江苏省高校自然科学研究项目(07KJD230052)
- 作品数：4 被引量：21H指数：3
- 相关作者：郭锡杰沈兴家朱晨汪生鹏孙霞更多>>
- 相关机构：中国农业科学院蚕业研究所江苏科技大学更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目国家重点基础研究发展计划江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 家蚕孵化酶样基因BmHEL的原核表达及蛋白纯化与功能鉴定被引量：4
- 2010年
- 孵化酶(hatchingenzyme,HE)是后生动物卵孵化过程中起关键作用的一类蛋白酶。在已完成全长967bp的家蚕孵化酶样基因(BmHEL)克隆及其转录特性分析的基础上,研究了该基因在原核表达系统的表达、产物纯化及其对家蚕卵壳的降解功能。以全长BmHEL质粒DNA为模板,用PCR方法分别获得了该基因的开放阅读框(BmHELORF,885bp)、缺失信号肽编码区(BmHELa,834bp)和推测成熟酶功能编码区(BmHELb,624bp)的3个片段,并亚克隆入原核表达载体pET28a(+),在大肠杆菌(E.coli)BL21中进行表达。表达的3种外源蛋白均以包涵体形式存在,获得含有6×His-Tag标签的融合蛋白,其分子质量分别为33.4、31.8、24.0kD。通过Westernblot方法检测到了用Ni-NTA亲和层析柱纯化的目的蛋白。纯化复性后的3种孵化酶对家蚕卵壳底物有一定降解活性,其中BmHELORF的活性最高,BmHELb的活性最低。在pH7.1反应条件下3种酶的活性比pH9.5时高。研究结果在蛋白质水平上进一步证实家蚕孵化酶样蛋白参与了蚕卵孵化这一重要生命过程。
- 唐顺明卢福浩沈兴家王娜丁丽平赵巧玲张国政郭锡杰
- 关键词：家蚕原核表达蛋白纯化降解
- 家蚕二化性品种(品系)转基因用蚕卵的预处理技术研究被引量：5
- 2009年
- 家蚕为卵滞育昆虫,二化性家蚕品种（品系）的化性由上代卵期温度与光照等调控。将若干个二化性家蚕品种（品系）以1718℃温度催青诱导子代蚕卵非滞育,筛选出1个经济性状较优的实用品种＂秋丰＂、1个突变品系P33,二者非滞育卵圈比例分别达到96.4%和89.6%,正常催青的良卵实用孵化率分别达到96.11%和98.58%,解决了采用显微注射法以家蚕实用品种构建转基因系统过程中因蚕卵滞育不能及时孵化的难题。另对利用20%盐酸-2%甲醛混合液刺激解除蚕卵滞育的方法以及非滞育蚕卵表面用70%乙醇消毒的方法进行了尝试,前者可以获得96%以上的孵化率,后者可以缩短蚕卵预处理时间。
- 唐顺明沈兴家赵巧玲章扬张国政郭锡杰
- 关键词：家蚕催青温度转基因
- 家蚕孵化酶样蛋白的表达、纯化与功能鉴定
- 孵化酶是后生动物胚胎孵化过程中起关键作用的一类蛋白酶。前文我们报道了全长家蚕孵化酶样基因（BmHEL）（967bp）克隆及其转录特性,初步推定其参与了家蚕孵化行为。本文对该基因在原核表达系统表达、纯化及其对家蚕卵壳的降解...
- 唐顺明卢福浩沈兴家王娜丁丽平赵巧玲张国政郭锡杰
- 关键词：原核表达纯化
- 文献传递
- 感染BmNPV家蚕幼虫马氏管蛋白质组的初探
- 本文旨在探讨家蚕幼虫马氏管的蛋白质组及其免疫功能。我们构建了重组BmNPV-EGFP,注射感染家蚕,调查病毒在各组织感染时相（以呈现EGFP为指标）;以呈现EGFP的马氏管为材料,采用双向电泳（2-DE）技术对其蛋白组进...
- 王娜唐顺明裘智勇丁丽平赵巧玲沈兴家
- 关键词：家蚕马氏管BMNPV双向电泳蛋白质组
- 文献传递
- 家蚕丝素基因表达水平的定量分析被引量：12
- 2009年
- 采用实时定量RT-PCR方法,对丝素轻链基因(fib-L)、丝素重链基因(fib-H)、P25基因在家蚕幼虫不同组织和不同发育时期的表达进行了定量分析。结果发现3种丝素基因除主要在5龄幼虫的后部丝腺中表达外,在其它组织如脂肪体和中部丝腺中也有一定程度的表达;在4龄眠期的后部丝腺中3种丝素基因也有一定的表达水平,其中fib-L在这一时期的表达量较高。同时发现在5龄第3天和第5天的后部丝腺中,fib-H、fib-L与P25在mR-NA水平上的摩尔比分别为9∶18∶1和19∶32∶1,推测丝素基因的表达可能具有转录后调控,此结果说明家蚕丝素基因的表达可能具有更加精细的调控机制。
- 孙霞朱晨汪生鹏沈小绢郭锡杰
- 关键词：家蚕丝素基因实时定量RT-PCR发育时期
- 家蚕POU因子功能域的初步研究被引量：1
- 2009年
- 为了利用酵母双杂交系统研究家蚕POU因子的相互作用蛋白,构建了包含家蚕POU-M2基因的诱饵质粒和猎物质粒,发现包含全长POU-M2的诱饵质粒和猎物质粒对酵母具有毒性和自激活现象。对POU-M2进行结构域分析,发现其构建的诱饵质粒、猎物质粒产生毒性与自激活现象来源于POU-M2因子羧基端POU结构域的DNA结合能力。POU-M2因子的转录激活域为氨基端约140个氨基酸区段,其中氨基端约100个氨基酸为激活作用的重要区段。鉴定发现POU结构域中的POUH区(POU同源结构域)对POU结构域与DNA的结合起主要作用,POUS区(POU特异性结构域)可以增强POU结构域与DNA的结合能力。最终采用截去POU氨基端激活区的片段作为酵母双杂交文库筛选的诱饵质粒。
- 朱晨孙霞汪生鹏沈兴家郭锡杰
- 关键词：家蚕酵母双杂交毒性自激活
