK蛋白表达增加,两者作用均呈浓度依赖性。ADMA作用组和对照组相比,激光共聚焦显微镜下可见更显著的细胞凋亡形态学改变。除1μmol/L ADMA外,5、10、30μmol/L ADMA均可抑制内皮生长晕细胞的黏附能力。结论:ADMA能诱导内皮生长晕细胞发生凋亡并抑制其黏附能力,ADMA诱导内皮生长晕细胞发生凋亡可能与p38 MAPK磷酸化水平上升有关。
- 夏雪张怀勤贾红梅林以诺黄伟剑叶盛邵小琳
- 关键词：精氨酸细胞凋亡P38MAPK
- 兔外周血两种内皮祖细胞的分离培养和鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的研究新西兰大白兔外周血两种内皮祖细胞(EPC和EOC)的分离培养和鉴定。方法由兔耳中央动脉采集外周血,以密度梯度离心法分离单个核细胞(MNC),置于EGM-2培养基中培养。用DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-acLDL)摄取试验和FITC标记的荆豆凝集素(FITC-UEA-1)结合试验,检测flk-1表达的免疫荧光法和检测CD34、Ⅷ因子表达的免疫组化染色法,以及体外血管形成试验对EPC/EOC进行鉴定。结果从新西兰大白兔外周血MNC中可成功地培养出EPC和EOC。培养第7天的EPC和第16天的EOC均能吞噬ac-LDL并与凝集素UEA-1相结合,同时均可表达CD34、flk-1和Ⅷ因子相关抗原。EOC在matrigel凝胶上可形成血管腔样的结构。结论用密度梯度离心法从兔外周血中分离的MNC在一定的培养条件下,能分化成为EPC和EOC,为后续的实验研究提供了细胞来源。
- 肖方毅张怀勤余华杨德业黄伟剑周浩
- 关键词：外周血内皮祖细胞
- 不同细胞生长因子组合对培养的内皮祖细胞集落形成及黏附能力的影响被引量：1
- 2006年
- 季亢挺张怀勤杨鹏麟李海鹰杨德业
- 关键词：血管内皮细胞生长因子内皮祖细胞细胞培养
- 兔外周血内皮祖细胞的分离、培养和鉴定
- 2007年
- 目的:研究新西兰大白兔外周血内皮祖细胞(EOCs)的分离、培养和鉴定方法,为后续实验研究做好准备。方法:通过耳中央动脉采集兔外周血,密度梯度离心法分离单个核细胞(MNCs),在EGM-2培养基的诱导分化下,获得EOCs。通过标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-ac-LDL)摄取试验、荆豆凝集素(FITC-UEA-1)结合实验、CD34与VIII因子免疫组化染色、flk-1免疫荧光染色、体外血管形成实验以及细胞NO分泌功能测定,从细胞表面标记和细胞功能两方面对细胞进行鉴定。结果:新西兰大白兔外周血MNCs在体外培养可成功获得EOCs,EOCs能稳定摄取ac-LDL并与UEA-1结合,一致表达CD34、flk-1和VIII因子相关抗原。EOCs能分泌NO,并能在matrigel凝胶上形成稳定的血管腔样结构。结论:密度梯度离心法分离的兔外周血MNCs在一定的培养条件下能诱导分化成为EOCs。
- 肖方毅蔡雪黎张怀勤黄伟剑肖刚峰杨德业余华周浩
- 关键词：外周血细胞培养内皮祖细胞单个核细胞
- 自体内皮祖细胞移植修复兔动脉内皮损伤被引量：2
- 2007年
- 目的观察不同数量的内皮祖细胞移植对内膜球囊损伤血管修复的影响。方法密度梯度离心法分离兔外周血单个核细胞,以EGM-2培养基培养7天,获得兔外周血内皮祖细胞。分高细胞数量移植组(5×105个细胞)和低细胞数量移植组(2×105个细胞),将相应数量的内皮祖细胞重悬于100μL生理盐水中移植至兔内膜球囊损伤血管局部,对照组仅注入100μL生理盐水。同时用CM-DiI标记内皮祖细胞移植,进行细胞示踪。4周后,处死动物,荧光显微镜下观察CM-DiI标记细胞的分布,并测量各组内膜损伤血管再生内皮覆盖率和新生内膜增生程度。结果荧光显微镜下发现荧光标记的内皮祖细胞分布在血管的中膜层、新生内膜层和内膜表面。内皮祖细胞移植可显著促进内膜损伤血管的再内皮化,以高细胞数量移植组为著,同时内皮祖细胞移植也大大减少了新生内膜的形成。结论内皮祖细胞移植可修复内膜球囊损伤血管,高细胞数量移植有更显著的效果。
- 肖方毅张怀勤蔡雪黎黄伟剑林以诺周浩杨德业林杰余华
- 关键词：内科学内皮祖细胞细胞移植再内皮化
- 内皮祖细胞移植治疗心血管疾病的新策略:基因修饰被引量：5
- 2006年
- 肖方毅张怀勤
- 关键词：细胞移植治疗心血管疾病内皮祖细胞基因修饰CD34^+细胞EPCS
- 新的组织工程种子细胞——内皮祖细胞被引量：4
- 2005年
- 内皮祖细胞作为一种在血管领域的干细胞在组织工程中有着广阔的应用前景。内皮祖细胞取材方便,参与新生血管的形成,具有成熟内皮细胞相似的特性。因此,内皮祖细胞可能是组织工程血管、血管植入物再内皮化以及构建组织工程器官血管网络的种子细胞的理想来源。简单介绍了内皮祖细胞的来源、特性以及体外扩增技术,并对其在组织工程中应用的研究进展做一回顾。
- 肖刚峰张怀勤
- 关键词：干细胞血管内皮祖细胞
