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上海市浦江人才计划项目(07pj14069)
作品数:
1
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相关作者:
徐龙妹
夏强
邓维
张建军
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相关机构:
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发文基金:
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作者
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薛峰
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张程
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夏韵
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邓维
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夏强
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徐龙妹
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胃肠病学
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1篇
2010
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重组人肝细胞生长因子激活因子质粒的构建、表达和功能研究
2010年
背景:肝细胞生长因子激活因子(HGFA)是活化单链前体HGF(pro—HGF)成为有生物学功能的HGF的关键酶.在受损组织器官的修复和再生中发挥重要作用。目的:制备rhHGFA—Fc融合蛋白并证实其具有肝细胞保护功能。方法:采用基因重组技术构建表达人源化HGFA成熟肽段与人IgGFc段融合蛋白的载体,以脂质体介导法转染人胚肾293细胞。纯化293细胞表达产物,以蛋白质印迹法鉴定纯化蛋白(rhHGFA—Fc融合蛋白)及其对pr0.HGF的酶切活性,以流式细胞术检测融合蛋白介导的肝细胞凋亡抑制作用。结果:SDS—PAGE显示转染重组质粒的293细胞总蛋白纯化产物在62kDa处显示单一蛋白条带。蛋白质印迹法结果显示纯化的rhHGFA-Fc融合蛋白能与抗hHGFA单克隆抗体发生特异性反应,并将pro-HGF酶切为仅链和p链,酶切活性呈剂量依赖性,半效酶切活性(IC50)为8.22nmol/L;流式细胞术结果显示融合蛋白通过激活pro.HGF发挥其抑制肝细胞凋亡的作用。结论:293细胞表达的rhHGFA—Fc融合蛋白纯度高、酶切活性强,可高效激活pro—HGF,对于肝组织严重损伤,特别是肝硬化基础上肝损伤的治疗具有潜在价值。
薛峰
周学明
徐龙妹
张程
邓维
夏韵
张建军
夏强
关键词:
肝细胞生长因子
重组融合蛋白质类
细胞凋亡
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