贵州省科学技术基金(2012GZ8178)
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
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- 相关机构：贵阳医学院滨州医学院更多>>
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- LDLR^(-/-)小鼠中脂代谢相关基因的表达被引量：3
- 2012年
- 目的分析LDLR基因敲除小鼠体内脂代谢相关基因ApoB100、PPARα、LXRα以及ABCA1与野生型相比表达水平的差异情况。方法应用多重PCR的方法对LDLR-/-小鼠基因型进行鉴定;接着分别对LDLR-/-小鼠和野生型小鼠脂代谢相关基因的mRNA相对丰度以及蛋白表达水平进行qRT-PCR、ELISA分析。结果与野生型相比,LDLR-/-小鼠中ApoB100、PPARα的mRNA及蛋白表达均上调(P<0.05);ABCA1的表达水平下降(P<0.01),蛋白水平上的下降幅度更为明显;而LXRα不管在mRNA或蛋白水平上均检测不到差异表达。结论 LDLR基因功能的缺失对不同的脂类代谢相关基因的表达产生不同的影响。本研究有助于人们进一步了解家族性高胆固醇血症的发病机制,同时也为药物设计中靶位点的选择提供参考价值。
- 欧海龙严忠海雷霆雯
- 关键词：脂代谢基因表达
- 利用RNA干扰技术抑制小鼠羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶基因的表达被引量：3
- 2013年
- 目的为了探寻一种更有效的家族性高胆固醇血症(FH)基因治疗新途径,通过慢病毒介导RNA干扰的方法在H22细胞系及C57BL/6J纯系小鼠中抑制内源性羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMG-CoAR)基因表达进行研究。方法从HMG-CoAR基因序列中选择三段作为靶序列(T1、T2和T3),并构建重组慢病毒RNAi载体;经体外包装后,分别感染H22细胞系及注射小鼠。通过qRT-PCR检测HMG-CoAR mRNA丰度;利用WesternBlot、ELISA方法分析HMG-CoAR的表达水平。结果与空载体对照相比,三个实验组中稳定转染细胞的HMG-CoAR表达水平显著降低(P<0.05),同时感染5天后小鼠的肝脏HMG-CoAR mRNA水平、蛋白含量以及血浆中HMG-CoAR表达均显著降低(P<0.05),其中T3位点的抑制效率最高,是空质粒对照的1/3。另外,对三个载体的持续性抑制能力分析显示,在处理后的至少50天内,三个实验组小鼠中HMG-CoAR表达量均有效地被抑制,其中T1靶点的抑制效果最为稳定,而T3靶点的波动最大,但抑制效率一直最高。结论三个重组慢病毒RNAi载体均可显著抑制内源性HMG-CoAR表达,可为下一步试图通过下调HMG-CoAR表达的方式,降低FH患者体内胆固醇水平的FH基因治疗奠定基础。
- 欧海龙严忠海焦飞
- 关键词：RNA干扰胆固醇家族性高胆固醇血症基因治疗
